基于耐药特性联合单细胞培养识别肝癌干细胞克隆亚群

目的:基于癌干细胞的耐药特性联合单细胞培养方法识别肝癌干细胞所在的克隆亚群.方法:以BEL-7404细胞系为研究对象,裸鼠体内移植瘤形成实验,并予阿霉素(adriamycin,ADM)8 mg/kg干预,待肿瘤直径为1.5 cm时取移植瘤细胞做原代培养,并在裸鼠体内连续传代4代,并将第4代移植瘤细胞命名为"BEL-7404-ADM-P4",根据成瘤时间检测肝癌干细胞富集情况.联合单细胞培养,取BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4所形成的克隆根据克隆形态分为全克隆、部分克隆、旁克隆,检测BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的癌干特性,即增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率;取其全克隆、部分克隆、旁克隆做hoechst33342染色,并在共聚焦显微镜下观察其染色情况;根据BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率以及hoechst33342染色情况识别癌干细胞所在的克隆亚群.结果:裸鼠体内低剂量阿霉素干预,在体内连续成瘤传代过程中,裸鼠皮下移植瘤成瘤率均为100%,且成瘤时间从第一代到第四代均有所缩短,以此达到了肝癌干细胞的初步富集;增殖能力:全克隆增殖速度最快,细胞量最大,部分克隆次之,旁克隆增殖速度最慢,并于第10天开始出现细胞皱缩死亡;克隆形成率:BEL-7404-ADM-P4-H高于BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4-M,差异有统计学意义(P<0.05);悬浮球形成率:仅BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H可形成悬浮球,其余细胞系不形成悬浮球,而BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H悬浮球形成率比较,无统计学意义(P>0.05);BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342染色情况:BEL-7404及BEL-7404-A D M-P4单克隆中全克隆都有极少数不染和低染的细胞存在,但部分克隆、旁克隆全染,且BEL-7404单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342荧光强度均强于BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆.结论:基于癌干细胞的耐药特性联合单细胞培养方法所形成的克隆亚群中,全克隆含有更高比例的肝癌干细胞.     

环状RNA SLC41A2在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状RNA SLC41A2(circSLC41A2/hsa_circ₀006260)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义, 探讨其对人NSCLC增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法使用高通量环状RNA(circRNA)测序鉴定NSCLC组织中差异表达的circRNA, 并通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)进行验证, LSD-t检验分析其表达差异。收集临床数据, 采用χ2检验分析circSLC41A2表达与各种临床病理特征的相关性。绘制受试者工作特征曲线(ROC)评价其诊断价值, 绘制Kaplan-Meier(K-M)生存曲线评价其预后评价价值。RT-qPCR检测人NSCLC细胞系(H1299、A549、HCC827、H1650、H359)和人正常肺上皮细胞系BASE-2B中circSLC41A2的表达, 采用单因素方差分析其表达差异。沉默circSLC41A2后, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测增殖和集落形成, 流式细胞术检测细胞凋亡, 细胞划痕实验和Transwell实验评估迁移和侵袭能力,...