低氧预适应上调大鼠海马神经元和星形胶质细胞在急性缺氧时的葡萄糖转运蛋白的活性和基因表达

目的 研究低氧预适应对海马神经元和星形胶质细胞在急性缺氧暴露时的葡萄糖转运蛋白的活性和基因表达的影响。方法 培养大鼠海马神经元和星形胶质细胞,每天间歇暴露于低氧混合气体（1% O2、10% CO2、89% N2）20min,连续6d。最后1次低氧暴露24h后,将细胞暴露于无氧混合气体（10% CO2、90% N2）6h,然后立即检测[3H]-2-脱氧葡萄糖（2-DG）的摄取率、GLUT1和GLUT3的mRNA水平及神经元的存活率。结果 低氧预适应上调急性缺氧时神经元和星形胶质细胞的2-DG吸收率、星形胶质细胞GLUT1 mRNA的表达及神经元GLUT1和GLUT3 mRNA的表达,提高神经元存活率,这一作用可被细胞松弛素B消除。结论 低氧预适应上调海马神经元和星形胶质细胞在急性缺氧时的葡萄糖摄取率和葡萄糖转运蛋白的基因表达。     

人类免疫缺陷病毒B亚型代表株候选疫苗的研究

ＡＩＤＳ传播速度快、死亡率高 ,但目前尚无有效的治疗措施 ,为此我们把希望寄于预防该病的发生上。核酸疫苗的发现为ＡＩＤＳ的预防提供了一个崭新的思路 ,但核酸疫苗的免疫原性较弱 ,为了增强ＨＩＶ基因免疫的效果 ,我们协同应用了ＩＬ 2基因。ＩＬ 2是一种多功能的细胞因子 ,具有诱导Ｔ、Ｂ细胞分化和增殖的能力 ,并能增强ＣＴＬ和ＮＫ细胞的杀伤活力[1 ] 。我们探讨的主要问题是 :在重组疫苗质粒中与ＨＩＶ 1ｇｐ12 0抗原共表达的ＩＬ 2 ,在机体免疫应答过程中 ,能否起到增强细胞免疫的佐剂作用 ,以为今后ＨＩＶ疫苗的研制奠定基础。1　…     

诱导性表达Cre重组酶转基因载体的构建及鉴定

背景：猪在遗传上与人类相似，因此猪是研究人类疾病最好的动物模型，而对于这方面的研究在国内外报道较少。目的：建立诱导性表达Cre重组酶的转基因载体。设计、时间及地点：单一样本观察，于200710／200805在吉林大学农学部畜牧兽医学院完成。材料：DH5a菌株E．coliDH5α，质粒pcDNA3．1（＋）、PET28a（＋）、pClneo，重组质粒PMD—Cre和猪成纤维细胞由北华大学医学部基础医学院细胞生物教研室保存；重组质粒pGC—FRT2NeoRRRR和Mx1克隆载体pGL3-Mx1由意大利Stefano教授馈赠。方法：构建的载体包括以下元件：Mx1启动子用来启动Cre的表达，Cre的作用是工具便于以后做基因敲除，BGHpolyA是一个终止信号，FRT2NeoR中的FRT是FLP酶的识别位点便于切除筛选标记，NeoR是筛选标记。通过聚合酶链反应方法分别从pGL3Mx1载体上和pcDNA3．1（＋）载体上扩增猪Mx1启动予和BGHpolyA。利用重叠聚合酶链反应方法获得猪源的Cre重组酶基因，并从pGCFRT2NeoR上用XholIandSalⅠ酶切得到FRT2NeoR盒子。将上述4个片段利用SOE—PCR及酶连接的方法用T4DNA连接酶连接，然后利用原核表达载体PET28a（＋）构建出Cre表达载体Mx1—Cre—BGHpolyA．FRT2neoR。主要观察指标：Cre重组酶表载体PET28a（＋）．Mx1—Cre．BGHpolyA—FRT2neoR的鉴定。结果：PET28a（＋）-Mx1—Cre—BGHpolyA．FRT2neoR重组质粒经NheI和NotI双酶切后完全符合理论上可切出的大小片段，载体构建成功。结论：成功的构建了诱导性表达Cre重组酶表达载体Mx1-Cre．BGHpolyA—FRT2neoR。     

