MALDI-TOF MS在儿童血培养阳性病原菌快速鉴定中的应用

目的建立快速、准确的儿童血培养阳性病原菌鉴定方法,缩短血流感染鉴定时间,评估临床试验可行性。方法运用分离胶法提取阳性血培养瓶中富集的菌落,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF MS)对经过一系列前处理后的血培养阳性标本进行鉴定,并与病原菌纯培养鉴定后的结果对比,比较MALDI-TOF MS快速鉴定方法的符合率。结果100例血培养阳性样本中,除3例假阳性标本及3例混合感染标本外,以快速鉴定修正后的评分标准,MALDI-TOF MS快速鉴定方法与病原菌纯培养鉴定方法符合率达89.0%(81/91)。革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌鉴定符合率分别为96.2%(50/52)、92.6%(25/27);而真菌的符合率不够理想,7株真菌中仅3株鉴定相符、符合率为42.9%。结论儿童血培养阳性标本的MALDI-TOF MS快速鉴定方法,对血流感染中致病菌的鉴定准确率高、耗时短,具有临床应用可行性,可满足临床早期、快速诊断血流感染致病菌的需求,但是对于真菌样本的前处理方法有待提高。     

嗜麦芽窄食单胞菌Smqnr耐药基因的序列分析及原核表达

目的:对嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株gzch770(SMgzch770)携带的喹诺酮耐药基因Smqnr进行扩增、测序及原核表达,为研究Smqnr蛋白的功能奠定基础。方法:提取SMgzch770基因组染色体,PCR扩增Smqnr全基因并克隆入pMD18-T载体进行核苷酸序列分析;将Smqnr基因克隆至表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果:以染色体DNA为模板,成功扩增660bpSmqnr基因;序列比对分析显示其与相关报道序列核苷酸和氨基酸一致性达98%以上;SMgzch770Smqnr序列已登录GenBank(登录号:HQ315851);SDS-PAGE显示,融合基因表达的蛋白约为50kDa,其中Smqnr蛋白约为24kDa。结论:从SMgzch770中成功克隆及表达了Smqnr基因,为进一步进行Smqnr蛋白高级结构测定的结晶试验提供了必须材料。     

以DOPS为工具的形成性评价在检验科临床教学中的应用探索

操作技能直接观察评估(DOPS)作为一种兼具教学和考核功能的形成性评价工具,能够客观、全面地评估学员的学习过程,其效果已经在国外得到验证.该教学组采用传统教学终结性评价方法和DOPS为工具的形成性评价教学法对检验科住院医师进行规范化培训(简称规培),并对两种方法的规培效果进行考核评价.结果显示采用DOPS为工具的形成性评价教学法较传统教学法更具有优越性,可以更好地完善检验科的形成性评价带教系统,提高师资建设专业化水平,使学员的临床综合能力得到提升,值得推广.     

婴儿感染B族链球菌的喹诺酮耐药突变调查

目的 调查B族链球菌(GBS)的喹诺酮耐药情况,探讨耐药株的突变位点与血清学分型之间的关系.方法 选取从2014年1月至2019年12月于该中心确诊为GBS感染的婴儿临床标本中分离出的非重复菌株共120株作为研究对象.对纳入研究的GBS进行药敏试验.PCR扩增喹诺酮耐药菌株的喹诺酮耐药决定区(QRDR)靶基因GyrA和ParC,乳胶凝集法检测上述菌株的血清学分型,分析不同位点突变与血清学分型之间的关系.结果 2014-2019年共收集来自婴儿的GBS临床分离株120株,其中喹诺酮耐药株14株,喹诺酮耐药率为11.7％.将喹诺酮耐药株中的11株用于后续实验,这些耐药株100％存在GyrA的碱基突变,表现为81位丝氨酸变为亮氨酸,219位丙氨酸变为脯氨酸或缬氨酸.仅1株同时出现ParC和GyrA的有义突变.共检测出2种血清学分型,分别为Ⅲ型(90.9％)和Ⅰb型(9.1％).结论 2014-2019年,该中心喹诺酮耐药GBS临床分离株以GyrA基因耐药突变为主,表现为81位和(或)219位的氨基酸改变,血清学分型以Ⅲ型为主.     

孕晚期女性血浆D-二聚体参考区间的建立

目的建立孕晚期女性血浆D-二聚体水平参考区间。方法选取2018年1月至2019年5月广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心健康孕晚期女性(35～37孕周)408例纳入孕晚期组,同期在体检中心检查的387例健康非孕期女性纳入对照组,两组均按年龄分为18～30、30～35、35～40、40～≤45岁共4个年龄段。采用全自动血凝仪检测其血浆D-二聚体水平,计算第95百分位数值(P95)以建立其单侧参考区间。结果孕晚期各年龄段组血浆D-二聚体水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。孕晚期组各年龄段血浆D-二聚体水平差异无统计学意义(P0.05)。孕晚期女性血浆D-二聚体参考区间为≤3.42mg/L。结论初步建立了适用于该实验室的孕晚期女性血浆D-二聚体参考区间,对于孕晚期女性相关疾病确诊和排除诊断具有一定的临床意义。     

