腺病毒介导钙离子ATP酶基因在骨髓间充质干细胞的表达

目的：以腺病毒（Ad—CMV）介导钙离子ATP酶基因（sarcoplasmic reticulum Ca^2＋ ATPase，SERCa2a）转染骨髓间充质干细胞（Bone marrow msenchymal stem cells，BMSCs），测定表达产物，为心力衰竭的细胞移植和基因治疗提供实验基础。方法：体外培养大鼠骨髓间充质干细胞，用已构建好的Ad5-CMVSERCa2a真核载体进行转染。通过流式细胞仪检测转染效率。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Westem杂交等方法检测SERCa2amRNA和蛋白质的表达。结果：Ad5-CMV—SERCa2a对BMC的转染率为80％左右，没有明显的细胞毒性反应。RT-PCR检测到SERCa2a，Western杂交确定SERCa2a蛋白表达。结论：腺病毒载体可有效地介导SERCa2a基因转染BMC，并表达SERCa2a蛋白，为基因治疗心力衰竭的研究奠定了基础。     

大鼠骨髓干细胞移植对慢性心力衰竭模型缺血心肌的影响

目的探讨骨髓干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,MSC)移植对慢性心力衰竭大鼠模型心肌瘢痕周边及远隔区心肌的影响。方法制作心力衰竭大鼠模型,4周后分为细胞移植组(将5×10~6MSC注射到梗死后心肌)和对照组(注射等体积磷酸缓冲液),每组7只。组织多普勒评价室壁运动。Tunel染色检测心肌细胞凋亡情况。RT-PCR及Western杂交检测Bax、Bcl2基因和蛋白表达。结果细胞移植组在心肌瘢痕区观察到血管形成。与对照组相比,治疗后21 d移植组大鼠心肌收缩及舒张期纵向峰值速度在左室前壁、后壁、前室间隔及二尖瓣水平均显著升高[左室前壁收缩峰值速率为(0.67±0.02)cm/s对(0.31±0.02)cm/s,P<0.0013;左室前壁舒张峰值速率为(1.26±0.04)cm/s对(0.4±0.01)cm/s,P<0.001];移植组大鼠心肌凋亡细胞减少[(9.2±1.1)个/mm~2对(28.5±3.6)个/mm~2,P<0.001];瘢痕远隔区细胞比对照组细胞减小[(29.5±1.6)μm~2对(78.5±3.9)/μm~2,P<0.001]。与对照组相比,移植组大鼠心脏Bax基因和蛋白表达降低,Bcl2基因和蛋白表达升高。结论MSC移植改善瘢痕边缘缺血心肌血供,增强缺血心肌功能;拮抗细胞凋亡,防止远隔区细胞肥大。     

三种影像学测量技术对左心耳封堵器尺寸选择的指导价值

  目的  初步探讨CT血管造影(CT angiography, CTA)、经食管超声心动图(transesophageal echocardio-graphy, TEE)和术中数字减影血管造影(digital subtraction angiography, DSA)3种方法测量左心耳开口直径对选择适宜尺寸左心耳封堵器的指导价值。  方法  回顾性收集2015年12月1日至2019年3月31日在解放军总医院第一医学中心接受经皮左心耳封堵术的非瓣膜性房颤患者临床资料。所有入选患者同时采用CTA、TEE、DSA 3种方法测量左心耳开口直径, 记录植入封堵器尺寸, 采用Pearson相关性分析比较3种方法测量值与植入封堵器尺寸的相关性, 采用Bland-Altman一致性分析法比较3种方法测量值与所植入封堵器尺寸的一致性。  结果  共102例符合纳入和排除标准的患者入选本研究, 均成功植入WATCHMAN封堵器。平均年龄(70.1±9.8)岁, CHA2DS2-VASc评分(评估非瓣膜性房颤成年患者发生卒中的风险)为(5.11±1.43)分, HAS-BLED评分(评估出血风险)(3.61±1.18)分。CTA测量左心耳开口直径[(22.51±3.55)mm]与DSA[(22.22±3.73)mm]接近, 无统计学差异(q=0.81, P=0.12), 两种方法的测量值均大于TEE[(20.82±0.36)mm, P均 < 0.01]。封堵器尺寸与CTA、DSA、TEE测量的左心耳开口直径呈正相关(r=0.93、0.87、0.83, P均 < 0.01)。封堵器尺寸与CTA测量值的一致性界限最窄(-7.83 mm, -2.56 mm), 差值为(-5.19±1.35)mm, 95%置信区间为(-5.46 mm, -4.93 mm); 与TEE测量值的一致性界限最宽(-11.00 mm, -2.77 mm), 差值为(-6.88±2.10)mm, 95%置信区间为(-7.29 mm, -6.47 mm)。  结论  CTA、DSA、TEE测量左心耳开口直径能为选择左心耳封堵器适宜尺寸提供较好依据, 其中CTA测量值与封堵器尺寸的相关性和一致性最佳。     

