兔外周血两种内皮祖细胞的分离培养和鉴定

目的研究新西兰大白兔外周血两种内皮祖细胞(EPC和EOC)的分离培养和鉴定。方法由兔耳中央动脉采集外周血,以密度梯度离心法分离单个核细胞(MNC),置于EGM-2培养基中培养。用DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)摄取试验和FITC标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-1)结合试验,检测flk-1表达的免疫荧光法和检测CD34、Ⅷ因子表达的免疫组化染色法,以及体外血管形成试验对EPC/EOC进行鉴定。结果从新西兰大白兔外周血MNC中可成功地培养出EPC和EOC。培养第7天的EPC和第16天的EOC均能吞噬ac-LDL并与凝集素UEA-1相结合,同时均可表达CD34、flk-1和Ⅷ因子相关抗原。EOC在matrigel凝胶上可形成血管腔样的结构。结论用密度梯度离心法从兔外周血中分离的MNC在一定的培养条件下,能分化成为EPC和EOC,为后续的实验研究提供了细胞来源。     

人血浆非对称性二甲基精氨酸浓度的RP-HPLC测定法

目的:建立一种测定人血浆中非对称性二甲基精氨酸(Asymmetric Dimethylarginine,ADMA)浓度的反相高效液相色谱法(RP-HPLC).方法:采用Waters symmetry C18柱(5 μm,3.90 mm×150 mm),以0.05 mmol/L乙酸钠(pH6.8)为流动相A,甲醇为流动相B,线性梯度洗脱:14 min,31% min,45%5 min(V/V/V),流速1.0 ml/min,荧光检测,激发波长330 nm,发射波长450 nm,邻苯二甲醛(OPA)进行柱前衍生,室温下检测.结果:ADMA在0.05～5 μg/ml范围内有良好线性关系,最小检出量为0.05 μg/ml,平均相对回收率为(93.76±2.57)%,日内、日间平均变异系数分别为(3.25±1.59)%、(4.60±1.37)%.结论:本方法准确、简便、快速,适用于科学研究和临床检测.     

奥普力农治疗充血性心力衰竭的临床观察

目的 评价奥普力农对心力衰竭治疗的有效性与安全性.方法 将30例心力衰竭患者随机分为奥普力农组（n=14）与米力农组（n=16）,观察两组治疗前后临床心功能、血流动力学、脉冲多普勒超声心动描记术检查和治疗安全性等指标变化.结果 奥普力农和米力农均改善心功能,差异无统计学意义（P＜0.05）.用药后5min奥普力农组除右心房压、平均肺动脉楔压外,其他指标和米力农组各指标均较用药前改善,差异均有统计学意义;1h后奥普力农组上述指标及米力农组肺动脉楔压较用药后5min进一步改善,差异有统计学意义;之后药效稳定持续至用药结束后1h.奥普力农组用药后脉冲多普勒超声心动描记术检查指标均较用药前明显改善,米力农组则无明显改善;奥普力农对血压心率的影响更小.结论 奥普力农短期应用可有效缓解心力衰竭的临床症状,改善血流动力学指标,作用与米力农相当;并可对心脏结构和功能产生更有利的影响,且对血压、心率的影响更小而较安全.     

兔外周血内皮祖细胞的分离、培养和鉴定

目的:研究新西兰大白兔外周血内皮祖细胞(EOCs)的分离、培养和鉴定方法,为后续实验研究做好准备.方法:通过耳中央动脉采集兔外周血,密度梯度离心法分离单个核细胞(MNCs),在EGM-2培养基的诱导分化下,获得EOCs.通过标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-ac-LDL)摄取试验、荆豆凝集素(FITC-UEA-1)结合实验、CD34与Ⅷ因子免疫组化染色、flk-1免疫荧光染色、体外血管形成实验以及细胞NO分泌功能测定,从细胞表面标记和细胞功能两方面对细胞进行鉴定.结果:新西兰大白兔外周血MNCs在体外培养可成功获得EOCs,EOCs能稳定摄取ac-LDL并与UEA-1结合,一致表达CD34、flk-1和Ⅷ因子相关抗原.EOCs能分泌NO,并能在matrigel凝胶上形成稳定的血管腔样结构.结论:密度梯度离心法分离的兔外周MNCs在一定的培养条件下能诱导分化成为EOCs.     

