单中心559例卵巢癌患者淋巴结转移的危险因素分析与淋巴结切除术临床决策探讨#br#

【Abstract】?Objective?To review the data of patients with ovarian cancer, analyze the related factors of pelvic lymph node metastasis (PLNM) and para-aortic lymph node metastasis (PALNM), and establish a predictive model, so as to provide suggestions for clinical practice. Methods?The clinicopathological data of 559 patients with ovarian cancer treated in Chinese PLA General Hospital from January 2014 to January 2019 were retrospectively analyzed. The risk factors affecting PLNM and PALNM were analyzed by univariate and logistic regression, and the prediction model was established. Results?Among 559 ovarian cancer patients, pelvic lymph node metastasis was found in 205 cases (36.67%) and abdominal para-aortic lymph node metastasis in 117 cases (20.93%). The independent risk factors affecting PLNM were bilateral lesions (OR=2.278, 95%CI: 1.433~3.621), pelvic metastases (OR=1.801, 95%CI: 1.154~2.810), and abdominal metastases (OR=4.177, 95%CI: 2.597~6.717) and appendiceal metastasis (OR=2.332, 95%CI: 1.389~3.915); The independent risk factors affecting PALNM were appendiceal metastasis (OR=2.324, 95%CI: 1.383~3.906) and PLNM (OR=7.629, 95%CI: 4.615~12.610). Age (≥55 years) (OR=0.566, 95%CI: 0.350~0.915) was the protective factor. The ROC curve AUC of PLNM and PALNM was 0.803 (95%CI: 0.767~0.840) and 0.793 (95%CI: 0.745~0.841), respectively. Conclusion?Bilateral lesions, pelvic metastases, intraperitoneal metastases and appendiceal metastases were independent risk factors for PLNM in ovarian cancer patients. Appendiceal metastasis and PLNM were independent risk factors for PALNM, and age (≥55 years) was the protective factor.     

体外诱导人胚胎干细胞定向分化为神经干细胞

目的:探讨体外定向诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)生成高纯度神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方法.方法:模拟体内神经细胞分化发育的不同阶段及微环境,分三阶段诱导hESCs定向生成NSCs.形态学观察结合免疫荧光细胞化学、流式细胞术和RT-PCR检测胚胎干细胞标志和神经干细胞标志;NSCs分化实验对所诱导的NSCs的分化潜能进行检测.结果:体外培养的hESCs在胚胎成纤维细胞饲养层上连续传代培养50代,仍保持SSEA-4,TRA-1-81阳性,表达Nanog基因,流式细胞术检测SSEA-4阳性表达率为83.44%;经三步法最终可诱导形成纯度高达90%以上的nestin阳性细胞,表达nestin基因,流式细胞术检测nestin阳性表达率为89.38%;诱导生成的细胞反复传代,仍表现为nestin阳性,并可进一步分化为神经元、星形神经胶质细胞和少突胶质细胞.结论:模拟体内神经分化过程的三步诱导法,可诱导hESCs生成较高纯度的NSCs,并能较好维持其干细胞特性和具有进一步分化的能力.     

年轻宫颈癌患者发病趋势及对策

目的：探讨年轻宫颈癌的发病趋势、发病特点及其治疗方法。方法：回顾性分析2002年5月至2007年5月解放军总医院妇产科收治的82例年轻宫颈癌患者的临床资料。结果：≤35岁宫颈癌患者占收治的全部宫颈癌患者的15．68％（82／523），接触性出血为主要症状，人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染率为90．14％（64／71），临床分期为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳa期者分别占53．66％（44／82）、31．71％（26／82）、12．20％（10／82）和2．44％（2／82）。病理组织学显示腺癌和鳞腺癌共23例，占28．05％。治疗以手术为主，对于有生育要求者，应结合病情，尽量保留生育功能；对术后需要放疗者可行卵巢移位术，以维持卵巢生理功能，提高术后生活质量。结论：宫颈癌的发病有年轻化趋势，年轻宫颈癌的发生与性生活紊乱有关，临床病理特征及治疗与老年宫颈癌有所不同，且腺癌发病率较高，提倡对所有年轻已婚妇女进行普查，以便及时防治癌前病变及早期癌症。     

