系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞凋亡相关研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)的凋亡变化及凋亡相关因子的表达.方法 密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养SLE患者及健康人骨髓MSCs,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面Fas、Bcl-2表达水平及Caspase 8活性;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术榆测Fas、Bcl-2、Bax、Bcl-w、Caspase 8及凋亡细胞蛋白酶激活因子(Apaf)-1 mRNA表达水平;免疫组织化学染色检测胞质细胞色素C表达水平;统计学采用Mann-Whitnev秩和检验.结果 SLE患者BMSCs凋亡明显高于健康对照组[(64±10)%和(14±9)%,U=0,P<0.05];SLE患者BMSCs抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达显著低于健康对照组[(11±9)%和(56±18)%,U=0,P<0.05],其mRNA表达水平同样显著低于健康对照(0.2±0.2和2.4±0.7,U=24.P<0.05);SLE患者BMSCs胞质中细胞色素C表达显著增多[(56±21)%和(16±16)%,U=1,P<0.05].SLE患者BMSCs细胞内Caspase 8活性增强[(49±14)%和(16±12)%,U=0,P<0.05],但基因表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义(U=28,P>0.05);SLE患者与健康对照组BMSCs均高表达Fas,差异无统计学意义(U=19,P>0.05).结论 SLE患者BMSCs凋亡增多,可能与Bcl-2表达减少、胞质中细胞色素C表达增多和Caspase 8活性增强,从而激活内源性及外源性凋亡途径相关.

Abstract：

Objective To investigate the apoptosis of bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs)from systemic lupus erythematosus(SLE)patients and the expression of apoptotic molecules.Methods BMSCs were isolated from bone marrow of SLE patients and normal controls by density eentrifugation and adhesive culture in vitro.The apoptosis of BMSCs were evaluated by TUNEL assay.The expressions of Fas.Bcl-2 and the activity of Caspase 8 were detected by flow cytometry.Real-time PCR technique was used to determine the gene expressions of Fas,Bcl-2,Bax,Bcl-w,Caspase 8 and Apaf-1.Meanwhile,cytochrome C was detected by immunocytochemistry.Statistical analysis was conducted with t-test and Mann-Whitney rank test.Results The percentage of apoptotic BMSCs increased in SLE patients compared with healthy donors[(64±10)%vs [14±9)%,U=0,P<0.05 ].The expression of Bcl-2 in BMSCs of SLE patients was lower than the normal controls at protein leve[(11±9)%vs(56±18)%,U=0,P<0.05 ],and mRNA level(0.2±0.2vs 2.4±0.7,U=24,P<0.05).More cytochrome C positive pellets in the cytosolic fraction could be detected in BMSCs from SLE patients compared with healthy controls [(56±21)%vs (16±16)%,U=1,P<0.05].The activity of Caspase 8 was enhanced[(49±14)%vs(16±12)%,U=0.P<0.05 ],although with no significant difierence at mRNA Ievel.Both groups expressed Fas but with no significant difference (U=19,P>0.05).Conclusion BMSCs from SLE patients undergo more apoptosis,the mechanisms may be associated with the down regulation of Bcl-2,up-regulation of Cytoehrome C in cytoplasm and the activation of Caspase 8,which directs the intrinsic and extrinsic apoptosis pathways.     

以免疫应答为基础的《医学免疫学》综合实验设计及实践

以往的《医学免疫学》实验课程内容设置相对分散、不同节次之间缺乏联系,不能有效地展现机体内免疫应答这一连续的反应过程。为解决这些问题,南京医科大学基础医学院免疫学系在前期《医学免疫学》实验课的基础上,紧密围绕机体抗感染免疫应答这一主线,制定了综合实验课程方案：(1)小鼠外周血中性粒细胞的吞噬作用、(2)流式细胞术检测小鼠外周血中性粒细胞含量、(3)酶联免疫吸附试验检测小鼠外周血肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor α,TNF-α)含量。通过建立细菌腹腔免疫小鼠模型,本研究依次串联出这3个目前免疫学常用且先进的实验方法,同时检测指标契合抗感染免疫应答的时序性和整体性。学生通过显微镜能够直接观察到具有分叶核的中性粒细胞,胞质内可见被吞噬的白色葡萄球菌;白色葡萄球菌腹腔免疫小鼠后外周血中性粒细胞(CD11b⁺Ly-6G⁺)占外周血单个核细胞比例显著升高,血清中TNF-α的含量也显著增高。该综合实验的实施有助于学生更系统地理解机体应对细菌感染的早期免疫应答过程：外周血中性粒细胞对细菌的直接吞噬、中性粒细胞的活化增殖及炎性细胞因子(...     

