鹿茸多肽对胎大鼠脑神经干细胞体外诱导分化的实验研究

目的　探讨鹿茸多肽对胎大鼠脑神经干细胞体外分化的影响。　方法　从E12～ 14d的Wistar大鼠脑中分离扩增获得大量神经干细胞后 ,加入不同浓度的鹿茸多肽 ,观察其对胚胎神经干细胞分化的影响 ,并通过免疫组织化学染色检测神经干细胞分化为神经元和星形胶质细胞的状况。　结果　 5 0 μg L组分化细胞总数与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 1) ;5 0 μg L、10 0 μg L、2 0 0 μg L组神经元特异烯醇化酶 (NSE)阳性率与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 1) ,并呈一定的剂量依赖性。　结论　鹿茸多肽在体外可明显促进神经干细胞向神经元分化 ,为鹿茸多肽应用于神经系统损伤性疾病的治疗提供了实验依据。     

鹿茸多肽对胎鼠脑神经干细胞体外诱导分化的实验研究

目的：探讨鹿茸多肽(Velvet antler polypeptides-VAP)对胎鼠脑神经干细胞(Neural stem cell-NSC)体外分化的影响。方法：从E12—14天的Wistar大鼠脑中分离扩增获得大量NSC后，加入不同剂量的鹿茸多肽刺激NSC分化，以含有10％小牛血清DMEM／F12培养基组为对照组，实验组为加有5μg／L、10μg／L、25μg／L、50μg／L、100μg／L、200μg／L、     

三氯化镧对CBRH-7919细胞CyclinD1和CDK4蛋白表达的影响

背景与目的:研究三氯化镧(LaCl3)对大鼠肝癌细胞CyclinD1和CDK4蛋白表达的影响.材料与方法:采用体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919,分别加入0.01、0.10、1.00 mmol/L LaCl3培养1、3、5 d后观察CBRH-7919细胞生长变化;运用流式细胞术、MTF实验和免疫细胞化学检测与G1期调控有关的CyclinD1和CDK4的变化情况,以培养液中不加LaCl3体外培养CBRH-7919作为对照.结果:0.10、1.00 mmol/L LaCl3组培养后3、5 d对细胞的生长均具有抑制作用,与对照组比差异具有统计学意义(P＜0.01);G0/G1期细胞百分数均有显著性增加,与对照组比差异均具有统计学意义(P＜0.01);CyclinD1、CDK4阳性表达均显著减弱,与对照组比差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:LaCl3可通过下调CyclinD1和CDK4,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长.     

神经组织细胞特异性蛋白在大鼠羊膜上皮细胞中的表达

背景:有证据表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原,且可以分泌多种神经营养因子及递质。若羊膜上皮细胞能够代替神经细胞,其神经营养作用必将为治疗神经推行性病变带来广阔前景。目的:检测神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中是否表达?设计:重复测量设计。单位:吉林大学第二临床医学院,吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室。材料:实验于2004-10/2005-10在吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室完成。选取清洁级孕12～14d的Wistar大鼠1只,将分离出的羊膜上皮细胞用于实验。小鼠抗大鼠神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶单克隆抗体、兔抗大鼠神经元特异性烯醇化酶和NT-3多克隆抗体(武汉博士德公司);大鼠抗大鼠Musashi抗体(日本庆应义塾大学岗野荣之教授惠赠)。方法:取孕12～14d的Wistar大鼠胎盘,剥离羊膜获得上皮细胞,在37℃、体积分数为0.05的CO2环境下,胰蛋白酶消化5min,加入DMEM/F12培养液,以5×109L-1的浓度接种于培养瓶中。培养3d后,细胞以1×108L-1的浓度接种于预先涂有多聚赖氨酸的直径35mm平皿中,用质量浓度为40g/L的多聚甲醛固定20min。采用免疫细胞化学染色方法对神经元特异性抗原微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶在羊膜上皮细胞中的表达情况进行检测。主要观察指标:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况。结果:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察:羊膜上皮细胞培养24h后,细胞扁平呈成纤维细胞样。3～5d后,胞体饱满,核大而圆,核仁清晰,突起发达,并互相连成网状。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况:培养4d后免疫细胞化学染色结果可见,羊膜上皮细胞表达Nestin、神经元特异性烯醇化酶、乙酰胆碱转移酶以及Musashi、神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白。结论:羊膜上皮细胞与神经组织细胞具有一定的同源性,可望作为治疗神经系统疾病新的细胞来源。     

大鼠羊膜上皮细胞神经营养因子基因的表达

目的 建立胚胎不同时期羊膜上皮细胞(AECs)表达脑源性神经营养因子(BDNF)与神经营养素-3(NT-3)mRNA的时相图,找出AECs分泌BDNF、NT-3的最佳时期.方法 采用实时荧光定量PCR检测胚胎不同时期(11,13,17,21 d)AECs中BDNF与NT-3 mRNA的表达差异.结果 绘制出大鼠AECs中BDNF、NT-3的基因表达差异时程图:BDNF的表达随着胚胎发育持续上调,至17 d达到最高,然后其表达开始下调;NT-3的表达在13 d达到最高,然后开始下调.结论 初步确定13～17 d是大鼠AECs分泌BDNF、NT-3的最佳时期.     

