抗凋亡蛋白BFL1/hA1研究进展

在细胞凋亡的调控过程中，Bcl-2家族蛋白发挥了关键作用。BFL1／hA1是Bcl-2家族中分子结构、作用途径和转录调控研究得比较深入的一个分子。BFL1／hA1通过与Bcl-2家族促凋亡成员Bid的功能形式tBid的BH3结构域紧密结合，阻止了tBid与促凋亡蛋白Bak和Bax相互作用，从而阻止了细胞色素C向胞质中释放，抑制细胞凋亡的发生。佛波酯（phobol ester）和炎症细胞因子如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）等可以有效地诱导BFL1／hA1的表达。包括NF-κB在内的多种转录因子通过蛋白质和蛋白质及蛋白质和DNA相互作用形成一个大的转录调控复合物——增强体结合到BFL1／hA1基因的5’调控区，促进其转录水平的上调。     

蛋白泛素途径及其非降解功能研究新进展

泛素化是单个或多个泛素在泛素激活酶、泛素结合酶及泛素蛋白连接酶的作用下共价修饰底物蛋白质的过程。在蛋白质降解的过程中，泛素化标记被蛋白水解酶体特异性识别，发挥着枢纽的作用。而近年来的研究发现。泛素化不仅仅是蛋白质降解的标志，它有更为广泛的用途，参与了大量的生命活动。这些研究极大地丰富了对泛素化蛋白水解系统的认识，也使得在分子水平上对蛋白质降解异常导致的顽疾进行治疗不再是梦想。     

他莫昔芬体外促进HepG2细胞脂肪变性观察

目的：研究他莫昔芬（TAM）对体外培养的HepG2细胞脂肪变性以及脂类代谢调控关键因子表达的影响。方法应用油酸（50μmol/L）处理HepG2细胞,诱导细胞脂肪变性体外模型,同时给予不同浓度的TAM （5～20μmol/L）干预72 h;采用油红O染色和甘油三酯含量测定检测HepG2细胞内脂质聚集情况;应用蛋白印迹法检测固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）、脂肪酸合成酶（FAS）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）、肉酯软脂酰基转移酶（CPT1）和微粒体甘油三酯转移蛋白（MTP）的表达;采用细胞活性检测试剂盒测定细胞活性。结果在干预72 h后,模型组细胞内甘油三酯含量为（16.53＆#177;0.17） mg/100 mg蛋白质,在5μmol/L TAM处理细胞内甘油三酯含量为（17.77＆#177;0.05） mg/100mg蛋白质,与模型组无显著性差异,但在10μmol/L和20μmol/L TAM处理组较模型组分别增加了31%[（21.57＆#177;0.16） mg/100 mg蛋白质]和44%[（23.82＆#177;0.44） mg/100 mg蛋白质],（P＆lt;0.05）;TAM上调细胞内SREBP-1c、FAS、SCD和MTP蛋白表达,但并不改变CPT1蛋白表达;TAM在5～20μmol/L范围内不影响HepG2细胞活性。结论 TAM可促进油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性,其主要机制可能是通过上调SREBP-1c及其下游基因,如FAS和SCD的表达而增加了脂肪酸的合成。     

泛素连接酶CUL4A-DDB1复合体参与DNA损伤修复的研究进展

泛素化修饰在DNA损伤信号中发挥重要功能,包括细胞周期监控、DNA修复、细胞衰老和程序性死亡的调控。CUL4A-DDB1泛素连接酶通过DCAFs靶向调控特异性的底物,启动DNA切除修复机制对受损DNA进行修复。近期的研究表明CUL4A-DDB1泛素连接酶协助DNA修复因子与受损DNA的识别,来维持基因组的稳定性和正确性。     

RNA干扰应用新进展

RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)是近年发展起来的一种特异的靶基因失活技术 ,它可以象基因敲除一样非常有效地鉴定特定基因的功能。RNAi已被证明是破译各种生物中的基因功能的强大工具 ,并将为新型高效药物的开发和基因治疗的发展开辟新的领域。     

TAR DNA结合蛋白43与泛素体外共相分离机制初步研究

目的 探究TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)与泛素共相分离的动态变化特征及机制。方法 构建TDP-43全长及各结构域原核表达质粒,纯化泛素和TDP-43全长及各结构域截短体蛋白,构建泛素和TDP-43体外的相分离体系,利用荧光显微镜观测通过液-液相分离形成的液滴的动态特征。将泛素和TDP-43真核表达质粒转染入HEK293T细胞内表达,利用荧光显微镜观察TDP-43与泛素形成聚集体并通过pull-down实验检测TDP-43泛素化修饰。结果 成功纯化得到泛素和TDP-43全长及各结构域截短体蛋白。体外相分离体系中发现TDP-43全长和CTD截短体蛋白能够与泛素发生共相分离,且延长孵育时间液滴最终变成流动性较差的聚集体。在细胞内共转染泛素和TDP-43质粒,二者形成不可溶的聚集体,应激条件下TDP-43能够被泛素化修饰。结论 TDP-43能够与泛素蛋白发生共相分离,主要通过TDP-43的CTD结构域与泛素间的多价相互作用驱动,且该凝聚体液滴易形成流动性差的聚集体。在应激条件下,当细胞内蛋白稳态失衡时,TDP-43与泛素被募集到一起形成聚集体且聚集体内的TDP-43会被泛素化修饰。...     

人分化相关基因Ndr3的克隆、组织表达谱及亚细胞定位研究

目的 :研究人源分化相关新基因Ndr3的克隆、组织表达谱及亚细胞定位。方法 :采用电子拼接和PCR扩增技术 ,从人 2 2周孕龄胎肝cDNA文库中获得与人Ndr1基因同源的一段表达性序列标签 ,继而从成人脑cDNA文库分离出Ndr3的全长cDNA ;采用点杂交分析和多组织Northern杂交分析方法 ,确定其组织表达谱 ;将其亚克隆入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP_N1,用脂质体介导法转染COS_7细胞 ,确定其亚细胞定位。结果与结论 :Ndr3的全长cDNA为 2 879bp ,其开放阅读框 (ORF)编码 375个氨基酸 ,染色体定位为 2 0q12_11.2 3。Northern杂交和点杂交分析显示 ,NDR3在脑组织和睾丸中高表达 ,在肾、心肌和前列腺中有一定量的表达 ,在胚胎组织的表达较低 ,在 8种人肿瘤细胞中的表达极低。与绿色荧光蛋白融合表达的实验结果显示 ,该蛋白定位于核外胞浆内     

SIAH1介导了TRB3的泛素化和降解

目的 利用酵母回转实验和免疫共沉淀实验验证SIAH1和TRB3之间的相互作用并探讨其功能相关性..方法 将全长形式的TRB3基因和SIAH1基因分别克隆入酵母表达载体pDBLeu和pPC86中,共转化至MaV203酵母感受态细胞,验证其相互作用,然后分别构建至真核表达载体pCMV-Myc和pFLAG-CMV-2中,采用...