内皮祖细胞移植治疗心血管疾病的新策略:基因修饰

1997年Asahara等首次从外周血CD34^＋细胞中分离到内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）后。围绕EPCs的研究便迅速展开和深入。近年来，基因修饰EPCs移植在以往EPCs移植治疗心血管疾病的研究取得一定成效的基础上得到发展，并初步展现了美好的应用前景。     

左心耳封堵联合希氏束起搏房室结消融治疗心房颤动1例

<正>1对象和方法1.1对象患者,女性,75岁,既往有高血压病病史4年,有糖尿病病史4年,3年前有"脑梗死"病史。发现"房颤"3年,3个月前因胸闷心悸在我院行冠脉造影示前降支近段局限狭窄85%,在前降支植入1枚支架,左室造影提示左室致密化不全。术后规则服用拜阿司匹林片,波立维片,立普妥,倍他乐克缓释片,代文,速尿和安体舒通等药物治疗下患者仍感活动时胸闷。遂于2015年9月29日再次住院治疗。查     

自体内皮祖细胞移植修复兔动脉内皮损伤

目的观察不同数量的内皮祖细胞移植对内膜球囊损伤血管修复的影响。方法密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,以EGM-2培养基培养7天,获得兔外周血内皮祖细胞。分高细胞数量移植组(5×105个细胞)和低细胞数量移植组(2×105个细胞),将相应数量的内皮祖细胞重悬于100μL生理盐水中移植至兔内膜球囊损伤血管局部,对照组仅注入100μL生理盐水。同时用CM-DiI标记内皮祖细胞移植,进行细胞示踪。4周后,处死动物,荧光显微镜下观察CM-DiI标记细胞的分布,并测量各组内膜损伤血管再生内皮覆盖率和新生内膜增生程度。结果荧光显微镜下发现荧光标记的内皮祖细胞分布在血管的中膜层、新生内膜层和内膜表面。内皮祖细胞移植可显著促进内膜损伤血管的再内皮化,以高细胞数量移植组为著,同时内皮祖细胞移植也大大减少了新生内膜的形成。结论内皮祖细胞移植可修复内膜球囊损伤血管,高细胞数量移植有更显著的效果。     

冠状动脉CT血管造影联合静息心肌透壁灌注指数诊断冠心病的临床价值研究

目的探讨冠状动脉CT血管造影（CCTA）联合静息心肌透壁灌注指数（TPR）诊断冠心病（CHD）的临床价值。方法162例临床疑诊CHD的患者,CCTA后2周内完成冠状动脉血管造影（CAG）检查。利用CCTA的原始数据进行TPR分析,以CAG结果为参照,评价CCTA联合TPR对CHD的诊断价值。结果CCTA、TPR单独或两者联合均可用于诊断CHD（字2=94.42、14.25、48.30,均P＜0.01）,ROC曲线下面积分别为0.899、0.589、0.701。CCTA单独诊断CHD的灵敏度为85.6%（95/111）,特异度为94.1%（48/51）,阳性预测值（PPV）为96.9%（95/98）,阴性预测值（NPV）为75.0%（48/64）。TPR单独诊断CHD的灵敏度为82.9%（92/111）,特异度为45.1%（23/51）,PPV为76.7%（92/120）,NPV为54.8%（23/42）。联合CCTA及TPR诊断CHD的灵敏度为99.1%（110/111）,特异度为41.2%（21/51）,PPV为78.6%（110/140）,NPV为95.5%（21/22）。结论联合CCTA及TPR可用于诊断CHD并可明显提高CHD诊断灵敏度。