基因芯片检测宫颈癌石蜡标本HPV感染的临床意义

目的探讨用基因芯片检测宫颈癌石蜡标本中人乳头瘤病毒(HPV)感染的可行性和临床意义。方法收集2005年5月-2007年2月在解放军总医院住院的宫颈癌患者的石蜡组织标本48例,其中鳞癌37例,腺癌11例。从组织中提取DNA后,应用基因芯片检测23种HPV亚型,即PCR扩增后产物在基因芯片上进行杂交。结果基因芯片检测出44例宫颈癌有高危型HPV感染,感染率为91.7%(44/48),其中宫颈鳞癌的感染率为94.6%(35/37),宫颈腺癌的感染率为81.8%(9/11)。单一感染33例,占75.0%(33/44);混合感染11例,其中双重感染9例,多重感染2例,分别占20.5%(9/44)和4.6%(2/44)。基因芯片检测出的主要致病亚型为HPV16,占90.9%(40/44);HPV18为第二致病亚型,占27.3%(12/44);HPV52、33、59、68等致病亚型较少见。35例宫颈鳞癌HPV感染患者中,HPV16亚型感染率为91.4%(32/35),HPV18亚型感染率为22.9%(8/35);9例宫颈腺癌中,HPV16亚型感染率为88.9%(8/9),HPV18亚型占44.4%(4/9)。结论基因芯片可检测出多种HPV亚型,特异性强,敏感性高,对宫颈癌致病机制的研究及其预防具有重要意义。     

胎儿胰岛中干细胞的分离与鉴定

目的:已证实胰腺来源的干细胞或祖细胞在体内外均能分化为胰岛素分泌细胞,但成人胰腺来源的干细胞增殖潜能较差.实验旨在分离并鉴定胎儿胰岛样细胞团中的干细胞,为糖尿病细胞移植治疗寻找可用的种子细胞.方法:实验于2006-10/2007-07在解放军军事医学科学院输血研究所干细胞与再生医学研究室完成.①对象:所用胰腺标本取自流产胎儿,胎龄14～20周,由解放军总医院妇产科提供,胎儿组织的使用得到孕妇本人的知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:无菌条件下取出胎儿胰腺,37 ℃下用0.5 g/L的V型胶原酶进行消化,分离得到胎儿胰岛样细胞团,悬浮培养,加入含体积分数为0.1胎牛血清、1 mmol/L丙酮酸钠、1 mmol/L谷氨酰胺、71.5 μmol/L β-巯基乙醇、100 U/mL青霉素和100 mg/L链霉素的RPMI1640培养基,每日转皿除去贴壁细胞,72 h后挑选出悬浮生长的胰岛样细胞团予以贴壁培养,待长成上皮样单层细胞克隆时传代.③实验评估:将悬浮培养的胰岛样细胞团行双硫腙染色.另将少部分胰岛样细胞团及第4代细胞种植于24,96孔板中,采用免疫荧光染色检测细胞表面分子标志物增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、角蛋白19、波形蛋白、胰岛素、胰高血糖素、CD29的表达情况.MTT法分析第6代细胞的生长曲线.结果:①悬浮及贴壁培养的胰岛形态:刚分离出的胰岛呈簇状,边缘不规整,细胞排列较疏松.贴壁后胰岛样细胞团由簇状逐渐展开形成上皮样单层细胞克隆.传代后细胞形态发生改变,呈梭形或分支样,增殖较快.②悬浮培养的胰岛双硫腙染色检测:分离得到的胎儿胰岛样细胞团双硫腙染色呈阳性表达.③细胞表面标志免疫荧光染色检测:贴壁的第1代细胞大部分呈增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、波形蛋白阳性,极少数细胞呈胰岛素、胰高血糖素阳性,而角蛋白19为阴性.传代后仍呈增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、波形蛋白阳性,角蛋白19弱阳性,而胰岛素、胰高血糖素为阴性,所有细胞均不表达CD29.④细胞生长曲线:传代第3天细胞进入对数生长期,第6天进入平台期,细胞生长曲线呈"S"形.结论:由胎儿胰岛成功分离并培养出具有自我更新和良好增殖能力的干细胞,稳定表达多种胰腺干细胞特征性标志,而不表达胰岛细胞标志物,提示该细胞可作为候选的胰岛干细胞用于糖尿病细胞移植治疗.     

