尼尔雌醇和左炔诺孕酮对人成骨肉瘤 MG-63细胞株雌激素受体亚型的作用

目的：观察不同浓度的尼尔雌醇(NYL)和左炔诺孕酮(LNG)对人成骨肉瘤MG-63细胞株ERα和ERβ表达的作用，探讨旁分泌效应对ERα和ERβ基因表达的影响。方法：人成骨肉瘤MG-63细胞株分为（1）空白对照组：用含1% BSA无血清MEM培养液培养48 h；（2）阳性对照组：培养液中加入10-8 mol/L的17β-estradiol (E2) 培养48 h；（3）药物处理组：培养液中分别加入10-10，10-8，10-6 mol/L的NYL或LNG培养48 h；（4）药物处理+换液组：培养液中分别加入10-10 mol/L的NYL或10-8 mol/L LNG培养48 h，每12 h更换新的含有相应药物的培养液。用半定量RT-PCR检测各组细胞ERα和ERβmRNA的表达。结果：NYL及LNG均能诱导ERα和ERβ亚型mRNA表达上调，诱导ERαmRNA表达的最强作用浓度均为10-6 mol/L。NYL，LNG对ERβ mRNA表达最强作用浓度分别为10-10，10-8 mol/L。每12 h更换干预培养液对ERα表达无影响，但可抑制ERβ的表达。结论：NYL和LNG均可诱导MG-63细胞株ERα和ERβ mRNA表达上调，且2种亚型的表达存在相互制约关系；在NYL和LNG诱导ER亚型表达上调过程中ERβ的表达可能受到旁分泌作用的影响。     

单核苷酸多态性的研究进展

单核苷酸多态性 (SNPs)是指存在于某一人群或个体基因组内的单个碱基发生突变 ,正是由于这些突变 ,导致了群体与群体及个体与个体之间的差异。许多疾病的易感性、个体的药物敏感性等均与SNPs有关。建立快速高效的SNPs检测方法和强大的数据库 ,能为人类基因组功能研究和SNPs的应用研究提供坚实的基础。     

骨形态生成蛋白-4与17β-雌二醇诱导MBA-1细胞分化的研究

目的 探讨BMP-4与17β-雌二醇诱导MBA-1细胞分化的作用.方法 用骨形态生成蛋白-4(BMP-4)诱导MBA-1细胞15～22 d后进行HE染色观察细胞形态,用1型胶原染色、矿化结节染色鉴定成骨细胞功能;用BMP-4及17β-雌二醇干预MBA-1细胞后,用RT-PCR检测骨钙素的变化.结果 ①MBA-1细胞可向成骨细胞或脂肪细胞分化;②在无BMP-4或17β-雌二醇干预的情况下,MBA-1细胞在自身分化成熟过程中伴有骨钙素的表达增加;③经BMP-4与17β-雌二醇干预后,MBA-1细胞骨钙素的表达明显增加.结论 MBA-1细胞可能具有多系分化潜能,BMP-4与17β-雌二醇可上调其骨钙素表述,诱导MBA-1细胞向成骨细胞方向分化.     

胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2基因表达的影响

目的观察胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2（IRS-2）基因mRNA表达的影响。方法用胰岛素干预人成骨肉瘤MG-63细胞，半定量RT-PCR检测细胞IRS-2基因mRNA的表达量。结果10^-10mol/L～10^-6mol/L胰岛素上调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05），且具有剂量依赖性。胰岛素的调节还存在时效依赖性，10^-8mol/L胰岛素干预12h可下调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05），干预24h～48h上调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05）。结论胰岛素可影响人成骨肉瘤MG-63细胞IRS-2基因mRNA的表达，胰岛素可能对1型糖尿病患者骨质疏松的发生和发展起着重要的作用。     

人成骨肉瘤MG-63细胞分化特性及分化过程中的基因表达

观察人成骨肉瘤MG 6 3细胞分化特性及分化过程中的基因表达。在细胞培养的不同时间 ,用α 磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶 (ALP)活性 ;放射免疫法测定骨钙素 (BGP)含量 ;半定量逆转录聚合酶链反应测I型胶原、基质金属蛋白酶 (MMP) 1和基质金属蛋白酶抑制因子 (TIMP) 1基因mRNA表达 ;VanGieSon氏苦味酸酸性复红染色法染色细胞I型胶原。结果表明MG 6 3细胞接种培养第 7d后I型胶原基因表达较高。MMP 1表达量随时间推移逐渐增加 ,至第 2 4d达到高峰。第 1～ 9dTIMP 1表达量逐渐增加 ,其后基本恒定。ALP活性第 0～ 12d逐渐增高 ,至第 12d达最高 ,其后逐渐下降。第 18d后 ,细胞有许多大小不等的结节形成 ,I型胶原结节染色较无结节处深。MG 6 3细胞具有成骨细胞表型特征。MG 6 3细胞生长分为细胞增殖、骨基质成熟、骨基质矿化阶段 ,且I型胶原 ,MMP 1,TIMP 1基因表达及ALP活性呈时间特异性。     

