冷处理对单增李斯特菌生物膜形成能力的影响

目的研究冷处理对不同食品来源及不同血清型的单增李斯特菌生物膜形成能力的影响,为食品中单增李斯特菌的防治提供基础信息。方法使用结晶紫染色法对单增李斯特菌食品分离株在37 ℃、4 ℃冷胁迫及4 ℃冷适应条件下生物膜形成能力进行测定,并对代表菌株的生物膜相关基因hpt、luxS及sigB进行基因序列分析及表达量差异分析。结果37 ℃条件下,1/2c血清型单增李斯特菌生物膜形成能力较强,不存在生物膜形成能力弱株。 37 ℃条件下的生物膜形成能力强组（3株）以及中组（10株）菌株中,9株菌的hpt基因发生非同义突变。 冷处理条件下4株中组菌株中,1株菌的sigB基因表达量增多,3株菌的hpt基因表达量增多。结论单增李斯特菌生物膜形成能力与血清型相关,1/2c血清型菌株在37 ℃条件下具有较强生物膜形成能力。 hpt基因突变株在37 ℃下具有较强生物膜形成能力,冷处理使得病原菌生物膜形成能力降低,但hpt及sigB基因的过量表达会增强4 ℃条件下单增李斯特菌生物膜形成能力。     

复方鸦胆子油软胶囊质量标准及初步药效学研究

目的:建立复方鸦胆子油软胶囊的质量控制方法,观察复方鸦胆子油软胶囊制剂对S180肿瘤模型小鼠的治疗作用。方法:采用薄层色谱法对复方鸦胆子油软胶囊中的鸦胆子和蟾皮进行定性鉴别,采用气相色谱法对复方鸦胆子油软胶囊中的油酸进行含量测定,采用高效液相色谱法对复方鸦胆子油软胶囊中脂蟾毒配基和华蟾酥毒基总含量进行测定;通过S180腹水型肿瘤细胞建立肿瘤模型,以抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数为考察指标,观察复方鸦胆子油软胶囊对肿瘤小鼠的治疗作用。结果:TLC鉴别方法分离度良好、斑点清晰;油酸在0.270 4 mg/mL~1.622 4 mg/mL范围线性关系良好,平均回收率95%~105%;脂蟾毒配基和华蟾酥毒基在0.005 6 mg/mL~0.061 6 mg/mL范围线性关系良好,平均回收率95%~105%;用S180腹水型肿瘤可以成功地制备小鼠肿瘤模型,复方鸦胆子油软胶囊具有治疗作用。结论:本方法专属性强、结果准确、耐用性好,可很好地控制复方鸦胆子油软胶囊的质量,值得进一步开发研究。     

非甾体抗炎药引发小肠不良反应因素分析及处理

目的 探究非甾体抗炎药在应用过程中引起患者小肠不良反应的危险因素,为临床药物的合理使用提供参考.方法 通过调查问卷的方式对2014年6月至2016年6月在本院及附属医院就诊的843例0.5～1.0年内规律使用非甾体抗炎药的患者进行调查.问卷内容主要包括年龄、性别、既往病史、同期合并用药、吸烟、饮酒、饮食习惯、生活习惯等.对数据统计后,按照有无发生小肠不良反应分为2组,并使用单因素分析和多因素Logistic回归分析方法,确定引发小肠不良反应的危险因素.结果 通过对调查问卷的筛查排除后,排除49例,纳入研究794例,其中392例出现小肠不良反应,402例未出现小肠不良反应.年龄、性别、不良生活习惯、不良饮食习惯、上消化道疾病病史、风湿疾病病史、未使用抗凝药为NSAIDs引发小肠不良反应的危险因素,同时也为NSAIDs引发小肠不良反应的独立危险因素.结论 应用NSAIDs 6个月以上者,小肠炎症反应是其常见的小肠不良反应;且在用药时应关注年龄、性别、病史、用药史等引起小肠不良反应的危险因素.同时,在规避危险因素后,应采取具体措施防治不良反应.     

孕妇心理压力状况及影响因素分析

目的分析孕妇心理压力状况及其影响因素。方法使用我院自制问卷以及SCL-90、SAS、SDS问卷调查对2011年5月至2013年5月间在我院进行定期产检的238例孕妇的心理状况进行调查。结果孕妇心理不健康率59.24%。多因素Logistic回归分析发现,孕妇焦虑情绪的危险因子根据OR得分由大到小分别为:孕期、是否初产、年龄、是否有重大疾病史、是否服用过一些药物和家庭月收入情况;孕妇抑郁情绪的的危险因子根据OR得分由大到小分别为:是否初产、个人月收入情况、不良孕史、孕期、是否有重大疾病史、家庭月收入情况和年龄。结论孕妇心理压力大且心理状况不良,应当根据影响因素对孕妇进行有针对性的心理辅导,帮助缓解孕妇的心理状况。     

多杀性巴氏杆菌毒力因子的研究进展

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocidaP.m)是有荚膜的革兰氏阴性杆菌,是普遍存在的致病菌能够引发动物的各类疾病,如牛和水牛的出血性败血症,猪的萎缩性鼻炎,兔的脓血症,野生和家养鸟类的禽霍乱,以及人类各种与动物叮咬有关的疾病,包括皮下感染、脓毒性的关节炎、脑膜炎、心内     

