胞浆抗原检测在急性双表型白血病中的诊断价值

目的 探讨胞浆抗原检测在急性双表型白血病(BAL)中的临床诊断、鉴别诊断价值。方法 采用流式细胞术(FCM)对500例初治急性白血病(AL)患，统一进行常规一线抗体的检测，其中对一线抗体诊断不清的80例加做二线胞浆抗原染色。结果 80例加做胞浆抗原检测后，依据EGIL(1998年)积分系统，符合BAL有10例(10／500例，2．0％)：T系／B系双表型3例(cCD3、cCD79a双阳性)、T系／髓系双表型3例(cCD3、MPO双阳性)、B系／髓系双表型4例(cCD79a、MPO双阳性)；符合急性未分化型白血病1例(0．2％)；符合AL伴系表达69例。结论 对诊断不清的AL病例，加做胞浆抗原检测，对进一步提高白血病的诊断水平，特别是对未分化型、双表型以及双表型的分类诊断、双表型与伴系表达白血病的鉴别诊断具有重要价值。     

Annexin Ⅱ siRNA对淋巴瘤Jurkat细胞凋亡的影响

目的观察沉默膜联蛋白Ⅱ（annexinⅡ,A2）基因对淋巴瘤Jurkat细胞凋亡的影响。方法采用A2 siRNA转染人淋巴瘤Jurkat细胞后应用RT-PCR和Western blot鉴定干扰效果。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响。结果Real-time PCR和Western blot检测结果表明,A2基因被成功抑制。流式细胞术检测得A2siRNA组细胞凋亡率为57.47%±2.10%,较阴性对照组（28.68%±1.21%）明显增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论A2基因可增强Jurkat细胞抗凋亡作用,A2 siRNA可诱导Jurkat细胞凋亡。     

再生障碍性贫血免疫抑制治疗后阵发性睡眠性血红蛋白尿症克隆的演变及临床意义

目的 探索再生障碍性贫血(AA)免疫抑制治疗(IST)后阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)克隆变化情况及其临床意义.方法 将2008年1月至2012年2月收治的186例AA患者纳入本研究,其中55例重型AA(SAA)予抗胸腺细胞球蛋白(ATG)联合环孢素A(CsA)治疗,131例非重型AA(NSAA)予CsA治疗.治疗前所有患者进行PNH克隆筛查,治疗后进行随访.中位随访时间22(18 ～76)个月.结果 SAA组10例(18.9％)患者出现PNH克隆,NSAA组9例(7.4％)出现PNH克隆,前者出现PNH克隆比例高于后者(t=5.041,P=0.025),治疗后SAA组在6、12、18、＞24个月时PNH克隆规模大于NSAA组(13.38％比5.67％、14.88％比5.31％、20.00％比5.47％、18.85％比9.08％,P值均＜0.05).PNH克隆对2种IST方案疗效影响的差异无统计学意义.结论 AA患者予ATG联合CsA或CsA治疗后,均可出现PNH克隆,SAA患者ATG治疗后更明显.IST前后伴PNH克隆不影响IST疗效.     

慢性髓细胞白血病急变期的免疫表型和细胞遗传学研究

目的探讨慢性髓细胞白血病急变期(CML-BC)免疫表型和细胞遗传学异常的关系。方法对33例成人CML-BC以四色流式细胞仪进行表面抗原检测及R显带技术进行核型分析。结果典型易位组CD34阳性率高于变异易位组(P＜0．05):无附加异常、伴附加异常、伴复杂染色体异常(CCAs)各组中抗原表达阳性率无统计学差异;平衡易位、非平衡易位组中抗原表达阳性率无统计学差异。涉及17号染色体变异的病例中各抗原的阳性率与CML-BC总体阳性率比较末发现统计学差异。7例涉及17号染色体变异的病例均为CML-AML。结论典型t(9;22)易位CD34阳性率高于变异易位;有无附加染色体异常及是否平衡易位对免疫表型无直接影响。涉及17号染色体变异的CML-BC中急非淋变多见。     

