多药耐药K562/A02和敏感K562细胞来源的树突状细胞介导抗白血病效应对比研究

本研究探讨多药耐药(MDR)白血病K562/A02细胞和敏感K562细胞诱导树突状细胞(DC)分化及介导的抗白血病效应。采用慢性粒细胞白血病(CML)P170糖蛋白(Pgp)高表达的MDRK562/A02细胞、敏感K562细胞在含细胞因子GMCSF(1000U/ml)、IL4(500U/ml)和TNFα(100ng/ml)的RPMI1640完全培养液中诱导分化成DC,以光镜观察细胞形态、流式细胞术检测细胞表型,异基因混合淋巴细胞反应(alloMLR)检测T细胞增殖活性,MTT法测定细胞毒作用。结果表明:培养14天的K562/A02细胞和K562细胞均出现典型的DC形态特征,表达DC的相关分化抗原及共刺激分子CD1a、CD83、HLADR、CD80、CD86。alloMLR检测中,K562/A02DC较K562DC具有更强的刺激异基因T细胞增殖能力(P<0.05)。两种DC激活的CTL分别对K562/A02和K562细胞较HL60细胞具有显著的杀伤活性(P<0.01);更重要的是,K562/A02DC较K562DC激活的CTL对Pgp高表达的MDRK562/A02细胞、HL60/VCR细胞具有更强的细胞毒作用,杀伤活性分别为(40.7±1.3)%、(28.4±0.9)%(P<0.01)和(24.9±1.1)%、(8.2±0.7)%(P<0.01)。结论:Pgp高表达的MDR白血病细胞K562/A02和敏感K562细胞都可在GMCSF、IL4和TNFα作用下诱导分化为成熟DC,均可活化CTL产生特异的抗白血病效应;尤其K562/A02细胞来源的DC可介导针对Pgp高表达的多药耐药白血病的特异细胞毒作用。     

Flt3配体诱导急性淋巴细胞白血病来源树突细胞及其功能的研究

树突细胞 (DC)是迄今为止已知功能最强的抗原呈递细胞 (APC) ,白血病细胞来源的DC因能表达与异常染色体相关的白血病抗原 ,产生特异性的抗白血病细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)效应而成为新型的DC来源[1] 。fms样酪氨酸激酶3配体 (Flt3 L)具有强大的刺激多能造血干细胞增殖的能力 ,是又一新兴的解决骨髓造血功能衰竭状态和肿瘤生物治疗的生长因子[2 ] 。我们收集急性淋巴细胞白血病 (ALL)初治及复发患者骨髓单个核细胞 (MNC) ,采用Flt3 L单因子培养 ,并分别加用TNF α和IFN α活化 ,通过流式细胞仪分析其表型特点 ,并行染色体检查DC…     

干扰素α治疗慢性粒细胞白血病患者浆细胞样树突细胞变化的观察

干扰素α(IFN-α)作为第一个被广泛研究的人类细胞因子[1],不仅对病毒感染性疾病确有疗效,而且对于多种恶性肿瘤也有一定疗效.IFN-α治疗慢性粒细胞白血病(CML)虽缓解率低.但对部分患者可达治愈的效果[2],这是除异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗以外,包括伊马替尼在内的其他一切治疗都无法达到的.     

干扰素α治疗慢性粒细胞白血病患者浆细胞样树突细胞变化的观察

干扰素α(IFN-α)作为第一个被广泛研究的人类细胞因子[1],不仅对病毒感染性疾病确有疗效,而且对于多种恶性肿瘤也有一定疗效.IFN-α治疗慢性粒细胞白血病(CML)虽缓解率低.但对部分患者可达治愈的效果[2],这是除异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗以外,包括伊马替尼在内的其他一切治疗都无法达到的.     

Flt3-L是否为体外制备急性髓系白血病患者DC瘤苗的更佳选择?

目的:通过对体外使用Flt3-L(FL)及粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导完全缓解期急性髓系白血病(AML-CR)患者的骨髓中单个核细胞(BMNC)分化为树突状细胞(DC)、分泌白介素(IL-12P70),干扰素-α(INF-α)的情况,及所诱导DC体外刺激自体T细胞(auto-T cells)活化增殖能力的观察,进一步了解FL在DC瘤苗制备中的作用特点。方法:分离AML-CR患者BMNC采用FL／GM-CSF单因子培养于RPMI1640完全培养基中至第8天,加入LPS刺激活化后流式细胞仪明确DC免疫表型,ELISA法测定培养液上清中IL-12P70、INF-α,收集阳性细胞体外激发增埴auto-T细胞,MTT法测试T细胞增殖情况。结果:10例AML患者的BMNC经FL／GM-CSF分别培养至第72 h均开始有细胞成簇生长,流式细胞检测显示CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR均表达明显上调,ELISA测定FL组IL-12P70,INF-α分泌量较GM-CSF组有显著增加。2组均可产生较强的T细胞增殖效应,与GM-CSF比,FL组对CD4 T细胞的增殖作用更强。结论:在体外,FL可更强诱导AML-CR患者BMNC产生DC,同时分泌大量IL-12P70及INF-α。故与GM-CSF相比,FL可能具有更佳的抗肿瘤免疫作用。     

