乳猪肝细胞的分离、培养及功能检测

目的 为构建生物人工肝进行肝细胞的准备。方法 采用胶原酶半原位灌流法分离单个乳猪肝细胞,并对其活力及单层和聚集培养后的白蛋白、尿素合成功能进行检测。结果 采用本方法从每头乳猪中分离到的单个肝细胞数为(3.1±1.5)×10~(10),活性超过95％。在加入激素和生长因子的培养基中单层培养时,肝细胞功能良好,可维持2周左右。而在未加入激素和生长因子的培养中肝细胞虽能存活1周,但功能于24h后即丧失。球形聚集培养可实现肝细胞的大量培养,且生物学活性较单层培养显著提高。结论 采用胶原酶半原位灌注法所得单个乳猪肝细胞基本能满足构建生物人工肝对肝细胞数量的要求。聚集培养接种密度大,细胞生物学活性高,可用于构建生物人工肝。     

HBcAg显性失活突变体质粒的构建及体外表达

目的：探讨HBcAg显性失活突变体质粒pCDNA4-C-GFP的构建及体外表达。方法：选择编码乙肝核心抗原C基因片段及绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP)基因片段，利用基因重组技术构建成DNA质粒pCDNA4-C-GFP,并将该质粒转染肝癌细胞株HepG2。结果：通过RT－PCR检测到其RNA的表达，Confocal观察到GFP绿色荧光。结论：HBcAg显性失活突变体质粒pCDNA4-C-GFP的构建成功可以进行对HBV作用的研究。     

肝功能衰竭治疗近况

肝功能衰竭病死率高，预后差。近年来由于各国学者的努力，虽已在治疗的某些方面取得可喜的进展，但仍强调早期诊断和早期治疗。     

扶正化瘀胶囊干预慢性乙型肝炎肝纤维化作用的多中心临床研究

目的　研究扶正化瘀胶囊治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效及其安全性。方法　多中心、随机、双盲、平行对照的方法 ,入选年龄 18～ 65岁的慢性乙型肝炎肝纤维化患者。试验药 (扶正化瘀胶囊 )和对照药 (和络舒肝胶囊 ) ,均为每次 5粒 ,3次 /d口服 ;疗程 2 4周。疗程结束后进行 12周的随访。观测指标 :(1)于治疗第 0、2 4周观察肝组织病理学、HBV标志物 ,第 0、12、2 4周检测肝纤维化血清指标 (HA、LN、P Ⅲ P、Ⅳ C)、B超肝脾检查 ,第 0、6、12、18、2 4周观察肝功能 (随访期评价肝功能、血清肝纤维化指标 )。 (2 )安全性指标 :治疗前、后检测血、尿常规 ,肾功能 ,心电图。结果　 (1)受试者入组情况及人口学资料 :试验组 110例 ,对照组 10 6例 ,两组病例人口学特征、生命体征、病程、药物过敏史、既往治疗史、肝功能、纤维化血清学指标、肝组织病理学 (试验组 99例 ,对照组 96例 )、HBV标志物、肾功能等各项指标比较 ,无显著差异。 (2 )肝组织病理学 :治疗前后作活检肝组织学观察 93例 ,试验组 50例和对照组 43例治疗前纤维化分期 (S)均值分别为 2 .3 3和 2 .11。试验组治疗后S均值为 1.80 ,较治疗前显著下降。对照组治疗后S均值为 2 .14 ,与治疗前比较无显著改善。试验组活检肝组织纤维化分期判断     

Caspase-12在D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠急性肝功能衰竭中的表达及作用

目的探讨Caspase-12在D-氨基半乳糖(D-Gal)/脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肝功能衰竭发生发展过程中表达水平的变化及Caspase-12介导的内质网应激肝细胞凋亡途径在急性肝功能衰竭中的作用。方法以D-Gal/LPS联合腹腔注射诱导小鼠急性肝功能衰竭建立实验模型,在不同时间点动态检测血清氨基转移酶水平和观察肝组织病理变化,评估肝细胞凋亡和肝坏死演变过程;应用琼脂糖凝胶电泳检测肝细胞DNA凋亡条带;用半定量逆转录聚合酶链反应检测肝组织中Caspase-12 mRNA表达水平;west- ern blot检测Caspase-12、Bip/GRP78蛋白表达。结果药物诱导5h时肝组织中典型凋亡细胞增多,血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)开始升高,Caspase-12 mRNA表达明显增加, Caspase-12蛋白量表达反而减少;7h镜下出现大量肝细胞凋亡和坏死,ALT、AST水平达高峰,分别为(2564±1384)U/L和(1198±497)U/L,正常对照组为(59±17)U/L和(135±12)U/L,Caspase- 12 mRNA表达仍增加,Caspase-12蛋白表达量继续降低;9h 肝细胞坏死明显,伴散在凋亡细胞,ALT、AST水平明显下降,Caspase-12 mRNA表达较7 h下降。Bip/GRP78蛋自表达从5 h开始,至7 h逐渐增加。结论D-Gal/LPS诱导小鼠急性肝功能衰竭早期Caspase-12 mRNA表达水平逐渐升高,后期(7-9 h)降低,与肝细胞凋亡发生的时相一致;Caspase-12蛋白酶因内质网应激而被大量活化,提示Caspase-12介导的内质网应激肝细胞凋亡参与炎症性急性肝功能衰竭的发生发展,是急性肝功能衰竭中肝细胞损伤的重要机制之一,提示早期干预Caspase-12表达及活化对急性肝功能衰竭可能具有保护作用。     