纯红系白血病(M6b)一例报告——附文献复习

目的 提高对纯红系白血病(M6b)生物学本质的认识.方法 报告1例纯红系白血病患者的临床和实验室检查特征、治疗经过、预后并结合文献复习讨论.结果 患者骨髓原始红细胞占0.904,免疫表型:CD71+细胞占99.5%、血型糖蛋白A(GPA)+细胞占67.4%,无干祖细胞、髓系、淋系、巨核系抗原表达,予以HAG(高三尖杉酯碱+阿糖胞苷+G-CSF)方案化疗无效,病情持续进展,多发性髓外浸润,很快死于多器官功能衰竭.结论 纯红系白血病恶性程度高,对常规化疗方案治疗无效,预后极差.     

急性髓系白血病M_2微小残留病与细胞遗传学关系探讨

目的 了解急性髓系白血病(AML)M2微小残留病(MRD)水平与细胞遗传学分组的关系.方法 采用多参数流式细胞仪(MFC)进行白血病免疫分型,然后再根据白血病相关免疫表型(LAIP)选择抗体组合,完成对117例M2病人的MRD监测.结果 将初次缓解AML-M2病人的微小残留病灶水平以5×10-4为界,在细胞遗传学预后较好组、预后中等组、预后较差组之间进行比较,发现三组MRD水平差异无显著性.动态监测中比较了45例患者1年内不同遗传学分组MRD从10-3水平后上升到10-2水平的发生率:预后较好组33%,预后中等组32%,预后较差组50%.结论 MFC检测AML-M2病人MRD水平可用于评估治疗反应及预测复发.     

抗血小板膜糖蛋白SZ-21单链抗体的制备和生物学特性研究

目的：将能与血小板膜糖蛋白Ⅲa特异结合的单克隆抗体SZ－21构建成单链抗体（SZ－21ScFv)，为其临床应用奠定基础。方法：构建SZ－21ScFv基因的质粒pET20b-21ScFv，在大肠杆菌E coli BL21(DE3)PlysS中表达了功能分子。表达产物经过包涵体的溶解、Ni-NTA树脂亲和吸附纯化和蛋白质的体外复性过程，获得具有生物活性的高纯度单链抗体片段。结果：体外实验证实表达量占菌体蛋白的21％。SZ-21单链抗体能够抑制ADP诱导的血小板聚集，其抑制能力呈剂量依赖性，在浓度为20μg/ml时达到最大抑制率。 流式细胞术检测证实该单链抗体能与内皮细胞反应，同时也可以抑制纤维蛋白原与血小板的结合。结论：表达的单链抗体具有抑制血小板聚集和抑制纤维蛋白原与血小板结合的能力，有望用于血栓性疾病的治疗。     

人血小板膜糖蛋白功能测定的酶联免疫分析方法的建立

目的建立测定血小板膜糖蛋白（GP）功能的酶联免疫分析（ELISA）方法 ,并对其灵敏度、批内和批间差异进行方法学考核。方法以抗血小板CD62P单抗SZ51和抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）单抗7E3分别包板,加入经ADP诱导的或未诱导的正常人富含血小板血浆（PRP）,以生物素标记的抗GPIb单抗SZ2（Biotin-SZ2）反应后,加入亲和素标记的辣根过氧化物酶（Avdin-HRP）检测,邻苯二胺（OPD）显色后,酶标仪读取吸光度（A）值。对其灵敏度及批内、批间差异作方法学评估,应用该方法对抑制性单抗SZ-21和阿司匹林抑制血小板活化的功能效果进行测定,并与流式细胞术（FCM）测定结果进行比较。结果该方法可检测血小板计数低达6.25×109/L（SZ51包被板）和3.13×109/L（7E3包被板）的标本,批内和批间变异系数均小于10%。测得50名健康正常人ADP诱导的（未诱导的）血小板的CD62P和GPⅡb/Ⅲa的A值分别为0.68±0.21（0.18±0.09）和0.87±0.29（0.44±0.14）。ELISA测定结果表明,SZ21和阿司匹林可明显抑制ADP诱导的血小板功能。流式细胞仪测定ADP诱导的（未诱导的）人血小板表面CD62P和GPⅡb/Ⅲa的阳性细胞百分率分别为（60.1±7.12）%[（2.56±0.61）%]和（86.32±17.82）%[（20.25±14.56）%],其批内和批间变异系数均〈10%。结论该方法可以测定血小板功能活化剂或抑制剂对血小板功能的影响,可以测定血栓性疾病或血栓形成相关性疾病引起的血小板活化程度。     

