非小细胞肺癌患者ALK,EGFR及KRAS基因的检测及临床病理特征

目的:研究汉族非小细胞肺癌患者中间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及Kirsten鼠肉瘤基因(Kirstenrat sarcoma,KRAS)突变的阳性率及其与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)的方法检测ALK融合基因异常表达,采用PCR检测EGFR基因和KRAS基因突变,采用x2检验及Fisher精确概率法进行数据分析.结果:共2 267例进行了ALK融合基因检测,其中1 655例同时进行了EGFR突变检测,951例同时进行了KRAS检测.ALK融合基因、EGFR基因及KRAS基因突变阳性率分别为7.28％(165/2 267)、48.58％(804/1 655)、11.40％(108/947).ALK基因突变多见于年轻、腺癌患者;EGFR基因突变多见于女性、腺癌患者;KRAS基因突变多见于老年、男性、腺癌患者.1 655例同时进行了ALK与EGFR检测的病例中,共6例存在双基因突变(0.36％);947例同时进行了ALK与KRAS检测,共4例存在双基因突变(0.42％);943例同时进行了EGFR与KRAS突变检测,未发现双突变病例.结论:非小细胞肺癌患者ALK,EGFR和KRAS基因的突变与患者的年龄、性别、组织学类型均存在相应的联系,个别病例可以出现ALK融合基因与EGFR或KRAS突变共存.     

HSP90抑制剂Ganetespib增强肺癌细胞对顺铂的敏感性

目的:研究HSP90抑制剂ganetespib对DNA修复相关蛋白表达的下调作用及其对顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,DDP)的增敏作用.方法:采用Western印迹法检测ganetespib对肺癌细胞A549和H1975的DNA修复蛋白BRCA1及RAD51表达的下调作用;免疫荧光法检测细胞RAD51及核磷酸化的H2AX组蛋白(γ-H2AX)核焦点形成;流式细胞技术检测细胞凋亡;CKK-8试剂盒检测细胞的增殖,中效原理分析判断两种药物联合应用的协同作用;并通过SCID皮下移植瘤模型检测ganetespib与DDP联合应用的体内抑瘤作用.结果:Ganetespid明显下调DNA修复蛋白BRCA1和RAD51的表达,ganetespid及DDP处理诱导DNA重组修复标记RAD51核焦点的形成率为13%,明显少于单一DDP处理组(59%).Ganetespid和DDP联合应用的细胞凋亡率为23%,明显高于单一ganetespid组(15%)或单一DDP组(16%),差异有统计学意义(P<0.01).SCID小鼠移植瘤模型中ganetespid与DDP联合应用对肿瘤生长抑制作用明显优于单一ganetespib或单一DDP处理组,差异有统计学意义(P<0.01).结论:ganetespib可下调肺癌细胞DNA修复蛋白的表达并增加对DDP的敏感性.     

肺泡灌洗液中肺部真菌的鉴定及诊断价值评估

目的探讨病理学特殊染色对支气管肺泡灌洗液中肺部真菌的检测与鉴定的能力,并进行真菌分类。方法收集广州医科大学附属第一医院2018年住院及门诊支气管肺泡灌洗液患者312例。采用病理学特殊染色的方法对312例肺泡灌洗液进行病原学检测及鉴定,同时对照血清学半乳甘露聚糖抗原和真菌1-3-β-D-葡聚糖定量检测结果及组织病理活检结果。结果病理学特殊染色检测肺泡灌洗液可以鉴定多种真菌、革兰氏阳性菌、抗酸菌及病毒等病原体,与真菌G实验及GM实验相比,其检测真菌的效率更高(P<0.001),并且可以鉴定病原体种类,尤其是真菌种类;对于不易进行组织病理活检的患者,尤其是接受移植患者或者重症肺炎的患者,肺泡灌洗液检测真菌的阳性率更高,并与已有肺活检结果较一致。结论肺泡灌洗液真菌检测可以作为检测肺部病原菌的方法,进行真菌检测及鉴定。     