血清剥夺与β-巯基乙醇联合诱导孕足月羊水干细胞向神经元样细胞分化

背景：羊水干细胞是一种新的干细胞来源,具有不同于成体间充质干细胞的生物特性。目前有关羊水干细胞的研究多数以孕中期羊水为基础,对孕足月羊水所知甚少。 目的：探讨孕足月羊水干细胞向神经元分化的可能性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2007-10/2008-08在解放军总医院妇产科及解放军军事医学科学院干细胞及再生医学研究室完成。 材料：孕足月羊水来自在解放军总医院行剖宫产、排除胎儿畸形的孕38~40周健康孕妇。 方法：贴壁法从羊水中体外分离培养羊水干细胞,胰酶-EDTA消化传代。取第四五代细胞,用含1 mmol/Lβ-巯基乙醇、体积分数为20%胎牛血清、10 μg/L碱性成纤维生长因子的低糖培养基预诱导24 h,去除培养液,洗涤后加入含5 mmol/Lβ-巯基乙醇的无血清低糖培养基向神经元方向诱导4.0~5.0 h;对照组不加任何诱导剂。 主要观察指标：孕足月羊水干细胞的形态及免疫表型,诱导后向神经元样细胞的分化。 结果：培养的羊水干细胞呈梭形,漩涡状排列,间质干细胞来源标志CD105,CD29及I类组织相容性抗原HLA-ABC均呈阳性表达,胚胎干细胞标志性基因SSEA-4亦呈阳性表达,不表达造血干细胞标志。诱导后,细胞形态发生明显改变,胞浆回缩,出现类似轴突的细长的两极或多极突起,免疫荧光染色神经元特异性烯醇化酶呈阳性表达。 结论：在血清剥夺与β-巯基乙醇联合诱导条件下,孕足月羊水干细胞具有向神经元样细胞分化的潜力。     

靶向人Ku70 mRNA反义核苷酸的优化设计与筛选

目的:联合应用RNAdraw和Sfold软件设计并筛选低毒且高效抑制Hela细胞Ku70 mRNA表达的反义寡核苷酸。方法:从GenBank获得人Ku70 mRNA全序列,联合应用RNAdraw与Sfold软件,根据最小自由能原理设计多条20 nt的反义寡核苷酸,脂质体转染后MTT法检测其非序列特异性细胞毒性,选择毒性最小者并转染Hela细胞,RT-PCR检测转染前后Ku70 mRNA的表达水平并进行比较。结果:靶向Ku70 mRNA设计6条20 nt的反义寡核苷酸,其中NO.1序列非特异性毒性最低,对Hela细胞的生长抑制率(50、100和200 nmol.L-1浓度组分别为4.8%、9.5%和10.2%)与脂质体组比较差异无显著性(P>0.05),用毒性最低序列转染Hela细胞后使Ku70 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),条带强度和面积与未转染组比较分别下降81.6%和77.6%。结论:联合应用计算机软件RNAdraw和Sfold对设计反义核酸有较大的指导意义,能实现较高的命中率,设计的反义寡核苷酸能有效抑制Hela细胞Ku70mRNA的表达。     

孕足月羊水干细胞的分离培养

背景:孕中期羊水干细胞的分离培养及生物学性状研究已取得了一定进展,但孕足月羊水是否也可作为干细胞来源目前报道不多.目的:探讨从孕足月羊水中分离培养羊水干细胞的可行性.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-10/2008-08在解放军总医院妇产科及解放军军事医学科学院干细胞及再生医学研究室完成.材料:孕足月羊水来自在解放军总医院行剖宫产、排除胎儿畸形及母体全身性疾病的孕妇,告知后同意留取羊水标本10例;鼠龄2个月雄性BALB/C裸鼠,体质量15～20 g,用于致瘤实验的观察.方法:从10例孕晚期(孕38～40周)羊水中分离扩增羊水干细胞进行传代培养,取第5,10代对数生长期的细胞在酶标仪450 nm波长处检测吸光度(A)值,绘制羊水干细胞生长曲线;待细胞70%汇合时换为脂肪诱导培养基用于检测体外分化能力:分别干第4代,第11代行染色体核型分析;取第4～6代羊水干细胞1×107个注射到BALB/C裸鼠皮下,观察8周.主要观察指标:①羊水干细胞的形态学特点及生长曲线.②流式细胞仪及免疫荧光法检测羊水干细胞表面标志的表达.③体外向脂肪细胞分化的能力.④染色体核犁及致瘤实验结果.结果:10例孕晚期羊水中有4例分离到梭形可持续传代的细胞群,细胞增殖旺盛;羊水干细胞原代生长较慢,传代后生长迅速,第5代,第10代细胞的生长曲线形态相似:流式细胞仪检测证实孕足月羊水干细胞表达CD44,CD29,CD105等间质来源标志,免疫荧光检测显示表达胚胎来源标志SSEA-4及oct-4;换为脂肪诱导培养基后6 d,细胞内出现透明、浑圆的小液滴,表明向脂肪样细胞分化;所有标本的染色体核型均为46XX或46XY,第11代染色体核型保持正常;羊水干细胞注射到裸鼠体内后无肿瘤形成.结论:孕晚期羊水也可分离培养到干细胞,可以作为干细胞的新来源.     

