谷胱苷肽转移酶抑制剂高通量筛选模型的建立和初步应用

谷胱苷肽 - S-转移酶 -π( GST-π)的活性在某些类型的癌症患者中有显著的升高并且在癌症细胞对抗癌药物抗药性的形成过程中起着重要的作用。抑制过量表达的 GST-π酶的活性将有助于克服肿瘤细胞的耐药性 ,因此 ,GST-π被认为是一个潜在的药物作用的靶位点。为了筛选新的抗癌药物的增敏剂 ,我们建立了一个 GST-π酶抑制剂的高通量筛选模型 ,该模型以 CDNB和 GSH为底物 ,在 96 -孔板上通过对 340 nm处吸光度的变化来检测样品对 GST-π酶的抑制活性。经过初筛和复筛 ,从 4 80 0个微生物发酵提取物中筛选到10个阳性样品 ,阳性率为 0 .2 %。     

环孢菌素A菌渣无害化减量化技术研究

目的 采用嗜热微生物处理环孢菌素菌渣，实现环孢菌素生产过程中的菌渣减量排放。方法 将培养好的厌氧芽孢杆菌(Anoxybacillus mongoliensis SIIA-1501a)、土芽孢杆菌(Geobacillus sp. SIIA-1501g)和极端嗜热菌(Calditerricola yamamurae SIIA-1501c)依次分期加入环孢菌素菌渣堆肥培养，使菌渣减量化，并使菌渣中的环孢菌素残留降低。结果 环孢菌素菌渣经过厌氧芽孢杆菌堆肥处理5~8d，嗜热地芽孢杆菌堆肥处理4~7d和极端嗜热菌堆肥处理4~6d，环孢菌素菌渣减量80%以上，废渣中环孢菌素残留去除率近99%。结论 采用三联菌处理环孢菌素菌渣，实现了无害化和减量化，废渣中环孢菌素残留基本去除，具备较好的环境效益和社会效益。     

氯吡格雷联合氟伐他汀治疗脑梗死的临床疗效分析

目的研究氯吡格雷联合氟伐他汀治疗脑梗死的临床疗效。方法选择2013年2月至2015年2月洛阳市第六人民医院收治的88例脑梗死患者作为研究对象,将其随机分为对照组和观察组,每组44例。对照组患者采用常规治疗法,观察组患者在常规治疗法的基础上加用氯吡格雷和氟伐他汀,比较两组治疗效果。结果观察组患者总有效率为97.73%,显著高于对照组的81.82%;观察组患者各项血脂指标改善程度均优于对照组,且观察组患者神经功能损伤和生活能力评分均显著优于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论氯吡格雷与氟伐他汀联用能有效提高脑梗死的治疗效果,降低患者的血脂水平,减少患者神经功能损伤,提高其生活能力,安全性好,实用性高,值得临床推荐。     

住院艾滋病患者主要照顾者负性心理的质性研究

目的了解住院艾滋病亲属照顾者在看护期间内的主要压力源及负性心理体验。方法采用个人深度访谈法,收集8名照顾者的资料,用主题分析法进行分析,归纳住院艾滋病患者主要照顾者的压力源种类及其负性心理体验。结果照顾者压力源主要来源包括与艾滋病相关的压力源、与经济相关的压力源及与社会文化相关的压力源;照顾者的负性心理体验主要有怀疑、否认,恐惧、害怕,痛苦、矛盾,愤怒,迷茫无助及社交减少。结论住院艾滋病患者照顾者的压力源来源于多个方面,其负性心理体验复杂,研究者应重视主要照顾者的压力,为其提供有效的干预措施,加强支持系统。     

微生物来源的次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶抑制剂2264A和B的研究

利用自建的快速高效的次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶(Inosine monophosphate dehydrogenase,IMPDH)抑制剂的高通量筛选模型,筛选分离得到两个活性化合物2264 A和B,通过对其紫外、质谱、核磁等理化数据的分析确定2264 A为cyclopenol,2264 B为viridicatol。2264 A和B对IMPDH的IC50分别为69.68、11.86μmol/L;体外脾淋巴细胞增殖实验显示2264 A和B分别在322.6和65.8μmol/L浓度下可完全抑制由ConA活化的脾淋巴细胞增殖,表明2264 B在分子水平和细胞水平均表现出较好的免疫抑制活性,2264 A的活性相对较弱。     

