pRluc-hKOR-pcDNA3.1 真核重组质粒的构建及在HEK293细胞中的表达

目的： 构建与海肾荧光素酶(renilla luciferase,Rluc)融合的人κ型阿片受体（kappa opioid receptor, KOR）的真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法检测人KOR与其它受体间的相互作用。方法: 以质粒pcDNA3.1-hKOR为模板,PCR方法扩增人KOR。扩增的人KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切,同时用这2种酶双酶切质粒pRluc-pcDNA3.1。然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10。挑取菌落培养,提取质粒,然后进行酶切鉴定,最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾（human embryonic kidney 293,HEK293) 细胞,免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察。结果: 扩增出了1条约1.2 kb的片段,与预期的人KOR大小相符,质粒酶切结果显示重组质粒 pRluc-hKOR-pcDNA3.1被切成2条片段,其中1条为pRluc-pcDNA3.1载体大小,另1条为目的片段大小。经测序鉴定,序列与GenBank (NM_000912)中的序列高度同源。共聚焦显微镜观察显示,阿片受体主要表达在细胞膜上。结论: 构建成功了pRluc-hKOR-pcDNA3.1重组真核表达载体,此表达载体可用于检测人KOR与其它受体之间的相互作用。     

开展医学免疫学设计性实验的探索与实践

为了培养学生的创新能力,泰山医学院免疫学教研室将设计性实验纳入实验教学大纲,并在实验教学中实施.通过实验设计,提高了学生的创新能力,培养了学生的团结协作精神,提高了学生的查阅文献能力,锻炼了学生的演讲能力等.同时,针对实验设计中存在的问题,提出了改进的措施.     

pEGFP-hApelin-R重组真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的构建与增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGEP）融合的人apelin受体（Apelin receptor,apelin-R）真核表达载体。方法以质粒pcDNA3.1-hApelin-R为模板,PCR方法扩增人apelin受体。扩增的人apelin受体用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒peGFP-C1。然后将两种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10。挑取菌落培养,提取质粒,然后进行酶切鉴定,最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾（human embryonic kidney293,HEK293）细胞,共聚焦显微镜观察。提取转染细胞的总蛋白,进行Westernblot检测。结果扩增出一条约1200bp的片段,与预期的apelin受体大小相符。酶切结果显示,重组质粒pEGFP-hApelin-R被切成两条片段,其中一条为peGFP-C1载体大小,另一条为目的片段大小。经测序鉴定,序列与GenBank（NM_005161）中的序列高度同源。共聚焦显微镜观察显示,人apelin受体主要在细胞膜上表达。Westernblot结果显示在相对分子质量69000处有一蛋白条带,与预期大小相符。结论构建成功pEGFP-hApelin-R重组表达载体,此表达载体可用于检测apelin受体和κ型阿片受体（kappa opioid receptor,KOR）或与其他受体间的相互作用。     

IMB模型在肺结核废弃物危害控制中的应用北大核心CSCD

目的确定居家治疗肺结核患者对废弃物危害控制行为的形成路径。方法以IMB模型为指导,建立废弃物危害控制信息、动机、行为技巧和行为之间的结构方程。结果行为技巧对废弃物危害控制行为有直接效应,效应值为0.634,信息和动机通过行为技巧对行为产生间接效应,效应值分别为0.210和0.299。结论可通过对信息、动机和行为技巧的干预,提高肺结核患者对废弃物危害的控制水平。     

中药治疗白色念珠菌病研究进展

白色念珠菌是一种临床上常见的致病性真菌,引起白色念珠菌病,严重危害人类的健康。本文对白色念珠菌的特性、白色念珠菌病的发病因素及中药治疗白色念珠菌病的优势及现状作一综述。     

关于高校实验教学中安全问题的思考

我国实施科教兴国战略后,高校规模迅速扩大,在校人数剧增,进入实验室学习的学生人数不断增加.随之而来的是实验设备数量大幅增加,使用率也很高,加速了实验设备老化,增加了事故隐患.同时管理松懈、操作不规范等原因,造成物理、化学、生物安全事故时有发生,这就使得实验室的安全管理比以往任何时候都显得更加重要.如何强化高校师生实验室的安全意识,增强对实验室安全管理工作重要性的认识,认真分析存在的不安全因素,采取各种必要措施,防患于未然,确保师生安全与实验设备安全,是一个值得认真研究的问题.     

中美高校课堂教学模式的比较分析

文章介绍了美国高校的几种主要课堂教学模式,阐述了我国高校课堂教学面临的困境,提出了我国高校课堂教学中应当改进的方面。     

pRluc-KOR真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的：构建与海肾萤光素酶（Rluc）融合的κ型阿片受体（KOR）真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法（BRET）检测apelin受体和KOR之间的相互作用．方法：以质粒pcDNA3．1-KOR为模板,PCR方法扩增KOR．扩增的KOR用NotI和XhoI双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pRluc．将这两种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10．挑取菌落培养,提取质粒,行酶切鉴定及测序．将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾（HEK293）细胞,免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察．结果：扩增出了1条1145bp的片段,与预期的KOR大小相符,质粒酶切结果显示pRluc-KOR被切成2条片段,其中一条为pRluc载体大小,另一条为目的片段大小．经测序鉴定,序列与GenBank（NM_000912）中的序列高度同源．共聚焦显微镜观察显示,阿片受体主要表达在细胞膜上．结论：构建成功了pRluc—KOR重组表达载体,此表达载体可用于检测KOR与apelin受体或与其他受体之间的相互作用．     

Apelin／APJ系统研究进展

Apelin肽家族是由单个基因编码并能够激活7次跨膜G蛋白偶联受体APJ的一组内源性活性肽．Apelin／APJ系统在心血管调节中具有降低血压、强的心脏收缩作用;在中枢神经系统中具有调节垂体激素释放、调节摄食、摄水、体液平衡等作用;作为脂肪细胞分泌的一个新的脂肪因子（adipokine）,可调节胰岛素的分泌;而且,最新的研究表明,apelin能够促进血管的生成．Apelin／APJ系统有望成为心衰、高血压等心血管疾病以及肥胖相关疾病的治疗靶点．这篇综述的目的是总结apelin／APJ系统的特点及功能,为进一步研究该系统提供理论依据和线索,为开发新的治疗性的药物提供有吸引力的靶点．     

以大黄素为声敏剂介导声动力疗法对小鼠 动脉粥样硬化治疗作用的研究

目的 探讨以大黄素为声敏剂介导声动力疗法对小鼠动脉粥样硬化治疗作用。方法 高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠发生动脉粥样硬化。将50只ApoE-/-小鼠分为不做任何处理的模型对照组、以5-氨基酮戊酸介导的阳性对照组、大黄素高、中、低剂量介导SDT组,每组 10只。除模型组外,其余各组自高脂4周起,分别进行相应的声动力治疗,隔天1次,于12周处死小鼠。取心脏,制备切片,通过油红染色检测斑块大小。取主动脉,进行荧光定量PCR检测基质金属蛋白酶TMP-2、TMP-9和TIMP-1,分析对斑块稳定性的影响。同样检测细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-10和TGF-β,分析对炎症的影响。结果 大黄素介导声动力疗法能减轻动脉粥样硬化斑块大小;显著增加TIMP-1而降低TMP-2和TMP-9在主动脉的表达。显著降低促炎性细胞因子TNF-α和IFN-γ而增加抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β在主动脉局部的表达。结论 大黄素介导声动力疗法可能通过降低炎症反应发挥抗动脉粥样硬化作用,该方法对于动脉粥样硬化的治疗具有积极意义。