红景天素对老龄大鼠垂体生长激素细胞的影响

采用放射免疫技术、垂体生长激素细胞特殊染色法体视学方法对老龄大鼠血液中生长激素含量、垂体生长激素细胞的核质比和细胞核直径进行测试。结果:血液中生长激素含量,给药组3.222±0.5757ng/ml,对照组2.0480±0.7855ng/ml;生长激素细胞的核质比,给药组1.0700±0.1606,对照组0.4700±0.0572(P<0.01);生长激素细胞核直径,给药组16.8557±1.0982μm,对照组14.8356±1.0386μm(P<0.05)。结果表明,红景天素能使老年大鼠生长激素细胞核增大,核质比增加,从而使细胞蛋白质合成增加,生长激素合成增加,血中的生长激素含量增加。由于生长激素对人体的…     

三氯化镧对CBRH-7919细胞细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4蛋白表达的影响

背景:国内外多年的研究表明稀土化合物在体内、外均具有明显的抑瘤性能。目的:观察三氯化镧对大鼠肝癌细胞细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4蛋白表达的影响。设计:对照观察。单位:吉林大学第一临床医院肾病科。材料:实验于2002-06/2003-07吉林大学基础医学院组织胚胎教研室细胞培养室完成。CBRH-7919细胞按三氯化镧剂量不同分为4组,即空白对照组,0.01,0.1,1.0mmol/L三氯化镧组,每组分别培养1,3,5d,每组细胞各接种6复孔。方法:以体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919为研究对象,给予0.01,0.1,1.0mmol/L三氯化镧,培养后1,3,5d观察CBRH-7919细胞生长变化。①运用流式细胞术计算各期细胞所占比例。②四甲基偶氮唑蓝实验测定各孔吸光度值(A值)。③免疫细胞化学检测与G1期调控有关的细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4的变化情况。主要观察指标:CBRH-7919细胞在不同剂量和不同培养时间的细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4的表达情况。结果:①三氯化镧对CBRH-7919细胞生长的作用:0.1,1.0mmol/L三氯化镧组培养后3,5d吸光度值低于空白对照组(3d分别为1.140±0.070,0.706±0.092,1.461±0.087;5d分别为1.888±0.020,0.625±0.037,2.544±0.032),差异有显著性意义(P<0.05,0.001)。②三氯化镧对CBRH-7919细胞G0/G1期百分率的影响:1.0mmol/L三氯化镧组培养后1,3,5dG0/G1期细胞百分率高于空白对照组[分别为(60.70±0.20)%,(39.49±0.67)%;(61.66±0.97)%,(45.56±1.00)%;(69.92±0.18)%,(49.24±0.27)%],差异有显著性意义(P<0.01,0.001);0.1mmol/L三氯化镧组培养后5dG0/G1期细胞百分率高于空白对照组[分别为(58.88±0.73)%,(49.24±0.27)%],差异有显著性意义(P<0.05)。③三氯化镧对CBRH-7919细胞细胞周期素D1和细胞周期素依赖性激酶4阳性表达的影响:0.1,1.0mmol/L三氯化镧组培养后1d细胞周期素D1和细胞周期素依赖性激酶4表达(A)明显低于空白对照组(分别为562±35,453±22,860±82;705±84,680±28,762±16),差异有显著性意义(P<0.05,0.01,0.001)。结论:三氯化镧可通过下调细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长。     

NT-3基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

目的检测神经营养素-3（NT-3）基因转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）后的表达情况。方法采用密度梯度离心法获取SD大鼠BMSCs，体外培养、传代。取第4代细胞，用脂质体介导法将NT-3真核重组表达质粒pIEGFP-NT-3转染BMSCs，G418筛选获得阳性细胞，用免疫细胞化学法检测NT-3转染效果。结果在阳性细胞中能够检测到NT-3基因表达，但细胞形态并没有因为NT-3的转入而有明显改变。结论通过质脂体介导法可将NT-3基因转入BMSCs中，并能稳定表达。     

1例垂体瘤术后致下丘脑综合征的护理

总结1例下丘脑综合征的护理经验。根据患者的临床症状及病因进行护理。     

三氯化镧对CBRH-7919细胞Cyclin D_1基因表达的影响

目的:研究三氯化镧对大鼠肝癌细胞CyclinD1基因表达的影响,探讨三氯化镧抑制肝癌细胞生长的机制。方法:以体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919为研究对象,给予0.01、0.1、1.0mmol/LLaCl3,培养3、5、7d后,运用流式细胞术检测CBRH-7919的细胞周期时相变化。采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学技术检测CyclinD1的基因表达。结果:0.1、1.0mmol/LLaCl3组培养3、5、7d后,G0/G1期细胞百分数均有显著性增加;CyclinD1的转录和蛋白表达均显著减弱。结论:LaCl3可通过下调CyclinD1的转录和蛋白表达,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长。