老年人肺动脉高压59例临床分析

目的:调查65岁以上老年人肺动脉高压(PAH)患病情况及肺动脉高压分型.方法:回顾性分析2005-05/2007-05月间我科收治的59例老年肺动脉高压患者临床资料.结果:与左心疾病有关的PAH为93.22%,其中与左房或左室心脏病相关的PAH 48例;与左心瓣膜性心脏病相关的PAH 7例.与肺呼吸道疾病和(或)缺氧有关的PAH为5.08%,慢性阻塞性肺疾病3例,垂体腺瘤肢端肥大症1例.年龄和肺动脉压相关系数为0.29(P>0.05).25例中重度肺动脉高压患者中心功能Ⅲ级12例,Ⅳ级8例,3例患者死亡.结论:高血压病和冠心病等左心疾病是老年PAH最常见类型.重度肺动脉高压提示预后不良.老年PAH患者年龄与肺动脉压无关.     

钙离子ATP酶2a基因修饰骨髓间充质干细胞移植改善慢性心力衰竭大鼠的心功能***☆

背景：目前仍缺乏有效手段修复心力衰竭后受损心肌，逆转心肌病理性重塑。作为一种新的治疗策略，用正常肌细胞和治疗性基因干预受损心肌正逐渐显示出其在改善心功能方面的优势。 目的：观察腺病毒转染不同代骨髓间充质干细胞的有效性和稳定性。并以携带肌浆网钙离子ATP酶（sarcoplasmic reticulum Ca(2+) ATPase，SERCA2a) 基因的腺病毒转染骨髓间充质干细胞，治疗心力衰竭大鼠，比较SERCA2a基因治疗，骨髓间充质干细胞移植以及骨髓干细胞基础的SERCA2a基因治疗慢性心力衰竭大鼠的效果。 设计：随机对照实验。 单位：解放军总医院老年心血管病科和北京医科大学生物化学系。 材料：选取购于北京医科大学动物实验中心的4周龄雄性SD大鼠作为骨髓供体。选取体质量200~250 g雌性成年SD大鼠作为细胞移植和基因治疗受体。以雄性大鼠Y染色体sry基因鉴定供体移植细胞是否在雌性大鼠受体心肌内存活。实验所用Ad-SERCa2a，Ad-EGFP的构建由我科鲁小春博士完成；第3和8代骨髓间充质干细胞自行分离培养。 方法：实验于2004-07/2005-12在北京医科大学生物化学系周春燕实验室完成。对30只雌性SD大鼠进行左冠状动脉结扎，制作急性心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠模型。将造模成功的29只大鼠随机分为4组：基因治疗组7只，干细胞移植治疗组7只，基因修饰的干细胞移植组8只，腺病毒空载体对照组7只，分别予以单纯SERCA2a基因、MSC移植、SERCA2a基因修饰的骨髓间充质干细胞移植及腺病毒空载体干预。分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，用携带SERCA2a及绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-SERCA2a-GFP）转染第3和8代骨髓间充质干细胞。 主要观察指标：采用流式细胞仪检测不同代骨髓间充质干细胞的Ad-SERCA2a-GFP转染率。分别在治疗前及治疗后14，21 d采用超声心动图检测大鼠心功能。采用免疫组化法检测大鼠心脏Ⅷ因子表达；采用RT-PCR 和Western杂交检测SERCA2a的基因和蛋白水平表达，并按照说明书检测宿主SERCA2a功能活性。 结果：①转染率：腺病毒转染不同代骨髓间充质干细胞的转染率超过80%，第3代骨髓间充质干细胞与第8代的转染率比较，差异无显著性意义（P > 0.05）。②大鼠心功能：治疗后14 d，与腺病毒空载体对照组相比，其余3组左室射血分数均明显升高（P < 0.01）。治疗后 21 d，与腺病毒空载体对照组相比，干细胞移植治疗组和基因修饰的干细胞移植组大鼠室壁增厚；干细胞移植治疗组和基因修饰的干细胞移植组左室射血分数和左室短轴缩短率改善率持续升高（P < 0.01），基因治疗组两指标改善率较治疗14 d时下降。与腺病毒空载体对照组相比，基因修饰的干细胞移植组左室前壁和室间隔收缩期纵向峰值速度显著升高（P < 0.01），左室前壁和室间隔舒张期纵向峰值速度亦呈现相同改善(P < 0.01)。③心肌SERCA2a的基因、蛋白水平表达和功能活性，以及Ⅷ因子表达：携带SERCA2a基因的骨髓干细胞在宿主心肌能有效地合成和表达有功能的SERCA2a蛋白。与腺病毒空载体对照组相比，基因修饰的干细胞移植组SERCA2a基因、蛋白表达和酶活性均显著增强。干细胞移植组心力衰竭大鼠心脏瘢痕区可观察到Ⅷ因子表达。 结论：①第3和8代骨髓间充质干细胞均具有高腺病毒转染率，骨髓间充质干细胞是基因治疗的良好细胞载体，其介导的SERCA2a基因治疗对衰竭心肌具有持续稳定的心功能改善作用。②骨髓间充质干细胞移植改善心功能的作用可能与促进血管新生有关。     