血浆置换治疗慢性重型肝炎机制探讨

近年来,人工肝支持系统(ALSS)的临床应用受到广泛研究。我院引进日本产 PLASAUTO-IQ 中间型人工肝支持系统采用血浆置换疗法,治疗慢性重型肝炎34例,现将结果报告如下。1 临床资料1.1 病例来源 59例慢性重型肝炎(慢重肝)为2001年9月-2002年12月该院住院患者。诊断符合2000年全国病毒性肝炎及肝病学术会议(西安)修订的标准诊断。随机分人工肝治疗组34例(男25例,女9例。年龄19～72     

肝脏疾病时血清氨基酸的变化及其临床意义

肝脏是体内分解及转化各种氨基酸的重要器官。除亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸主要在肌肉内分解外,几乎所有的必需氨基酸都在肝脏内进行氧化分解。因而在肝功能严重损害时,常可引起血清中氨基酸的增减与各种氨基酸之间比例的变化。近年来文献中已有关于急性肝炎、酒精性肝病、慢性活动性肝炎(简称慢活肝)     

肝活检的临床应用进展

肝活检是评估肝病性质、病变程度及治疗效果的最特异的手段。本文就肝活检的指征、并发症及其处理的研究进展作一综述 ,对临床医师合理、安全应用肝活检具有一定的指导意义。Ｅｈｒｌｉｓｈ于 1883年在德国施行了首例经皮肝活检[1] 。 195 8年Ｍｅｎｇｈｉｎｉ报道“一秒钟针刺肝活检”后 ,该操作得到了广泛应用。目前肝活检的方法有 :经皮肝活检、经颈静脉肝活检、腹腔镜肝活检以及在Ｂ超或ＣＴ引导下细针抽吸活检。活检标本 ,长度为 1～ 3ｃｍ ,直径 1 2～ 2ｍｍ ,占整个肝组织的 1/ 5 0 0 0 0。 1 5ｃｍ长的标本即足以诊断弥漫性肝病 ,但…     

体内扩增及靶向激活树突状细胞免疫治疗研究进展

树突状细胞(dendritic cell，DC)作为机体的专职抗原提呈细胞(APC)，具有激活CD8^ 细胞毒性T细胞(TC)和CD4^ 辅助性T细胞(TH)作用，能启动强大的初始性细胞免疫反应，在机体抗感染、肿瘤免疫应答中发挥着重要作用。虽然自体DC疫苗的实验和临床研究显示了一定的应用前景，但是，近两年国内外学者均已注意到DC疫苗制备的费用和技术要求较高、DC在体内的抗原递呈作用还受到病原体、肿瘤组织与宿主相互作用所构成的体内微环境的限制；     

5-羟色胺受体-1a在干扰素诱导抑郁症中的作用

目的探讨干扰素(IFN)引起抑郁症的发病机理及其与5-羟色胺受体-1a基因的相关性,并研究抗抑郁症药对IFN诱导的抑郁症的干预作用.方法给予300ng/mL的IFN诱导Jurkat细胞1、2、3d,诱导细胞3d后分为两组,一组继续予IFN诱导3d,另一组停用IFN观察3d;给予300ng/mL的IFN单独和联合抗抑郁症药物(氟西汀)干预Jurkat细胞3d.采用Westernblot、RT-PCR和定量Real-timeRT-PCR方法分析5-羟色胺受体-1a基因的蛋白质和mRNA水平.结果5-羟色胺受体-1a基因的蛋白质和mRNA水平随着IFN诱导时间的增加而下降,但能在IFN撤除后得到一定程度的恢复;抗抑郁症药物(氟西汀)能改善因IFN引起的5-羟色胺受体-1a基因表达水平的下降.结论5-羟色胺受体-1a的下降可能是IFN引起抑郁症的发病机理之一;早期采用氟西汀可预防或治疗IFN引起的抑郁症.