以肿瘤-睾丸抗原mRNA为特异性标记评价肝癌患者肝移植的预后

目的探讨肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)患者原位肝移植 (orthotopiclivertrans plantation ,OLT)手术前后外周血中MAGE 1、SSX1及CTp11基因mRNA表达与预后的关系。方法用巢式RT PCR方法检测OLT手术前后外周血单个核细胞 (PBMC)中上述 3种基因的表达 ,并对 2 6例患者进行随访。结果HCC患者术前PBMC中MAGE 1、SSX1和CTp11基因mRNA的表达率分别为4 0 0 % (14 / 35 )、37 1% (13/ 35 )和 31 4 % (11/ 35 ) ,6 0 0 % (2 1/ 35 )患者的PBMC中至少可以检测到其中一种基因表达。 16例术前PBMC中检测到上述基因表达者 ,术后肿瘤复发 /转移率 (75 0 % )显著高于10例不表达这 3种基因者 (30 0 % ) (P =0 0 4 3) ;在术前及术后这 3种基因mRNA持续呈阳性或者由阴性转为阳性的 2 0例患者中 ,15例 (75 0 % )术后发生肿瘤复发 /转移 ,而 3种基因mRNA持续阴性或者由阳性转为阴性的 6例患者无 1例复发 /转移 (P =0 0 0 2 )。结论MAGE 1、SSX1及CTp11基因mR NA可以联合作为肿瘤特异性标志物用于检测HCC患者血循环中的肿瘤细胞 ,并有助于选择OLT受体及判断预后。     

肿瘤-睾丸抗原SSX1基因mRNA在肝细胞肝癌中的表达

目的：检测肿瘤－睾丸抗原SSX1基因mRNA在肝细胞肝癌（HCC）中的表达情况。方法：用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）对47例HCC患者的癌组织和相应癌旁组织以及15例肝硬化和15例正常肝组织的SSX1基因mRNA表达情况进行检测，随机选择4例RT－PCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定。结果：47例HCC患者中，39例表达SSX1 mRNA，阳性率为83％，相应的癌旁组织中有3例为弱阳性，其中2例患者获得了离癌灶更远处的活检组织，对其进行RT－PCR检测，结果显示阴性；所测的15例肝化和15例正常肝组织均未检测到SSX1的表达。4例DNA测序结果表明RT－PCR产物确为SSX1 cDNA。SSX1的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清甲胎蛋白（AFP）水平、乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染无显著相关性（P＞0．05）。结论：SSX1在HCC中呈高比例、高特异表达，可望成为HCC免疫治疗的理想靶位。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体抑制大鼠肝纤维化的实验研究

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorgamma,PPARγ)配体对大鼠肝纤维化的作用.方法 将Wistar大鼠40只随机分为两组,对照组(20只)和罗格列酮组(20只).所有动物使用饮水中加人质量比0.3‰硫代乙酰胺的方法 制作肝纤维化模型.对照组喂饲普通颗粒饲料.罗格列酮组喂饲含200 ppm罗格列酮的颗粒饲料.喂饲6个月后,用RT-PCR方法 检测肝纤维化大鼠肝脏PPARγ、TGF-β 1 及Ⅰ型前胶原mRNA表达,用Westernblot法检测PPARγ、TGF-β 1 、Ⅰ型胶原及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,用Van Gieson(VG)染色的方法 检测肝组织切片的胶原表达情况.结果 罗格列酮组与对照组相比,PPARγmRNA表达显著增强(t=6.93,P<0.01),TGF-β 1 mRNA(t=3.89,P<0.01)和Ⅰ型前胶原mRNA表达显著降低(t=5.67,P<0.01).PPARγ、TGF-β 1 及Ⅰ型胶原蛋白表达所得结果 与RT-PCR结果 相一致.罗格列酮组与对照组相比,α-SMA表达显著降低(t=3.12,P<0.01).罗格列酮组肝组织切片的胶原染色低于对照组(t=3.47,P<0.01).结论 PPARγ配体能够抑制大鼠纤维化肝脏的胶原产生,在体内具有一定的抗肝纤维化作用.     