30例不同类型胸部受累Castleman病临床分析

目的总结不同类型胸部受累Castleman病(CD)的临床、影像学、病理及诊治特征,以提高临床医师对CD的认识。方法回顾性分析广州医科大学附属第一医院自2009年6月至2019年5月收治入院的胸部受累CD患者30例,将其分为闭塞性细支气管炎(BO)组、不伴BO的单中心型Castleman病(UCD)组及不伴BO的多中心型Castleman病(MCD)组,分析其临床资料并总结其特征。结果30例患者中,5例(16.7%)纳入BO组,18例(60.0%)纳入不伴BO的UCD组,7例(23.3%)纳入不伴BO的MCD组。不伴BO的MCD组中位年龄明显大于BO组[(49.29±5.39)岁对(27.20±3.76)岁,P=0.005]和不伴BO的UCD组[(49.29±5.39)岁对(37.17±2.87)岁,P=0.034]。胸部症状在BO组(100%)和不伴BO的MCD组(71.4%)多见,而不伴BO的UCD组无胸部症状。贫血及IgG增高仅在不伴BO的MCD组出现(发生率均为57.1%),红细胞沉降率增快及低氧血症在BO组(发生率分别为40.0%和60.0%)及不伴BO的MCD组(发生率分别为57.1%和28.6%)均可出现。BO组患者的肺功能均表现为极重度混合性通气功能障碍。胸部CT所示肺实质受累率:BO组为100%;不伴BO的MCD组为57.1%,表现为双肺弥漫性病变;不伴BO的UCD组为11.1%,表现为孤立性肺结节。不伴BO的MCD组的淋巴结短径明显小于BO组[(1.83±0.51)cm对(4.73±1.63)cm,P=0.006]和不伴BO的UCD组[(1.83±0.51)cm对(3.62±0.26)cm,P=0.011]。BO组病理类型均为透明血管型(100%),不伴BO的UCD组88.9%为透明血管型,而不伴BO的MCD组以浆细胞型为主(57.1%)。BO组患者均出现口腔溃疡,在肿物切除术后予免疫调节剂治疗,溃疡症状缓解,但肺部症状仍进行性加重。不伴BO的UCD组主要治疗方式为胸腔镜下肿物切除,不伴BO的MCD组主要治疗方式为化疗、免疫调节剂、靶向治疗等。结论三组患者的年龄、临床症状、实验室检查、肺功能、影像学表现、病理类型、治疗及预后均有所不同,此分类能促进临床医师对本病的认识。     

173例经支气管镜冷冻肺活检在弥漫性肺疾病中的病理诊断分析

目的 探讨经支气管镜冷冻肺活检技术(TBCB)对肺部弥漫性疾病(DLD)病理诊断的价值.方法 收集广州医科大学附属第一医院2017年1月-2019年6月173例病因诊断不明需行TBCB检查的住院患者的临床病理资料,进行回顾性分析及总结,其中54例同时行TBCB和常规经支气管镜肺活检(TBLB),比较两者活检方法标本大小及病理诊断效率.结果 173例TBCB标本中,结合患者年龄、性别、职业、既往史、接触史、吸烟史、实验室血清学及影像学结果,最终病理组织学检查明确分型者有148例(85.5%),病理明确分型或有提示诊断者160例(92.5%),其中已知病因为72例(45.0%);特发性间质性肺炎27例(16.9%);7例肉芽肿性病变(4.4%);其他类型54例(33.8%).173例中54例同时行TBCB和TBLB,TBCB组和TBLB组标本的大小分别为(3.3±1.3)和(1.0±0.3) mm2(t'=12.67,P<0.01).TBCB组和TBLB组明确病理分型诊断效率分别为81.5%(44/54)和42.6%(23/54),差异有统计学意义(X2=17.33,P<0.01).其中TBCB组与TBLB组对间质性肺疾病明确分型的病理诊断效率分别为48.2% (26/54)和5.6%(3/54),差异有统计学意义(X2=24.94,P<0.01).而TBCB组与TBLB组诊断除间质性肺疾病以外的其他弥漫性肺疾病的病理诊断效率分别为33.33%(18/54)和37.04%(20/54),差异无统计学意义(x2=0.1624,P=0.687).结论 与TBLB相比较,TBCB所获得的标本大小及在确诊弥漫性肺疾病特别是间质性肺疾病分型上具有明显优势和应用价值.     

CXCR4启动子的条件复制型腺病毒对肺癌细胞的靶向杀伤作用

目的:构建CXCR4启动子的条件复制型腺病毒载体CRAd-CXCR4-GFP,探究CRAd-CXCR4-GFP对肺癌细胞的靶向杀伤效应。方法:PCR法扩增人CXCR4-E1A基因并克隆至穿梭质粒p DC316-GFP,将骨架质粒p BHG-lox-E1,3Cre和重组质粒p DC316-CXCR4-GFP共转染293细胞,产生重组腺病毒CRAd-CXCR4-GFP并扩增,扩增后进行PCR鉴定和腺病毒滴度测定;real-time PCR检测5种肺癌细胞株CXCR4的mRNA表达,筛选出表达最高的A549细胞;将CRAd-CXCR4-GFP和Ad-NULL分别转染A549细胞,检测两者转染后CXCR4启动子活性和腺病毒复制数;将CRAd-CXCR4-GFP和Ad-NULL分别转染A549细胞和16HBE细胞,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,CCK-8检测各组细胞活性。结果:成功构建重组质粒p DC316-CXCR4-GFP,与骨架质粒p BHG-lox-E1,3Cre共转染293细胞后第11天可见片状绿色荧光;PCR表明目的基因CXCR4-E1A已成功整合在重组腺病毒基因组中;测定重组腺病毒滴度为1×1013PFU/L;CRAd-CXCR4-GFP转染A549细胞后E1A的mRNA和E4表达较Ad-NULL组明显上升;与Ad-NULL组和空白对照组相比,CRAd-CXCR4-GFP组前4 d A549细胞凋亡率和活性无明显差异,第5天细胞凋亡率明显增加,细胞活性明显降低,各组间5 d内16HBE细胞的细胞凋亡率和细胞活性均无明显变化。结论:成功构建条件复制型腺病毒表达载体CRAd-CXCR4-GFP,该载体对肺癌细胞具有靶向杀伤作用。