合成生物学在微生物传感器中的应用

微生物传感器是一种以微生物活细胞或细胞碎片作为敏感元件,结合电化学换能器,对被分析物具有高度选择性的装置,具有操作简便、成本低、使用周期较长等优点。作者在介绍微生物传感器的工作原理并分析目前存在问题的基础上,以合成生物学为切入点提出其在微生物传感器中的应用思路,并对目前的应用实例进行分析,最后对未来的发展作出展望。     

原发性干燥综合征患者外周血B细胞FcγRⅡb的表达及临床意义

目的 探讨原发性干燥综合征(pSS)患者外周血B细胞FcγRⅡb的表达及其临床意义.方法 流式细胞术检测19例pSS患者、15名健康对照外周血B细胞FcγRⅡb的平均荧光强度(MFI);酶联免疫吸附试验( ELISA)方法测定19例pSS患者血清抗SSA、SSB抗体水平,统计学分析采用t检验、单因素方差分析、SNK-q检验及Pearson相关分析.结果 pSS患者CD 19+CD27+记忆性B细胞亚群的百分率[(20.8±2.7)％,19例]显著低于健康对照组[(37.8±2.2)％,15名](t=-4.002,P＜0.01);活动期pSS患者外周血CD19+CD27+记忆性B细胞FcγRⅡb的MFI[( 74±8),13例]低于非活动期组[(132±11),6例]及健康对照组[(139±12),15名](F=10.699,P＜0.01);pSS患者外周血CD19+CD27+记忆性B细胞FcγRⅡb的MFI与pSS疾病活动指数(SSDAI)呈负相关(r=-0.744,P=0.0003);抗SSA、SSB抗体阳性组pSS患者CD19+CD27+记忆性B细胞FcγRⅡb的MFI[分别为(75±3),12例;(48±7),5例]显著低于抗SSA、SSB抗体阴性组[分别为(122±11),7例;(108±9),14例](t分别为-4.336和-3.776,P均＜0.01);抗SSA抗体阳性组pSS患者CD19+CD27+记忆性B细胞FcγRⅡb的MFI与抗SSA抗体滴度呈负相关(r=-0.685,P=0.014).结论 pSS患者活动期外周血记忆性B细胞FcyRⅡb表达与SSDAI呈负相关,并与抗SSA抗体呈负相关.FcγR Ⅱb表达异常可能在pSS免疫发病机制中起重要作用.     

从免疫系统相关发病机制探讨COVID-19防治策略

新型冠状病毒肺炎 (Corona Virus Disease 2019, COVID-19) 自暴发以来，已造成全球 2.1% 的人口感染和数百万人死亡，成为当前全世界重要的公共卫生问题。免疫系统对控制和清除新型冠状病毒 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2, SARS-CoV-2) 至关重要，免疫系统反应失调可加重肺组织炎性损伤及其他器官损害。本文将从免疫机制的角度，就SARS-CoV-2的感染过程、宿主针对其产生的固有免疫及适应性免疫应答、SARS-CoV-2疫苗的分类和制备及免疫治疗药物进行详细阐述，为COVID-19的诊断分型、病情监控及治疗预后提供科学依据。     

IκB激酶复合物对系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞迁移及增殖的作用

目的 观察系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移、增殖变化,并探讨IKB激酶复合物(IKK-β)对SLE患者BMSCs迁移及增殖的影响.方法 采用密度梯度离心和贴壁分离法分离培养6例SLE患者及6名健康人BMSCs；通过细胞划痕实验和构建侵袭小室检测BMSCs迁移、活细胞计数(CCK-8)检测BMSCs增殖能力；实时荧光定量聚合酶链反应技术检测IKK-β mRNA表达水平；蛋白印迹法检测IKK-β、磷酸化IKK-β表达水平；观察加入IKK-β抑制剂对SLE患者BMSCs增殖、迁移的影响.采用t检验或Mann-Whitney秩和检验.结果 ①体外培养过程中,SLE患者BMSCs迁移率(5.2±3.8)‰与增殖能力(0.21±0.49)显著低于健康对照组BMSCs迁移率(7.0±2.9)‰及增殖能力(1.00±0.35),差异有统计学意义(P＜0.05);②SLE患者BMSCs IKK-β基因表达水平(1.9±1.4)与健康人(1.9±2.4)相比差异无统计学意义(P＞0.05)；SLE患者BMSCs磷酸化IKK-β蛋白表达水平(1.41±0.19)显著高于健康人(0.93±1.24),差异有统计学意义(P＜0.05)；③IKK-β抑制剂能够增加SLE患者BMSCs的迁移率(3.3±1.6)‰和增殖能力(1.13±0.26),高于未加IKK-β抑制剂组迁移率(2.3±1.1)‰与增殖能力(0.8l±0.17),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SLE患者BMSCs在体外培养过程中,迁移、增殖能力较健康人显著降低,其机制可能是SLE患者体内IKK-β的表达增加,通过活化核因子-KB信号通路,影响迁移与增殖相关基因的表达,从而抑制了BMSCs的迁移与增殖.