椎管内粒细胞肉瘤为首证急性白血病1例

患者,男,19岁,因排尿排便困难5月,骶尾部疼痛3月,发热伴鼻衄10天入院(住院号:256338).缘于1998年10月无诱因出现排尿排便困难,在当地医院按"骶尾神经损伤"治疗无效,同年12月底出现骶尾部持续性胀痛,且向双下肢后部放射,CT检查示椎管内占位.     

抗KDRscFv复制缺陷型腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建抗KDRscFv复制缺陷型腺病毒载体，为抗KDRscFv抗肿瘤血管生成的体内应用打下实验基础。方法采用重叠延伸PCR方法构建IL-2信号肽及抗KDRscFv融合基因，克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV，转染含pAdEasy-1的BJ5183细菌，经细菌内同源重组产生携带抗KDRscFv基因（含信号肽）的重组腺病毒载体pad-抗 KDRscFv，经脂质体法转染293细胞，包装产生携带抗KDRscFv基因的重组腺病毒Ad-抗 KDRscFv。结果构建了表达抗KDRscFv基因的复制缺陷型腺病毒，且该重组腺病毒能在肝癌细胞株HepG2中高效表达。结论成功构建表达抗KDRscFv基因的复制缺陷型腺病毒载体，为进一步研究抗KDR-scFv在肿瘤治疗中的作用研究提供实验基础。     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞株中的表达

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）能诱导30余种人类肿瘤细胞凋亡，在抗肿瘤治疗中具有广阔应用前景。目的：构建携带可溶性TRAIL基因的复制缺陷型重组腺病毒载体，鉴定其在肝癌细胞株中的表达。方法：以重叠延伸聚合酶链反应（PCR）扩增白细胞介素（IL）-2信号肽和TRAIL膜外区融合片段，克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack—CMV，转化含复制缺陷型腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌pAdBJ5183，经细菌内同源重组产生重组腺病毒Ad-IL-2-TRAIL，以脂质体法转染HEK293细胞包装病毒，感染肝癌细胞株HepG2．荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的表达。结果：成功构建了携带可溶性TRAIL基因的复制缺陷型重组腺病毒载体。病毒感染HepG2细胞48h后，超过95％的细胞中出现绿色荧光。结论：所构建的复制缺陷型重组腺病毒Ad—IL-2-TRAIL可在肝癌细胞中高效表达可溶性TRAIL，为进一步行肿瘤TRAIL基因冶疗提供了实验依据。     

胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响

目的 探讨胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响。方法 应用细胞培养、P1染色、流式细胞仪检测的方法，观察胃癌细胞SGC-7901、MKN28、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞周期及细胞凋亡率，western blot方法分析4种胃癌细胞中bel-2和Caspase3的表达。结果 TRAIL300ng／ml作用于胃癌细胞24h后，胃癌细胞MKN28、MKN45、AGS和SGC-790I的凋亡率分别为36．05％、20．27％、16．50％和11．80％。Western blot结果显示MKN28细胞Caspase3的表达高于其它细胞，而bel-2的表达在各细胞间并无明显差别。结论 胃癌细胞对TRAIL的敏感性与Caspase3的高表达有关，而与bel-2的表达无关。     

5-Aza-CdR增强TRAIL对胃癌细胞的抗瘤活性与caspase-8表达的关系

目的探讨5-Aza-CdR对凋亡诱导分子TRAIL抗胃癌细胞活性的影响.方法采用MTT方法检测TRAIL蛋白的抗癌活性;采用RT-PCR方法检测caspase-8 mRNA的表达.结果 TRAIL 200 ng/ml作用72 h对SGc 7901、Kato 3和AGS胃癌细胞的生长抑制率分别为9.83%、11.94%和4.04%;经5-Aza-CdR处理后,对3株胃癌细胞的抑制率分别提高到38.98%、52.42%和30.72%;用5-Aza-CdR处理后3株胃癌细胞caspase-8 mRNA表达明显增加.结论 5-Aza-CdR能增强胃癌细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与caspase-8的表达上调有关.     

Effects of methylation status of caspase-8 promoter on antitumor activity of TRAIL to human gastric cancer cells

To study the effects of the methylation status of caspuse-8 promoter on the antitunlor activity of TRAIL to the human gastric cancer cells. Methods: The methylation of caspuse-8 was measured with methylation specific PCR (MSP) and the antitomor capability of TRAIL to human gastric cancer cells was determined with MTT. Results: No methylation of caspase-8 in the human gastric cancer cells was found. The sensitivity of 5 lines of gastric cancer cells to the antitumor activity of TRAIL was different. The administration of the demethylation agent 5-Aza-2‘-deoxycytidine (5-Aza-CdR) increased the sensitivity of gastric cancer cells to TRAIL but did not change the methylation status of caspuse-8 promoter in gastric cancer cells. Conclusion: 5-Aza-CdR increases the sensitivity of most of gastric cancer cells to TRAIL butcaspuse-8 is not involved in the antitumor activity of TRAIL.     

hPOT1 RNA干扰对人胃癌细胞株BGC-823端粒长度和hTERT表达的影响

人端粒保护蛋白1（hPOT1）的主要作用为保护端粒和调节端粒长度。目的：探讨hPOT1在人胃癌细胞中对端粒长度的调节作用及其可能机制。方法：以RNA干扰（RNAi）技术抑制人胃癌细胞株BGC-823中hPOT1的表达．以实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞端粒长度，以半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA表达。结果：以RNAi技术抑制hPOT1表达后，BGC-823细胞端粒长度明显缩短，反映端粒相对长度的T／S值显著小于亲本BGC-823细胞组和阴性对照组（1．383±0．091对2．758±0．647和3．043±0．548，P〈0．05），亲本细胞组与阴性对照组之间则无明显差异。hPOT1RNAi组细胞hTERTmRNA表达亦明显下调。结论：在人胃癌细胞中，hPOT1能正性调节端粒长度；在hPOT1下调引起端粒缩短的环节中，hTERT表达下降可能起一定作用。     

凋亡相关蛋白在胃癌细胞凋亡中的作用研究

目的　研究核转录因子 (NF) κB、生存素 (survivin)、Bcl 2和Caspase3在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)诱导的胃癌细胞凋亡中的作用。方法　应用细胞培养和流式细胞仪检测的方法 ,观察胃癌细胞SGC 790 1、MKN2 8、AGS、MKN45经TRAIL作用后的细胞凋亡率 ,Westernblot方法分析 4种胃癌细胞中NF κB、生存素、Bcl 2和Caspase3的表达。结果　TRAIL 50ng/ml作用于胃癌细胞 2 4h后 ,MKN2 8、MKN 45、AGS和SGC 790 1细胞的凋亡率分别为 2 4.0 5% ,7.83 % ,8.0 5%和3 .17%。TRAIL 3 0 0ng/ml作用于胃癌细胞 2 4h后 ,MKN2 8、MKN 45、AGS和SGC 790 1细胞的凋亡率分别为 3 6.0 5% ,2 0 .2 7% ,16.50 %和 11.80 %。Westernblot结果显示 ,SGC 790 1细胞NF κB、生存素的表达高于MKN2 8细胞 (P <0 .0 5) ,与Bcl 2的表达无明显差异。MKN2 8细胞Caspase3的表达高于SGC 790 1细胞 (P <0 .0 5)。结论　TRAIL具有选择性诱导肿瘤细胞凋亡的特性 ,肿瘤细胞对TRAIL的耐药现象可能与凋亡抑制因子生存素和NF κB的表达增强以及Caspase3 的表达抑制有关