克罗诺杆菌种间鉴定recN基因方法建立

目的建立一种基于重组和修复蛋白基因(recN)的克罗诺杆菌种间鉴定方法,将不同来源的克罗诺杆菌分离株鉴定到种。方法扩增recN基因全长序列,选取不同长度的recN基因片段,用MEGA 4.0软件对克罗诺杆菌8个参考菌株进行聚类分析,确定克罗诺杆菌种间鉴定可信度高、序列较短的片段;设计并合成该片段的引物,以8株参考菌株作为参照,构建44株克罗诺杆菌实验菌株的聚类分析图,并用生化反应鉴定对聚类结果进行佐证。结果基于recN基因上一段640 bp的片段可对克罗诺杆菌不同种的菌株进行区分;以8株参考菌株在聚类图上的位置作为参考,根据遗传距离的远近,44株分离菌中有37株阪崎克罗诺杆菌,3株丙二酸盐阳性克罗诺杆菌,3株苏黎世克罗诺杆菌,1株尤尼沃斯克罗诺杆菌,与生化反应鉴定结果一致。结论该方法与生化鉴定和基于recN全基因方法相比简便快速,PCR扩增后,一次测序反应就可以将克罗诺杆菌鉴定到种。     

沙门菌PCR-dHPLC基因分型方法建立

目的 建立沙门菌聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-dHPLC)基因分型方法.方法 采用16S ～23S rRNA内转录间隔(ITS)作为沙门菌分型目的基因,确定特异性扩增引物,进行PCR扩增,扩增产物经dHPLC分离,根据dHPLC图谱峰型差异进行分型,并与血清学和生化分型结果比较.结果 89株沙门菌共分为12个dHPLC型(D型);所有沙门菌均有1个相同色谱峰,克隆测序结果表明,其片断大小为600 bp,其他8种食源性致病菌对照株无此色谱峰,应为沙门菌16S～23S rRNA基因序列的特征性条带,分型结果与血清学差异较大,与生化分型结果有一定一致性.结论 所建立的沙门菌PCR-dHPLC基因分型方法具快速、操作方便、重复性好、成本低廉、高通量和自动化的特点.     

革兰阴性杆菌节律性释放调控物质的研究

目的研究奇异变形杆菌（Proteus mirabilis,PM）波动生长过程中生物波调控因子（biological wave regulating factor,BRF）的节律性释放及作用。方法应用MTT实验和激光共聚焦显微镜观察BRF对细菌代谢的影响;采用凝集抑制实验检测PM周期性释放BRF;原子力显微镜观察PM在潜-生序变化中BRF生成情况。结果PM在波动生长过程中周期性释放BRF,潜生体可合成大量的BRF。BRF能提高细菌的代谢水平,促进细胞内pH值的变化。结论PM的波动生长过程是细菌生长代谢的消长与环境平衡-远离平衡变化之间互为因果的动态过程,是与细菌自身调控物质BRF协同作用的结果。     

多重实时荧光定量聚合酶链反应检测携带耐药基因及肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌

目的 建立一种快速鉴定携带耐药基因和肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌的方法.方法 根据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因nuc、甲氧西林耐药基因mecA和肠毒素A基因sea的序列,设计特异性的引物和不同荧光素标记的TaqMan探针,通过反应体系和反应条件的优化,建立了能同时检测鉴定耐甲氧西林和产肠毒素A的金黄色葡萄球菌的多...     

鸡C/EBP-α基因表达载体的构建及抗血清制备

目的:构建鸡C/EBP-α基因原核和真核表达载体及制备高效价的抗血清,为在蛋白质水平研究鸡C/EBP-α基因的功能以及与其他脂肪细胞分化调控基因间的时空协同关系奠定基础。方法:采用RT-PCR的方法,根据已知鸡的C/EBP-α基因cDNA序列,获取鸡C/EBP-α基因的cDNA片段,测序正确后分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pcDNA3中。重组质粒pGEX-4T-1/C/EBP-α转化大肠杆菌BL21(DE3),不同浓度的IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测蛋白表达情况;真核表达载体pcDNA3/C/EBP-α应用水压转染法,经RT-PCR检测外源C/EBP-α基因在小鼠肝脏中的表达情况,然后采用"DNAprime-protein boost"策略免疫小鼠,制备高效价的抗血清,应用Western blot检测抗血清的特异性。结果:构建了鸡C/EBP-α基因的原核和真核表达载体;SDS-PAGE显示C/EBP-α得到了特异性的表达;RT-PCR结果提示C/EBP-α mRNA在小鼠肝脏中表达;ELISA和Western blot结果表明基因免疫小鼠产生了高效价和特异性强的抗血清。结论:成功构建了鸡C/EBP-α基因的原核pGEX-4T-1/C/EBP-α和真核表达载体pcDNA3/C/EBP-α,外源基因C/EBP-α mRNA能在小鼠肝脏中有效表达,同时制备了高效价、特异性强的抗血清。