负载抗原的DC与CIK共培养对耐药乳腺癌细胞的杀伤作用

目的:观察负载抗原的树突状细胞(dendritic cell,DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对高表达P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的多药耐药(multidrug resistance,MDR)人乳腺癌MCF-7/ADR细胞的杀伤作用。方法:提取健康人外周血单个核细胞,常规诱导出CIK及DC;制备MCF-7/ADR细胞冻融抗原后冲击DC,并与CIK共培养作为实验组(冻融物DC-CIK组),未负载抗原的DC与CIK共培养作为对照组(DC-CIK组),同时设单独培养的CIK组或DC组作为空白对照组。流式细胞术分析细胞的表型及P-gp表达,ELISA法测定细胞上清中IL-12、IFN-γ水平,MTT法检测对MCF-7/ADR及MCF-7细胞株的杀伤活性。结果:冻融物DC-CIK组、DC-CIK组细胞增殖活性均大于CIK组(P<0.05)。冻融物DC-CIK组对MCF-7/ADR、MCF-7细胞的杀伤活性在效靶比10∶1、20∶1、40∶1时分别为(44.29±1.39)%、(58.24±3.52)%、(68.9±2.83)%和(33.51±2.18)、(40.43±2.3)%、(44.62±1.19)%,均高于DC-CIK组及CIK组(P<0.05);冻融物DC-CIK组对MCF-7/ADR耐药细胞株的杀伤活性高于非耐药细胞株MCF7(P<0.05);而对于非耐药株MCF-7细胞的杀伤活性,冻融物DC-CIK组和DC-CIK组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DC与CIK共培养细胞增殖活性和细胞毒活性均强于CIK,经冻融抗原冲击的DC与CIK共培养可以显著提高对MCF-7/ADR耐药细胞株的杀伤活性。     

香菇多糖促进急性髓细胞性白血病患者DC的成熟并增强其功能

目的： 研究香菇多糖（lentinan, LNT）对急性髓细胞性白血病（acute myeloid leukemia, AML）患者树突状细胞（dendritic cell,DC）成熟及功能的影响,探索白血病免疫治疗的新途径。 方法： 分离AML完全缓解期患者（AML-complete remission,AML-CR）的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cell,BMC）,用GM-CSF和IL-4诱导7 d培养DC,然后分组：LPS阳性对照组、LNT实验组和对照组。培养48 h后以瑞氏－吉姆萨(Wright-Giemsa)染色观察各组DC形态,流式细胞术检测各组DC表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a和HLA-DR的表达,ELISA法检测各组DC上清液中IL-12的水平。免疫磁珠法分离AML-CR患者经LNT治疗后的外周血DC,ELISA法检测治疗后DC上清液中IL-12的水平。 结果： 体外实验中,LNT处理后DC呈典型树突状形态;其表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a及HLA-DR的表达上调（P<0.05）;DC分泌IL-12较阴性对照组显著增高（P<0.05）,且呈LNT浓度依赖性。患者体内试验结果显示,LNT治疗后AML患者的DC上清液中IL-12分泌水平较治疗前显著提高（P<0.05）。 结论： LNT在体内外均能促进AML患者的DC成熟和增强DC功能。     

JAK2 V617F阳性原发性骨髓纤维化转急性淋巴细胞白血病患者的临床特点

目的 报道1例罕见的JAK2 V617F基因突变阳性原发性骨髓纤维化(PMF)患者转白血病前后的临床及实验室特征.方法 发现1例PMF转T系急性淋巴细胞白血病(T-ALL)的患者,PCR方法检测患者转白血病前后的JAK2基因突变并进行定量检测,采集患者临床各指标.结果 患者转白血病前后均为JAK2 V617F基因突变阳性,突变率分别为71.21%、83.56%.患者从诊断为PMF到转白血病的时间为22个月,转白血病到死亡的时间为27 d.结论 JAK2V617F基因突变阳性的PMF转为T-ALL为罕见病例,临床预后差,生存时间短.