诱导性表达Cre重组酶转基因载体的构建及鉴定

背景：猪在遗传上与人类相似，因此猪是研究人类疾病最好的动物模型，而对于这方面的研究在国内外报道较少。 目的：建立诱导性表达Cre重组酶的转基因载体。 设计、时间及地点：单一样本观察，于2007-10/2008-05在吉林大学农学部畜牧兽医学院完成。 材料： DH5a菌株E.coliDH5α, 质粒pcDNA3.1(+)、PET28a(+)、pCIneo，重组质粒PMD-Cre和猪成纤维细胞由北华大学医学部基础医学院细胞生物教研室保存；重组质粒pGC-FRT2NeoRRRR和Mx1克隆载体pGL3-Mx1由意大利Stefano教授馈赠。 方法：构建的载体包括以下元件：Mx1启动子用来启动Cre的表达，Cre的作用是工具便于以后做基因敲除，BGHpolyA是一个终止信号，FRT2NeoR中的FRT 是FLP酶的识别位点便于切除筛选标记，NeoR是筛选标记。通过聚合酶链反应方法分别从pGL3Mx1载体上和pcDNA3.1(+)载体上扩增猪Mx1启动子和BGHpolyA。利用重叠聚合酶链反应方法获得猪源的Cre重组酶基因，并从pGCFRT2NeoR上用XholⅠand SalⅠ酶切得到FRT2NeoR盒子。将上述4个片段利用SOE-PCR及酶连接的方法用T4 DNA连接酶连接，然后利用原核表达载体PET28a(+)构建出Cre表达载体Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR。 主要观察指标：Cre重组酶表载体PET28a(+)-Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR的鉴定。 结果：PET28a(+)-Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR重组质粒经NheⅠ和NotⅠ双酶切后完全符合理论上可切出的大小片段，载体构建成功。 结论：成功的构建了诱导性表达Cre重组酶表达载体Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR。     

汉防己甲素影响糖尿病大鼠各组织葡萄糖转运蛋白4蛋白表达的意义

目的:观察汉防己甲素是否能够提高链脲菌素-糖尿病大鼠各组织葡萄糖转运蛋白4的蛋白表达,并与治疗糖尿病有已知疗效的药物二甲双胍作为对比,分析汉防己甲素对糖尿病的治疗作用。方法:实验于2004-10/2005-03在国家重点实验室国家人类基因组计划北方中心诺赛基因完成。①选用8～10周龄雄性(SPF级)Wistar大鼠28只。于大鼠静脉注射链脲佐菌素60.0mg/kg,当大鼠血浆葡萄糖浓度≥20mmol/L并且有多尿等其他糖尿病特征时,为糖尿病模型造模成功(n=28)。②将其造模成功大鼠按随机抽签法分为4组(每组7只):模型组,汉防己甲素组,二甲双胍组,二甲双胍 汉防己甲素组。汉防己甲素组:每8小时尾静脉注射1.0mg/kg汉防己甲素(浙江金华制药厂产品,2mL/支),3次/d;二甲双胍组:灌胃100mg/穴kg·d雪二甲双胍(丹东医创药业有限责任公司,2mL/支)混悬液;二甲双胍 汉防己甲素组:每8小时尾静脉注射1.0mg/kg汉防己甲素,3次/d,同时灌胃100mg/穴kg·d雪二甲双胍混悬液。模型组:饲以普通饲料喂养。每组干预1周。③在用药1周后将4组大鼠处死,立即解剖大鼠分别取出肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织放入-80℃保存,用电泳及Westernblot检测肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面/细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达。④计量资料差异比较采用t检验。结果:大鼠28只均进入结果分析。汉防己甲素组肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面/细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达明显高于模型组,是模型组的两三倍(P<0.05～0.01),尤其在肝脏和脂肪细胞中表达更高。二甲双胍组肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面/细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达也明显高于模型组,是模型组的一两倍(P<0.05),不如前者明显。二甲双胍 汉防己甲素组肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面/细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达也明显高于模型组,是模型组的2～3.5倍(P<0.05～0.01),尤其在脂肪细胞中最高。结论:汉防己甲素可以提高糖尿病大鼠外周组织葡萄糖转运蛋白4蛋白表达,提高对葡萄糖的利用率。该作用与二甲双胍基本相当,两者合用的效果并不特别明显。     

腹腔镜胆道探查I期缝合的临床应用分析

目的：探讨腹腔镜胆总管探查一期缝合术在临床上的应用范围及其合理性。方法采用回顾性分析的方法，对住院患者中对胆总管探查指征明确的胆总管结石择期手术的患者进行筛选，最终得到符合接受胆总管探查一期缝合患者41例作为实验组，同时选取69例在相同条件下接受T管引流技术的患者作为对照组，应用统计学分析方法对实验组患者和对照组患者的术后指标进行比较分析。结果实验组患者，手术进行中没有意外发生，术后3例患者有胆漏情况发生，平均住院天数、输液天数、输液量分别为7.14 d、4.97 d、8.71L；对照组中均住院天数、输液天数、输液量分别为13.34 d、9.71d、13.52L，其中有9例患者术后有胆漏情况发生，3例需要进行第2次手术，以上指标实验组和对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）。结论腹腔镜胆道探查I期缝合手术与胆总管探查 T管引流手术相比具有安全性高、术后并发症少、手术创伤性小、术后患者恢复迅速等优点。对于胆总管结石需要手术的患者应当首选腹腔镜胆道探查I期缝合手术，在临床上可以进一步的推广应用。     