原位肝移植术后胆管并发症的预防与处理

目的 探讨原位肝移植术后胆管并发症的原因及防治。方法 2000年5月至2002年1月38例原位肝移植的临床资料进行回顾性研究。结果 本组38例病人术后共发生胆管并发症9例（9/38，24%）。其中单纯胆瘘4例，胆管空肠吻合口狭窄，肝内胆管结石，胆管狭窄合并胆泥形成，胆瘘继发胆管狭窄，胆管狭窄合并肝内胆汁瘤各1例。此9例中2例死于严重感染，7例痊愈。结论 原位肝移植术后胆管并发症病因复杂，后果严重。首先应该注重预防，并做到早期诊断。逆行性胰胆管造影术（endoscopic retrograde cholangiopanreatography,ERCP）和经皮经肝胆管造影术（percutaneous tran-shepatic cholangiography,PTC）等辅助性介入治疗手段应受到重视。     

应用广谱抗体CK3-6H5检测细胞角蛋白在人类上皮组织来源的肿瘤细胞系中的表达

目的 应用广谱抗细胞角蛋白（Cytokeratin,CK）抗体CK3-6H5检测上皮组织来源的肿瘤细胞系中CK的表达,并研究应用此抗体检测血液循环中此类肿瘤细胞的敏感性。方法 应用CK3-6H5标记QGY-7703等26种人类上皮组织来源的肿瘤细胞系、人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji、人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat以及健康志愿者外周血单个核细胞,通过免疫荧光显色和免疫细胞化学技术检测其中CK的表达情况;以表达CK的人肝癌细胞系QGY-7703作为靶细胞,以不同的比例分别掺入到健康志愿者PBMC中,以免疫磁珠去除CD45^＋的白细胞,对肿瘤细胞进行富集,流式细胞仪检测其中CK^＋CD45^-肿瘤细胞数目,分析用CK3-6H5检测外周血循环肿瘤细胞（circulating tumor cell,CTC）的敏感性。结果 所有上皮组织来源肿瘤细胞系均表达CK,而健康志愿者和淋巴瘤细胞系Raji、T淋巴细胞白血病细胞株中未检测到CK表达。当向2×10^8个PBMC中掺入20个QGY-7703细胞时,经免疫磁珠富集后,行FACS分析,仍能检测到12个肿瘤细胞。结论 CK3-6H5抗体复合物可以识别常见的上皮来源的肿瘤,应用CK3-6H5抗体标记肿瘤细胞,采用免疫磁珠富集技术以及流式细胞技术,可以用于有效检测外周血中上皮来源的肿瘤细胞。     

敲除Smad4基因对小鼠肝纤维化与肝癌发生和发展的影响

目的 探讨敲除Smad4基因对转化生长因子β1(TGFβ1)信号传导系统和对肝纤维化及肝癌发生和发展的影响.方法 采用CCl_4/乙醇分别诱导野生型小鼠(Smad4+/+)与Smad4基因敲除小鼠 (Smad4+/-)20周,观察每组小鼠发生肝纤维化和肝癌的情况,并采用RT-PCR方法检测Smad4、TGFβ1、Smad2、Smad3、Smad6,基质金属蛋白酶抑制剂1、基质金属蛋白酶2、9等基因的mRNA表达程度.采用χ~2检验与t检验进行统计学处理. 结果 纤维化肝脏Smad4的表达较正常对照组明显增强.与野生型相比,Smad4杂合子小鼠的TGFβ1-Smads信号传导系统有所减弱.经CCl_4/乙醇诱导后,总体上Smad4杂合子小鼠发生肝纤维化的程度 (评分为2.12±0.88)显著低于野生型小鼠 (评分为2.87±0.88,t=3.163,P=0.003);Smad4杂合子小鼠组的肝癌发生率 (32.0%) 也明显低于野生型小鼠组 (41.9%).结论 敲除Smad4基因能有效弱化TGFβ1信号传导,从而减缓肝纤维化的程度;同时,能减缓肝癌的发展进程.     