BA-ELISA定量检测人血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、CD62p的表达及其临床应用

目的建立测定血小板膜糖蛋白功能的生物素亲和素酶联免疫吸附（BA-ELISA）方法,并探讨其临床应用价值。方法采用抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）单抗7E3和抗血小板CD62p单抗SZ51及生物素亲和素系统建立BA-ELISA方法,并应用该方法检测50名健康志愿者、30例急性心肌梗死（AMI）、30例急性脑梗死（ACI）和30例糖尿病（DM）患者的血小板膜糖蛋白功能,并与流式细胞术（FCM）测定结果进行比较。同时,应用该方法对抑制性单抗SZ21和阿司匹林抑制血小板活化的功能效果进行测定。结果该方法检测血小板计数敏感度低达3.13×109/L（7E3包被板）和6.25×109/L（SZ51包被板）,批内和批间变异系数分别为6.23%～8.35%和4.38%～5.78%。测得AMI、ACI和DM患者ADP诱导的（未诱导的）血小板的GPⅡb/Ⅲa和CD62p表达量均显著高于健康志愿者（均P〈0.01）。BA-ELISA测定表明,SZ21和阿司匹林可抑制ADP诱导的血小板功能（但P〉0.05）。该方法和FCM同时测定健康志愿者、AMI、ACI和DM患者的GPⅡb/Ⅲa和CD62p表达水平。测定数据经直线回归分析得r=0.86。结论 BA-ELISA检测血小板的膜糖蛋白,可精确判断血小板的功能状态,为指导临床预防、诊治、评估疾病提供简便、可行的方法。活化的血小板膜糖蛋白测定可从凝血的角度对上述疾病的早期诊断、病情进展的判断、抗血栓药物的评估及疾病预后的判断起到辅助作用。     

低砷饮水人群血管内皮损伤早期效应标志物的观察

目的 观察低砷饮水人群血管内皮损伤早期效应标志物的改变。方法 在江苏省盱眙县沿河村,选择90名当地居住10年以上的居民作为观察对象,并根据家庭饮水含砷量将其分为3组,即＜ 10、10 ～ 50、＞ 50μg/L组,分别为32、28、30人。分别采用硫代巴比妥酸(TBA)法、比色法、比浊法、硝酸还原酶法检测观察对象血浆氧化应激指标丙二醛(MDA)、抗超氧阴离子自由基（O-·2）和炎症反应指标C-反应蛋白(CRP)、一氧化氮(NO)水平,采用流式细胞术检测全血中循环内皮祖细胞(CEPCs)数量。结果 ＜10、10 ～ 50、＞50μg/L组间血浆MDA(几何均数分别为61.1、65.5、67.5 μmol/kg)、O-·2（几何均数分别为4774.6、5143.3、4736.0 U/kg）、CRP[(5.92±2.44)、(5.11±2.40)、(5.55±2.96)mg/L]、NO水平[(659.8±387.5)、(667.4±486.6)、(762.1±763.2)μmol/kg]比较,差异均无统计学意义（F值分别为0.00、0.46、0.80、0.47,P均＞0.05）。各组CEPCs数量(中位数分别为0.96×10-5、0.77×10-5、1.59×10-5)比较,差异有统计学意义(F=5.08,P＜ 0.05),其中＜10、10～50μg/L组明显低于＞50μg/L组（q值分别为4.58、6.65,P均＜0.05）。结论 低砷暴露人群在尚未出现明显的氧化应激损伤及炎症改变情况下,体内CEPCs水平随水砷明显变化,提示低砷暴露人群可能存在血管内皮损伤。