广州地区儿童空肠弯曲菌感染的检测与分析

目的掌握广州地区空肠弯曲菌引起儿童感染性腹泻的现状,探索空肠弯曲菌的检测方法及耐药状况。方法对2011~2014年该院可疑空肠弯曲菌感染患儿的粪便进行病原菌的分离培养和常规生化鉴定,然后进行聚合酶链反应(PCR)测序确认,同时对所分离菌株进行药敏试验。结果近4年来从2 088例腹泻患儿粪便标本中共检出154株空肠弯曲菌,经生化反应鉴定和PCR检测确认,PCR检测限可达6CFU/mL;该地区儿童感染空肠弯曲菌对亚胺培南和氨基糖苷类药物敏感,对氯霉素、林可霉素和红霉素等抗菌药物耐药率10%,对氟喹诺酮、氨苄西林和四环素有较高耐药率(24.03%~44.16%),对复方磺胺甲噁唑和头孢菌素耐药。结论空肠弯曲菌是儿童腹泻的重要病原菌之一,重症患者可导致严重后果,应引起重视,积极开展对疑似患者的空肠弯曲菌检测;常规检测和特异性的PCR检测有利于提高检出率。     

用聚乙二醇分离富集microRNA的方法探讨

目的 探讨用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)溶液分离富集miRNA的操作方法和分离富集效果,并与Ambion公司的miRNA分离试剂盒分离效果进行比较.方法 用PEG溶液和Ambion公司的miRNA分离试剂盒从肝脏组织总RNA中分离富集miRNA,用变性琼脂糖和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定分离效果,并在富集的miRNA中用RT-PCR扩增miR-122以鉴定是否有效地回收了miRNA.结果 PEG和Ambion公司的miRNA分离试剂盒都能有效地富集miRNA,PEG富集的RNA片段比Ambion公司的试剂盒的大.结论 PEG溶液能有效地分离富集miRNA,和Ambion公司的miRNA分离试剂盒分离效果相当,并具有操作简便、快捷及成本低廉的优点.     

反复呼吸道感染儿童血清中白介素2,4,8及受体2的检测

目的　观察反复呼吸道感染 (RRI)患儿血中部分细胞因子的状况 ,了解患儿机体的免疫功能状态。方法　采用ELISA双抗体夹心法对 70例RRI患儿及 2 0例正常儿童血清中的IL2、IL4、IL8、IL2R进行检测。结果　RRI患儿血清中IL2R比正常组明显上升 (P <0 0 1) ,IL2比正常组明显下降 (P <0 0 1) ,IL4比正常组明显上升 (P<0 0 5 )。IL2与IL2R成直线相关 (r=0 2 92 ,P <0 0 5 )。结论　RRI患儿机体体液免疫功能紊乱 ,TH1/TH2细胞因子偏移与儿童RRI的发病有关。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌儿童分离株外排泵基因与耐药关系

目的对广州市妇女儿童医疗中心患儿分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药表型,及3个外排泵基因NorA、MepA、SepA的携带情况进行调查,探讨外排泵与儿童MRSA分离株多重耐药的相关性。方法收集2013-2016年分离自就诊患儿的MRSA菌株,分析标本的基本信息和患儿的临床资料,并统计分析菌株抗生素的耐药情况。提取细菌基因组,运用PCR技术扩增3个外排泵基因并测序鉴定,采用卡方检验分析多重耐药外排泵基因携带模式与抗生素耐药率的相关性。结果收集了72株MRSA菌株,患儿以婴幼儿和新生儿为主,分别占62.50%、15.28%。分离自深部感染标本35例,其中血液标本28例,脑脊液标本6例,骨髓标本1例。所有MRSA菌株对万古霉素、替加环素、利奈唑烷、呋喃妥因、喹奴普汀/达福普汀敏感,对克林霉素的耐药率为79.17%、四环素耐药率为44.44%、庆大霉素的耐药率为11.11%,环丙沙星、利福平的耐药率为9.72%。所分离MRSA菌株中,SepA、NorA、MepA基因携带率分别为27.78%(20株)、47.22%(34株)、52.78%(38株)。携带外排泵基因的菌株对克林霉素的耐药率显著高于不携带外排泵基因的菌株,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MRSA为儿童深部感染主要致病菌之一,儿童分离MRSA耐药情况严峻,所分离的MRSA大部分携带外排泵基因,克林霉素的耐药性与携带外排泵基因正相关。     

647株金黄色葡萄球菌儿童分离株的分布和耐药性分析

目的了解儿童金黄色葡萄球菌(金葡菌)分离株耐药情况,为临床治疗用药提供依据。方法采用微生物检验报告系统统计分析金葡菌分离株中耐甲氧西林金葡菌(MRSA)比率,并分析MRSA和甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)对主要抗菌药物的耐药性差异。结果共分离到647株金葡菌,其中MRSA194株,占29.98%。MRSA和MSSA对万古霉素、替加环素、替考拉宁、利奈唑胺、奎奴普丁-达福普汀和呋喃妥因均100%敏感,对甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑、阿米卡星、青霉素的耐药率差异无统计学意义;MRSA对大多β内酰胺类药物及其含酶抑制剂、红霉素、四环素、利福平、庆大霉素、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率较MSSA高,差异有统计学意义。结论金葡菌儿童临床感染形势严峻,MRSA和MSSA对多种抗菌药物耐药率差异明显,儿童金葡菌相关性感染可根据病情及参考药敏结果选用敏感的抗菌药物治疗。