应用CT抗原肽诱导肝癌患者特异性细胞毒反应的研究

目的 研究应用不同肿瘤睾丸抗原（CTA）多肽诱导肝细胞肝癌（HCC）患者特异性细胞毒反应的情况。方法 RT-PCR方法检测一例HLA-A2阳性表达的HCC患者肝癌组织中三种CT抗原（MAGE-1，MAGE-3和NY-ESO-1）基因mRNA的表达情况，用免疫磁珠从该患者外周血单个核细胞（PBMC）中分离出CD8 T细胞作为效应细胞；将其余自体CD8-PBMC分别与三种CT抗原肽共孵育，经γ-射线照射后作为抗原呈递细胞（APC），分别与CD8 效应细胞进行混合淋巴细胞培养。7天后同法再刺激患者的CD8 T细胞1次，诱导形成细胞毒T淋巴细胞CTL），同时了以相同的CD8 效应细胞，加入IL-2培养作为对照组。培养两周后将三种CT抗原肽刺激的效应细胞，分别与带有相应抗原肽的T2靶细胞共孵育来检测杀伤效应。效应细胞，靶细胞（E：T）为10：1；用IFN-γ细胞因子分泌检测法，通过流式细胞仪检测产生IFN-γ的效应CD8 T细胞的频数来反映杀伤活性。结果 该患者MAGE-3和NY-ESO-1表达阳性，MAGE-1表达阴性，培养第14天，效应细胞共增加至原细胞数的4倍，NY-ESO-1抗原肽刺激的效应细胞对靶细胞（T2细胞 NY-ESO-1抗原肽0杀伤活性为10.0%;MAGE-3抗原肽刺激的效应细胞对靶细胞（T2细胞MAGE-3抗原肽）杀伤活性为8.5%;MAGE-1抗原肽刺激的效应细胞对靶细胞（T2细胞 MAGE-1抗原肽）杀伤活性为3.2%。结论 本实验结果表明，应用HCC患者阳性表达的CT抗原肽，可以诱导出该患者特异的细胞毒性T淋巴细胞，其杀伤活性较之无抗原肽和阴性抗原肽刺激明显增强。     

直肠子宫内膜异位症一例

直肠子宫内膜异位症一例彭吉润，杨魁春，回允中患者女性。３８岁。因４～５年来下腹及肛门坠胀不适、间断大便带血；数月来便次数增多（约５次／天）、大便变细、有里急后重感而就诊。拽诊触及距肛缘６～７ｃｍ直肠右前壁肿物，肿物下缘有环形狭窄，指套偶有血迹，临床疑...     

重组腺相关病毒介导抑癌基因联合诱导人肝癌细胞系凋亡与生长抑制研究

目的 观察腺相关病毒介导的抑癌基因p53,p16和p21联合治疗肝癌的可能性和效果。方法 用携带人野生型p53,p16和p21的腺相关病毒分别或联合转导人肝癌细胞系HLE，HepG2,QGY-7701,QGY-7703,BEL-7402,SMMC-7721，通过体外及裸鼠体内实验研究转基因的表达及对癌的促凋亡和生长抑制作用。结果 腺相关病毒介导的p53,p16及p21对人肝细胞肝癌细胞系均有明显的促凋亡作用，体外凋亡率约30％左右，体内生长抑制率30％－44％；联合感染肝癌细胞效果更明显，体外凋亡率达56％，体内癌生长抑制率65％。结论 腺相关病毒介导的外源抑癌基因p53，p16和p21不仅对多种肝癌细胞系均有诱导凋亡和抑制生长作用，联合应用治疗肝癌更具有明显的相互协同作用。进一步提高病毒滴度和纯度是腺相关病毒作为载体进行基因治疗的目标。     

肝癌组织内类阿片肽LVV-血衍吗啡素-6的作用

目的:分析肝癌组织与正常肝组织中血衍吗啡素类肽含量的差异并探究其意义.方法:肝癌患者12例,利用弱酸洗涤法从肝癌细胞和肝细胞表面提取肽段,然后用高压液相(HPLC)和质谱分析这些肽段并进行差异比较,筛选肿瘤特异性肽段.用这些肽段(0,10-7,10-8,10-9,10-10,10-11,10-12mol/L)处理人肝癌细胞株HLE,采用MTT法、流式细胞仪法观察其对肝癌细胞的生长、细胞凋亡的影响.结果:从7例患者的肝癌细胞表面成功检测出一条天然的类阿片肽——Leu-Val-Val(LVV)-血衍吗啡素-6(Mr1160.76).不同浓度LVV-血衍吗啡素-6均对HLE细胞有抑制作用,并且当浓度为10-7和10-8mol/L时有显著意义(24h:10-7vs10-8:P=0.044,10-8vs10-9:P=0.047;48h:10-7vs10-8:P=0.031,10-8vs10-9:P=0.040).同时,LVV-血衍吗啡素-6可诱导HLE细胞发生凋亡(浓度为0,10-7,10-8,10-9mol/L时的凋亡率分别为0.38%±0.09%,20.23%±1.25%,12.64%±2.15%,1.65%±0.34%),而阿片受体阻断剂naloxone能够逆转这种抑制效应(以上对应浓度时凋亡率分别为0.41%±0.11%,1.23%±0.45%,0.98%±0.55%,1.34%±0.43%).两组在LVV-血衍吗啡素-6浓度为10-7和10-8mol/L时有显著差异(P<0.05).结论:LVV-血衍吗啡素-6为肝癌细胞的病理产物,可激活阿片受体对肝癌细胞产生抑制作用.