丹酚酸B诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的:体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并研究中药单体丹酚酸B诱导MSCs向心肌样细胞分化.方法:用贴壁培养法分离、培养、纯化MSCs,免疫荧光法检测细胞抗原CD44和CD34.分别用含5 μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)和30 mg/L丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSCs 24 h后,RT-PCR法检测培养1,7,14和21 d心肌特异性转录因子NKX2.5,GATA-4和心肌特异性蛋白α-actin mRNA的表达,用免疫荧光法检测诱导后α-actin的表达情况.结果:获得纯化的MSCs,免疫荧光检测细胞表面标记CD44呈阳性,CD34呈阴性.诱导后细胞形态逐渐发生变化.RT-PCR显示NKX2.5和GATA-4 mRNA在MSCs有基础性的表达,而分别以5-aza和丹酚酸B处理24 h后,NKX2.5和GATA-4mRNA表达增强,7 d时表达达高峰,以后维持在高水平,与空白对照组相比,有统计学差异(P＜0.01).未诱导的MSCs α-actin mRNA表达呈阴性,丹酚酸B诱导后的第14日,出现α-actin mRNA的表达.结论:用贴壁培养法可获得纯化的MSCs,丹酚酸B可诱导MSCs向心肌样细胞分化.     

杆状病毒多基因表达系统介导的轮状病毒样颗粒表达与组装

目的 构建能同时表达轮状病毒vp2、vp6、vp7基因的重组家蚕杆状病毒,并在BmN细胞中进行初步表达.方法 利用MA104细胞繁殖人A组轮状病毒,RT-PCR扩增病毒结构蛋白vp2、vp6、vp7基因,连接至转移载体pFBDM和pUCDM中,同时引入含IE1启动子的绿色荧光蛋白基因利于检测感染和表达量,再分别通过Tn7及Cre-LoxP重组构建重组病毒.为方便检测基因的表达,在VP7的C-末端添加6-组氨酸(6-His)标签,可通过ELISA等方法快速检测目的 基因表达.结果 扩增获得了轮状病毒三个结构蛋白基因,构建了能高效组装轮状病毒样颗粒的重组表达载体,ELISA检测VP7得到了表达,在BmN细胞中观察到病毒样颗粒.结论 成功构建杆状病毒多基因的表达系统,为生产多哑基蛋白复合物,研究大分子结构提供借鉴.     

丹酚酸B对骨髓间充质干细胞SCF表达的影响

目的研究中药单体丹酚酸B对骨髓间充质干细胞(MSCs)中干细胞因子(stemcell factor,SCF)的影响。方法用贴壁培养法分离、培养和纯化MSCs,取第三代MSCs进行实验。用含不同浓度丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSCs,ELISA法检测培养24、48、72h的上清中SCF的含量;RT-PCR法检测培养24、48、72h的SCF mRNA的表达。结果膜型和可溶型SCF mRNA均有表达。随着培养时间的增加,0.3μg/ml、3μg/ml、30μg/ml丹酚酸B可明显促进SCF的分泌和SCF mRNA的表达(与空白对照组比较,P<0.05),而0.03μg/ml丹酚酸B组和空白对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论丹酚酸B可促进MSCs分泌SCF并促进SCF mRNA的表达,提示SCF可能在中药丹参治疗心肌梗死中发挥了重要作用。     

丹酚酸B对骨髓间充质干细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响

目的 体外分离、培养和纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSC),并研究中药单体丹酚酸B对MSC增殖和分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 用贴壁培养法分离、培养和纯化MSC.免疫荧光法检测细胞抗原CD44和CD34.用含不同浓度丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSC 24 h后,用MTT法检测细胞增殖水平.RT-PCR检测培养24 h、48 h、72 h 后VEGF mRNA的表达.结果 获得纯化的MSC,免疫荧光检测细胞表面标记CD44呈阳性,CD34呈阴性.MTT结果 显示,0.3 mg/L和3 mg/L丹酚酸B均可促进MSC的增殖,与空白对照组差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05),而003 mg/L和30 mg/L丹酚酸B组细胞的增殖与空白对照组差异均无统计学意义(P>0.05).随着培养时间的增加,0.03、0.3、3和30 mg/L丹酚酸B均可明显促进VEGF mRNA的表达,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),而空白对照组的VEGF mRNA表达无明显变化.结论 用贴壁培养法可获得纯化的MSC.丹酚酸B可促进MSC增殖和VEGF mRNA的表达.     

胚胎干细胞向心肌细胞分化及中药干预研究

胚胎干细胞(ES)在体外分化培养条件下可以分化出各种组织细胞,其中包括心肌细胞,而且ES在体外向心肌细胞分化与体内完整胚胎心肌发育过程相符合。ES细胞还是研究心肌细胞发育分化机制、分子机制及鉴定其关键基因的理想模型。文章对ES细胞及其定向分化为心肌细胞的分子机制及中药干预研究进行综述。参考文献18篇。     

狂犬病毒HEP-dG株的拯救

目的筛选免疫原性高、致病性低的狂犬病疫苗候选株。方法应用反向遗传技术,在狂犬病毒弱毒株HEP-Flury株全基因组3'-N-P-M-G-L-5'的假基因区域(G与L之间),插入一个G基因,构建携带双G基因的全长感染性克隆,其与辅助质粒共转染BHK-21细胞,盲传十代,用荧光抗体和RT-PCR鉴定病毒。结果成功获得携带双G基因的狂犬病毒HEP-dG株,该病毒在BHK-21细胞中稳定生长,其病毒滴度达到1010FFU/mL。结论HEP-dG株会为研制高效的狂犬病病毒基因工程口服疫苗提供了良好的疫苗候选株。     

三聚氰胺对大鼠肾功能影响的实验研究

目的：研究三聚氰胺对SD大鼠肾功能的影响.方法：SD大鼠分别给予0.1、0.2、0.3、0.4、0 5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 g/（kg·d）剂量的化学纯三聚氰胺灌胃.溶媒对照组每天灌胃1%甲基纤维素溶液5 mL/kg,无菌水对照组每天灌胃无菌水5 mL/kg.在灌胃20、30和40 d,每组各取10只大鼠（雌雄各半）剖检.结果：较高剂量的三聚氰胺（0.7、0.8、0.9、1.0 g/（kg·d）灌胃大鼠,会影响其肾功能,主要表现为BUN（BUN）及肌酐（Cr）升高,肾脏脏器系数增加,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）.体视显微镜系统下观察到肾脏肿胀,肾皮质和髓质均有黄色沉淀物.肾脏病理组织形态学观察可见肾脏病变及灶性聚集的结晶.结论：灌胃三聚氰胺,会影响大鼠的肾功能,对肾脏造成损害,这可能是形成三聚氰胺泌尿系结石的原因之一.