不同培养条件对孕中期羊水干细胞分离及扩增能力的影响

目的 探讨不同培养条件对孕中期羊水干细胞分离及扩增能力的影响.方法 收集2007年9月-2008年6月在解放军总医院妇产科因医疗指征引产的15例孕16～24周产妇.经腹部穿刺抽取羊水10～20 ml,收集细胞并根据培养条件不同分为4组:(1)低糖Dulbecco改良Eagle培养基(LD培养基)+10%胎牛血清(10%血清组);(2)LD培养基+20%胎牛血清(20%血清组);(3)LD培养基+15%胎牛血清+碱性成纤维生长因子(bFGF,bFGF组);(4)LD培养基+10%胎牛血清+0.1%明胶铺板(明胶组).比较各组培养的原代细胞集落数和成纤维样细胞集落数、细胞形态、可传代次数等;采用流式细胞仪、RT-PCR技术对各组干细胞特异性标志物进行鉴定;诱导各组向脂肪细胞分化;并行染色体核型分析.结果 (1)10%血清组、20%血清组、bFGF组及明胶组的羊水干细胞扩增培养的成功率分别为60%、73%、73%及60%,10%血清组及明胶组分别与20%血清组及bFGF组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);各组细胞集落数分别为(0.9±0.5)、(2.6±1.5)、(2.9±1.5)、(1.1±0.8)个,10%血清组及明胶组分别与20%血清组及bFGF组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);各组成纤维样细胞集落数比例分别为46%、49%、64%及44%,各组分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)各组第2代细胞经诱导均可分化为脂肪样细胞.(3)bFGF组有5例持续传代5次以上,细胞形态稳定,细胞数多达1 ×107个以上,与其他各组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).(4)染色体核型分析各组均正常.(5)流式细胞仪及RT-PCR技术检测显示,bFGF组传代的细胞均能表达干细胞的标志物阶段特异性胚胎抗原4(SSEA-4)、Oct-4及Nanog基因,而其他各组在传代中细胞出现分化或停止生长.结论 孕中期羊水中可成功分离获得具有干细胞特性的细胞群,适当的血清浓度及添加bFGF能增加羊水干细胞扩增培养的效率.     

胎儿胰岛中干细胞的分离与鉴定*☆

目的：已证实胰腺来源的干细胞或祖细胞在体内外均能分化为胰岛素分泌细胞，但成人胰腺来源的干细胞增殖潜能较差。实验旨在分离并鉴定胎儿胰岛样细胞团中的干细胞，为糖尿病细胞移植治疗寻找可用的种子细胞。 方法：实验于2006-10/2007-07在解放军军事医学科学院输血研究所干细胞与再生医学研究室完成。①对象：所用胰腺标本取自流产胎儿，胎龄14~20周，由解放军总医院妇产科提供，胎儿组织的使用得到孕妇本人的知情同意，实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：无菌条件下取出胎儿胰腺，37 ℃下用0.5 g/L的V型胶原酶进行消化，分离得到胎儿胰岛样细胞团，悬浮培养，加入含体积分数为0.1胎牛血清、1 mmol/L丙酮酸钠、1 mmol/L谷氨酰胺、71.5 μmol/L β-巯基乙醇、100 U/mL青霉素和100 mg/L链霉素的RPMI1640培养基，每日转皿除去贴壁细胞，72 h后挑选出悬浮生长的胰岛样细胞团予以贴壁培养，待长成上皮样单层细胞克隆时传代。③实验评估：将悬浮培养的胰岛样细胞团行双硫腙染色。另将少部分胰岛样细胞团及第4代细胞种植于24，96孔板中，采用免疫荧光染色检测细胞表面分子标志物增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、角蛋白19、波形蛋白、胰岛素、胰高血糖素、CD29的表达情况。MTT法分析第6代细胞的生长曲线。 结果：①悬浮及贴壁培养的胰岛形态：刚分离出的胰岛呈簇状，边缘不规整，细胞排列较疏松。贴壁后胰岛样细胞团由簇状逐渐展开形成上皮样单层细胞克隆。传代后细胞形态发生改变，呈梭形或分支样，增殖较快。②悬浮培养的胰岛双硫腙染色检测：分离得到的胎儿胰岛样细胞团双硫腙染色呈阳性表达。③细胞表面标志免疫荧光染色检测：贴壁的第1代细胞大部分呈增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、波形蛋白阳性，极少数细胞呈胰岛素、胰高血糖素阳性，而角蛋白19为阴性。传代后仍呈增殖细胞核抗原、胰十二指肠同源盒基因1、Nestin、波形蛋白阳性，角蛋白19弱阳性，而胰岛素、胰高血糖素为阴性，所有细胞均不表达CD29。④细胞生长曲线：传代第3天细胞进入对数生长期，第6天进入平台期，细胞生长曲线呈“S”形。 结论：由胎儿胰岛成功分离并培养出具有自我更新和良好增殖能力的干细胞，稳定表达多种胰腺干细胞特征性标志，而不表达胰岛细胞标志物，提示该细胞可作为候选的胰岛干细胞用于糖尿病细胞移植治疗。