环介导等温扩增技术及其在分子诊断中的应用

环介导等温扩增技术作为新兴的分子生物学技术,已经广泛应用于各种病原微生物的分子水平的研究,并且取得了令人鼓舞的成绩。文中就环介导等温扩增技术的原理及在分子诊断中的应用作一综述。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3D^pol的研究进展

口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。FMD是OIE规定的A类动物疫病之一,严重影响畜牧业的发展,对世界公共卫生存在着巨大影响,造成巨大的经济损失,素有“政治经济病”之称。     

AsiaI口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备AsiaI口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体（mAb）并进行鉴定。方法：用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白为抗原免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠，经过3次免疫后，取其脾细胞与sp2／0骨髓瘤细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株，用SDS-PAGE电泳、间接ELISA以及微量细胞中和试验对所获得的mAb的特异性进行鉴定。结果：成功获得3株能稳定传代并分泌抗AsiaImAb的杂交瘤细胞株，分别命名为：188、5E1、5E2，其分泌的mAb为IgG1（188）和IgG2a（5E1、5E2）亚类，他们均能特异性的识别VP1重组蛋白和AsiaI型全病毒，其腹水效价在1：10^5～1：10^6。微量细胞中和试验表明该mAb能很好地识别灭活的FMDV，中和效价达1：1024以上。交叉试验表明该mAb具有高度特异性，型间无交叉反应，证明所获得的mAb均完全针对AsiaI FMDV抗原决定簇。结论：在口蹄疫病毒mAb的研究中，VP1重组蛋白有望代替活病毒来制备mAb。AsiaI口蹄疫病毒VP1 mAb的成功制备，为进一步研究和开发新型口蹄疫的检测方法和抗原表位奠定了基础。     

O型口蹄疫病毒蛋白酶编码序列及氨基酸序列变化的分析

目的与方法从GenBank中下载了19株O型口蹄疫病毒的Lab、3C、3D基因,结合本实验室收录的FMDVOA/58Lab、3C、3D的序列信息,分析比较了三种FMDV蛋白酶(Lpro,3Cpro,3Dpol)的编码序列和氨基酸序列。结果这FMDV具有的蛋白酶的编码序列在突变上没有显著差异(P>0.05),而在氨基酸序列的突变上存在着显著差异(P<0.01)。通过多重比较发现Lpro与3Cpro和3Dpol在氨基酸突变上存在差异(P<0.05),而3Cpro和3Dpol之间突变差异不显著。结论利用Swiss-pdbViewer蛋白质分析软件模拟三种蛋白酶中各个突变热点氨基酸残基的替换,发现突变热点不影响三种蛋白酶的空间结构。这表明病毒基因组在复制过程中的突变只是FMDV变异的原始动力,而FMDV变异的方向性进化动力是感染FMDV的宿主细胞对病毒蛋白酶功能造成的选择压力。     

口蹄疫病毒细胞受体研究进展

病毒细胞受体是指能特异地与病毒结合,介导病毒进入并促使病毒感染宿主细胞的膜组分,被认为是病毒宿主范围和组织嗜性的一个决定因素。病毒必须在细胞受体的参与下才可能入侵宿主细胞,进入扩增生命的循环,细胞也因此遭到破坏,甚至导致宿主机体的死亡。口蹄疫病毒（Foot—and—Mouth Disease Virus,FMDV）是引起口蹄疫（FMD）的病原,对口蹄疫病毒细胞受体的研究将有助于揭示口蹄疫病毒的感染途径、复制过程、致病机理和疫病预防及治疗等一系列问题,细胞受体的研究已经成为目前口蹄疫病毒研究中的重点领域,现将FMDV细胞受体研究进展综述如下。     

猪FMDV受体整联蛋白β1亚基LBD多克隆抗体的制备和初步应用

目的表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β1亚基配体结合域β1LBD,制备兔抗β1LBD多克隆抗体检测β1p-CHOK1细胞β1亚基的表达。方法利用PCR方法扩增整联蛋白β1LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后与pGEX-4T-1原核表达载体相连,构建的pGEX-β1LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA和Western blot方法分别鉴定抗体的效价和特异性,并用制备的抗体以间接免疫荧光抗体法对β1p-CHOK1细胞中β1亚基的表达进行检测。结果SDS-PAGE电泳分析显示阳性菌经诱导后表达一Mr约为42000的GST-β1LBD融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β1LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12800以上,具有较高的特异性,间接免疫荧光显示β1p-CHOK1细胞β1亚基表达于其细胞表面。结论制备了具有高亲和性和特异性的兔抗猪源整联蛋白β1LBD多克隆抗体,为深入研究猪源整联蛋白β1在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础。     

口蹄疫病毒固有免疫研究进展

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性并可远距传播的动物传染病.世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类动物疫病之首,我国农业部也把FMD列为17个第1类动物疫病中的第1位,充分显示了国内外对FMD的关注程度.     

T细胞受体触发机制的研究进展

T细胞受体( TCR)触发是TCR与配体结合诱导信号进入细胞膜,引发TCR识别抗原过程.关于TCR的触发机制有多种说法,现有3种主要识别触发机制包括:聚集,即在TCR同MHC/抗原肽复合体结合时因有关分子的物理性聚集而被触发;构象改变,在TCR同MHC/抗原肽复合体结合时引起分子结构的改变而被触发;分散与再分布,TCR同MHC/抗原肽复合体结合时引起的TCR-CD3复合物与其他细胞膜相关蛋白的分散与再分布.本文中将综述每一种机制的研究进展,推测T细胞识别过程中3种机制均涉及.