刚地弓形虫P30(SAG1)基因的克隆与表达

目的构建弓形虫P30基因表达载体并获得重组表达蛋白。方法将弓形虫P30基因的开读框用PCR扩增,NcoⅠ和HindⅢ酶切后,与同样酶切的表达质粒pET30a(+)经T4连接酶连接,然后转化到DH5α中。菌液经PCR扩增和质粒酶切及基因测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS PAGE和Westernblot进行鉴定。结果扩增的P30基因片段为750bp,重组质粒诱导表达产物分子质量单位为30ku,与理论值相符。Westernblot确认重组质粒表达蛋白与小鼠抗弓形虫单克隆抗体(P30McAb)发生特异性反应。结论成功构建重组体并获得弓形虫主要表面抗原P30的高效表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。     

刚地弓形虫ROP2-P30复合重组蛋白疫苗对BALB／c小鼠免疫保护性的研究

目的用刚地弓形虫ROP2-P30复合重组蛋白疫苗免疫BALB/c小鼠观察对机体的影响,为研制安全有效的弓形虫疫苗奠定基础。方法PCR方法从刚地弓形虫基因组中扩增出ROP2和P30片段,将这两个片段分别亚克隆至pET-30a原核表达载体中,表达出ROP2-P30复合重组蛋白。用蛋白疫苗免疫BALB/c小鼠,ELISA检测免疫小鼠后体液中抗体和细胞因子的变化,观察攻击试验小鼠的的死亡率。结果ROP2-P30复合重组蛋白疫苗免疫BALB/c小鼠诱导机体产生大量的IgM、IgG抗体和IFN-γ、IL-2及IL-4细胞因子。攻击试验表明,复合重组蛋白免疫组和对照组相比,小鼠的存活时间明显延长。结论ROP2-P30复合重组蛋白免疫BALB/c小鼠诱导其产生高水平的体液和细胞免疫应答,该复合重组蛋白是抗刚地弓形虫感染的候选疫苗之一。     

腺病毒siRNA抑制RhoA基因并联合TNF-α诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的建立RhoA基因的腺病毒siRNA系统,并联合TNF-α诱导肝癌细胞凋亡,分析RhoA在肿瘤细胞中的功能和作用。方法用已构建的RhoA干扰质粒构建RhoA的腺病毒siRNA系统,筛选重组病毒并感染HepG2细胞,应用Western blot和RT-PCR检测RhoA蛋白表达和基因表达水平。感染Ad-siRNA-RhoA腺病毒的肝癌细胞用TNF-α诱导后进行MTT以及细胞内DNA片段化检测。结果成功构建RhoA基因的siRNA腺病毒系统。用重组病毒感染肝癌细胞,RhoA蛋白表达抑制率为76.48%;RhoA基因的mRNA转录水平降低74.46%。MTT检测显示,感染腺病毒Ad-U6-control对照组以及感染腺病毒Ad-siRNA-RhoA实验组的细胞A值差异无统计学意义(F=5.41,P>0.01),即利用siRNA抑制肝癌细胞中RhoA表达,肿瘤细胞凋亡不明显。TUNEL检测显示,RhoA腺病毒siRNA联合TNF-α致肿瘤细胞凋亡作用显著。结论构建的腺病毒siRNA载体系统能抑制目的基因RhoA的表达,联合TNF-α能抑制肿瘤细胞生长和增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,为肿瘤基因功能的基础研究和肿瘤基因治疗打下了实验基础。     

山东省金乡县人群寄生虫感染情况的调查

按全国人体寄生虫分布调查实施细则的要求和方法,于1987年对山东省金乡县的城郊、胡集和司马等3个乡、镇所辖6个村庄(点)人群进行调查。共调查2860人,寄生虫感染者1827例,其感染率为63.9％。共查见寄生虫9种,其中原虫4种,即溶组织内阿米巴、结肠内阿米巴、哈氏内阿米巴和贾第虫,其感染率依次为1.9％、13.3％、     

山东省控制华支睾吸虫病的研究

目的调查华支睾吸虫病流行范围,流行规律和危害程度,探索华支睾吸虫病的诊断与防治方法,采取有效的防治技术措施,降低人群感染率及其危害,达到阻断传播控制流行。方法使用回顾性研究方法,对全省40年来有关华支睾吸虫病的调查、研究、防治资料等进行统计分析研究。结果山东省1962年发现华支睾吸虫病,全省132个县（市、区）中的107个有不同程度的流行,人群感染率为1.51%,村感染率为1%～30%,个别学校高达40%以上,85.7%的感染者为15岁以下少年儿童。经过几十年的综合防治,至上世纪90年代人群感染率降至0.3%,91.6%的流行村感染率降至1%以下,以县为单位统计40%的原流行县未检出感染者,2002年重点县区人群感染率降至0.04%。结论山东省已成功控制华支睾吸虫病流行。传染源查治与健康教育相结合是主要的控制措施。     