微生物来源的乙酰胆碱酯酶抑制剂N98-1021A的研究

本研究分别以丁酰硫代胆碱和二硫二硝基苯甲酸为底物和显色剂 ,建立了一种准确、快速的高通量筛选微生物代谢产物来源的抑制剂的体外筛选模型。利用此方法从 2 14 1株放线菌中筛选到一株阳性菌株N98 10 2 1,该菌株的发酵液经有机溶剂提取、ODS柱层析及HPLC制备分离 ,得到一个活性化合物N98 10 2 1A ,该化合物对乙酰胆碱酯酶的IC50 为 2 0 μmol/L ,经酶抑制动力学分析 ,该化合物为乙酰胆碱酯酶的非竞争性可逆抑制剂。通过对该化合物的紫外、红外、质谱、核磁等理化分析 ,得知该化合物与terferol结构相同。但该化合物对乙酰胆碱脂酶的抑制活性至今未见报道。     

侧边开口被套的棉胎折叠法

目前多数临床医院采用了开口在侧边被套。而棉胎采用“S”型折叠法在装入被套时就显得费时、费力而且整体效果不佳。为了解决这一问题 ,教研组教师共同努力 ,采用了“H”型折叠法 ,并应用于 2 0 0 1级护理中专班学生操作练习 ,取得了较满意的效果。1　临床资料　　选取护理专业     

人单酰基甘油脂肪酶基因的克隆表达、纯化及活性研究

目的人单酰基甘油脂肪酶(human monoacylglycerol lipase,MAGL)是一类促进脂肪分解成甘油和脂肪酸的丝氨酸水解酶,是抗肿瘤药物研发的新靶点。为了建立高通量的MAGL抑制剂筛选模型,本研究对人MAGL进行了基因克隆、体外重组表达、纯化以及活性研究。方法通过RT-PCR方法从人脑总RNA中扩增人MAGL基因,并将该基因克隆入pET28a(+)表达载体。将重组蛋白在E.coli BL21(DE3)宿主菌中通过1mmol/L IPTG诱导表达。表达产物用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱进行分离纯化,通过SDS-PAGE进行分析。以7-hydroxycoumarinyl arachidonate(7-HAC)为荧光底物进行酶的活性测定。结果成功扩增出人MAGL基因,并构建了pET28a-MAGL表达载体。SDS-PAGE检测结果表明重组人MAGL蛋白在宿主菌中的表达量可达菌体总蛋白量的25%,经Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱分离纯化后的重组蛋白纯度大于90%,其比活力达到7900IU/mg,,较纯化前提高了23倍。酶活性分析结果证明重组表达并纯化的蛋白具有单酰基甘油脂肪酶活性,另外,利用已知的MAGL抑制剂N-arachidonylmaleimide(NAM)对该酶表现出强的抑制活性,IC50值为0.53μmol/L。结论本研究成功利用大肠埃希菌原核表达体系重组表达并纯化了人单酰基甘油脂肪酶,为建立以MAGL为靶点的抗肿瘤药物筛选模型奠定了基础。     

在体育活动中激发幼儿的参与兴趣

幼儿参与体育活动的实质就是完成各种身体练习的过程。而在日常体育活动中常有一部分幼儿出现不乐意参加活动,拒绝参加竞赛性体育游戏等对体育活动兴趣缺失的表现,如果不及时鼓励幼儿积极参加活动,不仅直接影响幼儿的身体正常发育和机能、体能的协调发展,减弱对外界环境的适应力和对疾病的抵抗力,同时也直接影Ⅱ向幼儿良好个性和道德品质的形成。     

单侧入路退针法注射椎体成形术治疗骨质疏松性椎体骨折

目的 探讨单侧经椎弓根穿刺退针法注射椎体成形术治疗骨质疏松性椎体骨折的临床应用效果.方法 2002年12月至2010年8月,我院采用单侧经椎弓根穿刺退针法注射椎体成形术198例.术前先行CT定位,确定进针层面、最佳内倾斜、下倾斜角度、穿刺点距离棘突的体表距离、穿刺路径以及穿刺点.术中按照手术前CT测定的进针点和路径,C型臂透视下监测确定入针点,经单侧椎弓根穿刺,采用退针法注射骨水泥.观察术前及术后疼痛有效率,手术中穿刺到位率、骨水泥分布优良率、手术时间、并发症等情况.结果 全部病例随访0.5～7.0年,椎体穿刺到位率97.4%(193/198),手术时间每个节段平均(17±6)min,术中注射骨水泥量平均为(4.0±0.5)ml,骨水泥分布优良率为95.6%(190/198),疼痛缓解有效率94.6%(187/198).平均住院费用3780元.1节椎体发生骨水泥椎间盘外漏,2节椎旁静脉丛外漏,5节椎体周围软组织外漏,上述病例均未出现临床症状.结论 应用单侧入路经椎弓根穿刺退针法注射椎体成形术治疗骨质疏松性椎体骨折穿刺创伤小、穿刺到位率高、骨水泥分布满意、痛疼缓解率高,值得在临床上推广应用.