慢性心力衰竭患者获得性生长激素抵抗的研究

本研究观察慢性心力衰竭 (心衰 )患者血生长激素(ＧＨ)、胰岛素样生长因子 (ＩＧＦ 1)的变化 ,以ｌｏｇ(ＩＧＦ 1/ＧＨ)作为生长激素敏感性指标 ,探讨获得性生长激素抵抗的产生机制。1 资料与方法 :本院 2 0 0 0年 10月～ 2 0 0 1年 6月住院的慢性心衰患者 95例。心功能Ⅱ级组 2 8例 ,Ⅲ级组 36例 ,Ⅳ级组 31例。年龄 4 8～ 90 (6 0 2± 8 1)岁 ,男 4 9例 ,女 4 6例。其中冠心病和高血压性心脏病 6 8例 ,肺原性心脏病 12例 ,扩张型心肌病 12例 ,风湿性心脏病 3例。所有患者符合Ｆｒａｍｉｎｇｈａｎ诊断标准 ,心功能按ＮＹＨＡ分级 ,左室射…     

高龄老年急性心肌梗死患者102例临床分析

目的 探讨老年急性心肌梗死（AMI）的临床特点。方法回顾性分析2007年-2008年收住院治疗的102例高龄老年急性心肌梗死患者的临床资料。结果患者合并高血压病百分率最高（78．2％）,其次是脑血管病和糖尿病（65．7％和45．1％）。总胆固醇（TC）水平达标者占54．1％,低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）达标者占27％,仅有56．8％的患者应用抗血小板药,他汀类调脂药最少。AMI患者发病时,有81例表现为非ST段抬高型,21例表现为ST段抬高,所有的患者肌钙蛋白Ⅰ（WnⅠ）值均高于正常水平。结论高血压病是高龄老年冠心病患者最常见的高危因素,其预防措施达标率低,应该加强。     

外源性生理水平的雄激素对去势大鼠动脉壁eNOS和iNOS表达的影响

目的探讨补充生理水平的外源性雄激素对去势大鼠动脉壁内皮型NO合酶（eNOS）和诱导型NO合酶（iNOS）表达的影响。方法将大鼠随机分为去势组、外源性生理水平雄激素补充组和对照组。采用实时荧光定量PCR和Western blot,观察不同处理组胸主动脉壁一氧化氮合酶（NOS）亚型eNOS和iNOS mRNA和其蛋白表达的变化。结果与对照组相比,去势组大鼠eNOS的表达显著降低（P<0.05）,而外源性雄激素生理水平补充组大鼠eNOS的表达接近正常水平;两个处理组iNOS mRNA的水平与对照组比较均无统计学差异。结论补充外源性生理水平的雄激素对去势大鼠心血管系统的保护作用,可能是通过血管壁eNOS影响NO的合成与释放而介导的。     

心律平致心室纤颤抢救成功1例

患者,女,32岁,农民.病案号:2910334.因误服草乌、川乌药酒10 ml 2小时入院.患者诉服药酒后口周、四肢麻木、心悸、乏力.查体:BP14.6/10.6 kPa,神志清楚,双肺呼吸音清晰,心界不大,心率90 bpm,心律不齐,未闻及杂音,心电图及心电监护示窦性心律,频发多源室上性及室性早搏.心脏彩色多普勒检查,心脏结构、瓣膜、血流无异常.     

氯吡格雷抵抗与老年急性冠状动脉综合征患者心血管事件相关性研究

目的探讨氯吡格雷抵抗对高龄老年急性冠状动脉综合征患者长期心血管事件的影响。方法选择2009年1月-2010年12月入住解放军总医院心内科病房300例急性冠状动脉综合征患者为研究对象,年龄70～95岁,平均（81.3±6.4）岁。所有研究对象均接受氯吡格雷片75 mg,1次/d,至少服用1个月以上,采用以二磷酸腺苷作为底物的光比浊法检测患者服用氯吡格雷前和服用7 d后血小板聚集率的变化情况。按照血小板聚集率变化情况进行试验分组,血小板聚集率降低程度〈10%为氯吡格雷抵抗组,≥10%为氯吡格雷非抵抗组。随访主要心血管不良事件（包括心血管病死亡、非致死性心肌梗死、再发心绞痛、缺血性脑卒中/短暂性脑缺血发作、急性血栓形成及出血并发症）的发生情况,随访中位时间为2年。采用Cox风险回归模型评估氯吡咯雷抵抗与心血管事件的关系。结果氯吡格雷抵抗的发生率为24.0%。患有糖尿病、肾功能不全及体质量指数增高患者易于发生氯吡格雷抵抗,氯吡格雷抵抗患者心血管主要不良事件发生率明显增加（37.5%、22.8%,P=0.032）,Cox风险回归方程提示氯吡格雷抵抗是心血管事件发生的独立危险因素[HR=2.34,95%CI（1.07,4.57）,P=0.016]。结论老年急性冠状动脉综合征患者糖尿病、肾功能不全及体质量指数增高与氯吡格雷抵抗相关,氯吡格雷抵抗患者发生心血管不良事件的风险明显增加。