山东省胶东地区居民肠道寄生虫感染及相关认知行为状况调查

目的 目的 了解山东省胶东地区肠道寄生虫感染及相关认知行为现状, 为制定现阶段相应的防治策略提供科学依 据。方法 方法 按照分层抽样法, 选择胶东地区6个县的18个村作为调查点。采用改良加藤厚涂片法 （Kato?Katz） 检测调查点 ≥ 3岁常住居民粪便中的常见肠道寄生虫虫卵, 12岁以下儿童以透明胶纸肛拭法检查蛲虫卵。每调查点随机抽取50户家 庭, 采用结构式问卷调查家庭基本情况及居民寄生虫病防治知识知晓和卫生行为形成情况等。结果 结果 粪检6 163人, 肠道 寄生虫总感染率6.91%, 其中鞭虫、 蛔虫、 钩虫感染率分别为6.56%、 0.62%、 0.21%; 12岁以下儿童蛲虫感染率为0.51%; 未检 测到华支睾吸虫、 带绦虫等其他虫卵。人群寄生虫病防治知识知晓率为49.54%; 饭前洗手、 便后洗手、 生吃瓜果蔬菜洗净、 下地干农活不光脚、 不喝生水等健康行为形成率分别为97.78%、 91.95%、 88.81%、92.42%、 86.48%。结论 结论 胶东地区人群 肠道寄生虫感染水平较低, 但地区间差异较大; 寄生虫病防治知识知晓率不高, 但卫生行为形成情况较好。应加强健康教 育及重点人群服药, 积极推进农村改水改厕工程, 尽快降低肠道寄生虫病的危害。     

刚地弓形虫ROP2-P30复合基因在E.coliBL21中的表达和鉴定(英文)

目的获得编码弓形虫RH株棒状体蛋白2和主要表面抗原1重组复合蛋白为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制作准备。方法用PCR技术从弓形虫基因组DNA中扩增出ROP2和P30基因片段,分别克隆入pMD18T载体,并对重组入外源基因的质粒通过PCR.,双酶切和测序鉴定,将pMD ROP2中的ROP2基因片段经EcoRⅠ和HindⅢ酶切,连接等反应,亚克隆入pET30a(+)原核表达载体构建pET ROP2载体,然后再将pMD P30中的P30基因片段与经BglⅡandEcoRⅠ酶切的pET ROP2载体连接,构建pET ROP2P30载体,经含卡那霉素的LB平板筛选,酶切和PCR鉴定。阳性重组质粒转化到大肠埃氏菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS PAGE进行鉴定。大量的表达融合蛋白经纯化和复性后,用Westernblot分析。结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出特异的ROP2和P30基因片段,成功构建成pET ROP2和pET ROP2P30载体,成功表达了弓形虫棒状体蛋白2和弓形虫棒状体蛋白与主要表面抗原1的融合复合蛋白,表达出的蛋白经纯化复性后具有免疫反应性。结论ROP2和P30基因重组后,在原核表达载体中表达出的蛋白经纯化复性后具有活性,获得纯化和复性的弓形虫ROP2和ROP2P30的高效表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。     

间接荧光抗体试验应用于华支睾吸虫病诊断及流行病学调查的研究

1986年我们曾用间接荧光抗体试验进行了诊断华支睾吸虫病的效果观察,1987年又对其在流行病学调查中的应用价值进行了实验研究。一、材料与方法 (一)抗原制备将感染华支睾吸虫囊蚴的家兔饲养30d后剂其肝脏,从胆管中取出成虫,经生理盐水冲洗干净后用香糊包埋,进行冰冻切片,片厚5μ,然后将切片贴附于涂有0.5％明胶的载玻片上,每张玻片     

隐孢子虫分类研究进展

隐孢子虫为体积微小的球虫类寄生虫,广泛寄生于多种脊椎动物体内,可引起一种以腹泻为主要临床表现的人兽共惠性原虫病。近年皋,隐孢子虫病的检出率逐年增高,已被列为世界最常见的6种腹泻病之一。在国外,隐孢子虫已被列为艾滋病患者的常规检查项目。本文主要介绍近年来隐孢子虫在形态学、分子生物学等方面分类学研究的进展。     

山东省部份县区猪带绦虫病流行情况调查

近年来,我省猪带绦虫病的流行有上升趋势。为了解该病流行情况和流行各环节可能存在的问题,我们先后于1985年和1986年,在兖州、高唐2县6个乡镇的18万余人口范围内进行了调查。1 调查结果1.1 人群猪带绦虫病感染情况在兖州县5个区、镇,共调查163941人,根据粪内排出节片确定猪带绦虫病现患症者共153人,患病率平均为0.09%。各乡、镇平均患病率在0.03～0.12%范围。发现既往有排节片历史者281人,根据其发病年份分布情况,可见患病人数有逐