miR-302 b-3 p靶向AKT1调节皮肤成纤维细胞衰老的作用机制

目的 探讨miR-302b-3p靶向丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)1调节皮肤成纤维细胞衰老的作用及其分子机制.方法 建立复制性细胞衰老模型后,采用real-time PCR法检测细胞miR-302b-3p的表达情况;采用生物信息学软件分析miR-302b-3p的靶基因;分别将miR-302b-3p模拟物(mimic)及抑制剂(inhibitor)转染皮肤成纤维细胞后,β-半乳糖苷酶染色分析细胞衰老情况,qRT-PCR法检测AKT1 mRNA表达水平,Western印迹法检测AKT1蛋白表达情况.结果 与对照组比较,复制性衰老皮肤成纤维细胞中miR-302b-3p显著升高.转染miR-302b-3p mimic后,细胞衰老阳性染色细胞数目显著增加(P<0.01).AKT1为miR-302b-3p的预测靶基因.当细胞上调miR-302b-3p表达时,靶基因AKT1 mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05).反之,当细胞下调miR-302b-3p表达时,靶基因AKT1 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05).结论 miR-302b-3p可能通过靶向抑制AKT1表达调节皮肤成纤维细胞的衰老.     

心理应激致血浆外泌体miR-184-3p抑制血管内皮细胞增殖、迁移功能的作用分析

目的 探讨心理应激源性血浆外泌体miR-184-3p在调控血管内皮细胞增殖、迁移功能中的作用。方法 （1）将60只6~8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和心理应激组,每组30只。采用21 d慢性不可预知性心理应激刺激建模。通过行为学实验（旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验）评价建模效果。提取血浆外泌体进行电镜分析,qPCR检测血浆外泌体miR-184-3p表达水平。（2）体外培养小鼠肺微血管内皮细胞（MPVEC）,分别转染对照组小鼠血浆外泌体（C-EXO组）、心理应激组小鼠血浆外泌体（S-EXO组）、NC mimic组和miR-184-3p mimic组。划痕实验分析细胞迁移情况,EdU染色分析细胞增殖情况。结果 （1）心理应激组小鼠探索行为较对照组显著降低,不动时间显著增加（P<0.01）。电镜分析验证血浆外泌体直径为30~200 nm的双层膜囊泡结构,qPCR证实心理应激组小鼠血浆外泌体中miR-184-3p的表达量显著增加（P<0.05）。（2）细胞实验结果显示S-EXO组细胞迁移和增殖能力较C-EXO组下降（P<0.01）;同时miR-184-3p mimic组细胞增殖和迁移能力较NC mimic组下降（P<0.05）。结论 慢性心理应激源性血浆外泌体可以通过介导miR-184-3p抑制血管内皮细胞的增殖和迁移。