共表达HIV-1的gag-gp120与IL-2的pGPIL-2诱导小鼠产生细胞毒性T细胞的研究

目的 研究HIV-1CN融合基因与IL-2基因共表达基因质粒pGPIL-2诱导产生细胞毒性T细胞（CTL）。方法 脂质体介导共表达中国流行株HIV-1gag-gp120基因与IL-2基因的基因疫苗质粒pGPIL-2转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光法鉴定其表达。取pGPIL-2免疫鼠脾细胞,检测pGPIL-2诱导的细胞毒性T细胞杀伤活性。结果 杀伤实验结果证明,经基因免疫获得的 CTL效应细胞,可杀伤 HIV-1CN 融合基因转染的靶细胞。结论 pGPIL-2可有效地诱导 CTL的产生,该研究结果为进一步设计中国流行株HIV-1基因疫苗提供了重要实验依据。     

吉林市郊化工区秋白菜的毒理学研究及营养学分析

本研究从吉林市郊吉林化肥厂外菜田取收获的秋白菜为样品，进行毒理学研究和营养学分析。毒理学研究进行了急性毒性试验（ＬＤ５０）和致突变试验。后者包括鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型回复突变试验（Ａｍｅｓ试验）、微核试验（ＭＮ）、姐妹染色单体交换试验（ＳＣＥ）和人体外周血淋巴细胞染色体畸变分析试验；营养学分析测定了秋白菜的蛋白质、还原糖、蔗糖、维生素Ｃ（Ｖｃ）、Ｃａ、Ｍｇ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｆｅ及Ｐ等主要营养成分。上述研究与分析均与取自无污染地块产的秋白菜做了对照实验。毒理学研究评价区与对照区皆为阴性结果，且二者无显著性差异。营养学分析方面，主要营养成分含量及贮存后期含量的变化，评价区与对照区无显著性差异。     

汉防己甲素影响糖尿病大鼠各组织葡萄糖转运蛋白4蛋白表达的意义

目的：观察汉防己甲素是否能够提高链脲菌素-糖尿病大鼠各组织葡萄糖转运蛋白4的蛋白表达，并与治疗糖尿病有已知疗效的药物二甲双胍作为对比，分析汉防己甲素对糖尿病的治疗作用。 方法：实验于2004—10／2005—03在国家重点实验室国家人类基因组计划北方中心诺赛基因完成。①选用8—10周龄雄性（SPF级）Wistar大鼠28只。于大鼠静脉注射链脲佐菌素60．0mg／kg，当大鼠血浆葡萄糖浓度≥20mmol／L并且有多尿等其他糖尿病特征时。为糖尿病模型造模成功（n=28）。②将其造模成功大鼠按随机抽签法分为4组（每组7只）：模型组，汉防己甲素组， 二甲双胍组，二甲双胍＋汉防已甲素组。汉防己甲素组：每8小时尾静脉注射1．0mg／kg汉防已甲素（浙江金华制药厂产品，2mL／支），3次／d；二甲双胍组：灌胃100mg／（kg&;#183;d）二甲双胍（丹东医创药业有限责任公司，2mL／支）混悬液；二甲双胍＋汉防己甲素组：每8小时尾静脉注射1．0mg／kg汉防己甲素，3次／d，同时灌胃100mg／（kg&;#183;d）二甲双胍混悬液。模型组：饲以普通饲料喂养。每组干预1周。③在用药1周后将4组大鼠处死，立即解剖大鼠分别取出肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织放入-80℃保存．用电泳及Western blot检测肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面／细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达。④计量资料差异比较采用t检验。 结果：大鼠28只均进入结果分析。汉防已甲素组肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面／细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达明显高于模型组，是模型组的两三倍（P〈0．05-0．01），尤其在肝脏和脂肪细胞中表达更高。二甲双胍组肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面／细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达也明显高于模型组，是模型组的一两倍（P〈0．05），不如前者明显。二甲双胍＋汉防己甲素组肝脏、骨骼肌及肾周脂肪组织和膜表面／细胞质的葡萄糖转运蛋白4蛋白表达也明显高于模型组。是模型缉的2-3．5倍（P〈0．05-0．01），尤其在脂肪细胞中最高。 结论：汉防已甲素可以提高糖尿病大鼠外周组织葡萄糖转运蛋白4蛋白表达。提高对葡萄糖的利用率。该作用与二甲双胍基本相当，两者合用的效果并不特别明显。