雌三醇对MG-63细胞增殖和分化的影响

目的 研究雌三醇（Estri01）对成骨肉瘤样细胞株MG-63的作用，并与雌二醇（17-β—estradiol）对MC-63细胞的作用进行比较，从而探讨雌三醇防治骨质疏松的作用机制。方法 用雌三醇或雌二醇处理成骨样细胞株MC-63，^3H掺入法（3H—TdR）测定细胞的增殖，通过测定细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性的变化和细胞分泌的骨钙素（osteocalcin）水平的变化来分析细胞功能。结果 以浓度为0mol／L的雌三醇为对照，10^-10、10、10^～8、10^-7、10^-6mol／L雌三醇分别增加MG-63细胞增殖达0．00％、18．10％、31．62％、23．81％、14．86％；以浓度为0mol／L的雌二醇为对照，10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-8mol／L雌二醇分别增加MG-63细胞增殖达16．95％、30．86％、62．48％、28．19％、24．76％。雌二醇促进MC-63细胞增殖的作用比雌三醇的作用强。不同浓度（10^-10～10^-6mol／L）的雌三醇或雌二醇对MG-63细胞内ALP活性及骨钙素分泌量均无显著影响。Western杂交法检测到雌激素受体α和β在MG-63细胞中均有表达，雌激素受体的拮抗剂ICI 182780可以消除雌二醇和雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用。结论雌三醇可以促进MG-63细胞的增殖，但对分化无影响；雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用由雌激素受体介导。     

胰岛素受体底物家族成员的结构和组织特异性与功能的关系

胰岛素(insulin)/胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)信号通路在细胞的分化、生长、生存及代谢起非常重要作用。胰岛素信号传递首先需要胰岛素/IGF-1与胰岛素受体(insulin receptor,IR)结合,磷酸化胰岛素受体底物(insulin receptor substrates,IRSs)后形成一个紧密连接的三聚物。磷酸化的IRSs作为停靠蛋白(docking protein)再激活一系列包含Src同源结构域2(SH2)的蛋白,引起相应的生物学效应。目前发现IRSs从IRS-1到IRS-6共6种,它们的分布存在明显的组织特异性,IRS-1、2在人体多种组织中分布广泛;IRS-3则在脂肪组织中居多;而IRS-4、5、6在人体组织表达相对较低。本文拟对IRSs在组织中分布特异性与功能作一综述。     

人成骨肉瘤MG-63细胞株和正常成人成骨细胞MMP及TIMP的表达

骨重建 (ｂｏｎｅｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ)由按一定时序交替进行的骨吸收和骨形成组成 ,是骨吸收与骨形成不断交替进行的过程。骨吸收包括骨基质的降解 ,其中由成骨细胞和破骨细胞产生的基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,ＭＭＰ)起着重要的作用[1] 。基质金属蛋白酶抑制因子 (ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ,ＴＩＭＰ)能够特异性地抑制ＭＭＰ的功能 ,ＭＭＰ和ＴＩＭＰ之间的平衡状况调控着骨基质降解的速度和数量[1] 。骨组织表面覆盖一层由成骨细胞和未矿化的Ｉ型胶原等骨基质构成的屏障 ,阻止破骨细胞活化和与矿化骨基质接触 ,     

17β-雌二醇对人破骨样细胞RANK、CK mRNA表达的作用

目的　观察 17β 雌二醇 (17β E2 )对破骨样细胞破骨细胞分化因子受体 (RANK)和组织蛋白酶K (CK)mRNA表达的影响。方法　人巨细胞瘤组织经过滤、培养、洗涤、胰酶消化后再经孔径 2 5 μm微过滤网过滤 ,得到纯化的破骨样细胞 ,用RT PCR观察 17β E2 对人破骨样细胞CK及RANKmRNA表达的影响。结果　 (1)破骨样细胞具有成熟破骨细胞的表型特征 ,如抗酒石酸酸性磷酸酶和酸性磷酸酶染色阳性、具有溶骨作用 ,可表达CK和RANK ;(2 ) 17β E2 对人破骨样细胞RANKmRNA表达无明显影响 ,但下调CKmRNA表达 (P <0 .0 5 )。结论　破骨样细胞是进行破骨细胞研究的较好细胞来源 ;17β E2 可下调破骨样细胞CKmRNA表达。下调CK基因表达是绝经后雌激素补充治疗的药理机制之一。     

RANKL诱导小鼠单核细胞RAW264.7分化成成熟破骨细胞

目的观察小鼠的单核／巨噬细胞RAW264．7的一般生物学特征及在RANKL诱导下形成成熟破骨细胞的特征。方法RANKI，诱导RAW264．7细胞6d后，用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞，吖啶橙染色激光共聚焦显微镜(LCSM)观察多核细胞形态；诱导RAW264．7细胞9d后，RT、PCR检测RAW264．7细胞的破骨细胞表型和功能基因表达及其RANKL诱导后变化；诱导RAW264．7细胞12d后，钙磷覆盖的破骨细胞活性分析板观察破骨细胞的骨吸收功能。结果RAW264．7细胞TRAP染色阴性，单核或2个核，能表达破骨细胞表型和功能基因，无骨吸收功能。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成TRAP阳性成熟的多核破骨细胞，上调CathepsinK、CAⅡ、integrinβ3等基因mRNA的表达。结论RAW264．7具有破骨细胞特征性基因表达谱，是一种较好的破骨前体细胞模型。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成成熟破骨细胞。