浙江汉族和畬族Colton血型系统的基因频率调查

Colton血型系统 (CO ,ISBT 0 15 )共有 3个抗原 :Coa、Cob、Coab[1,2 ] ,其血型抗体可引起新生儿溶血病 (HDN)和迟发型溶血性输血反应。国内有关Colton抗原检测较少 ,尚未见有关基因分型的报道。参照有关文献[3 ] ,本中心建立了Colton血型系统的PCR SSP基因型分型方法 ,并检测了浙江汉族和浙江族人群相关的基因频率 ,现报道如下。1　材料与方法1 1　样本来源　随机选取本省 10 3名汉族和 6 2名族无血缘关系的健康献血者 ,抽其全血 ,采用EDTA Na2 抗凝备用。1 2　仪器与试剂　美国PE公司 96 0 0型DNA扩增仪 ;美国BIORAD公…     

α1,3半乳糖基转移酶新等位基因278C＞T的鉴定

目的研究中国汉族人群ABO血型系统中Bw变异型的分子遗传背景，发现并鉴定一个新的ABO等位基因。方法血型血清学方法鉴定1例ABO血型疑难样本，应用聚合酶链反应、逆转录-聚合酶链反应和DNA序列分析等方法对先证者ABO基因转录调控序列和全编码序列进行突变筛选和检测。结果血清学和家系调查鉴定该样本为Bw表型，对gDNA和cDNA研究发现该样本存在第6外显子278C／T杂合，单倍体分析发现一种新的Bw等位基因，该等位基因与B101相比，差异仅在第6外显子的278C〉T错义突变，导致多肽链P93L替换，该突变点位于以前报道的Bw等位基因功能域之外。结论在中国人群中发现一种新的导致Bw变异型的ABO等位基因。     

IL-6和IL-11对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞的影响

目的： 探讨白细胞介素－6(IL-6)和白细胞介素－11(IL-11)对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞及其产生血小板的影响。方法: 采用免疫磁珠法(MACS)分选8例健康产妇足月顺产的胎儿脐血中CD34+细胞，以含血小板生成素（TPO 50 μg/L）、白细胞介素-3（IL-3 10 μg/L）、干细胞因子（SCF 50 μg/L）的无血清培养基作为对照组，分别添加10 μg/L IL-6、IL-11、IL-6+IL-11作为实验组，培养14 d后观察结果。利用细胞计数仪检测单个核细胞数；流式细胞仪计数培养体系中的CD41+细胞和血小板；用倒置显微镜观察培养体系中的细胞生长情况；用显微镜和流式细胞仪观察凝血酶诱导后的血小板凝集情况。结果: 各实验组单个核细胞数与对照组无明显区别（P>0.05），而CD41+细胞和血小板数量明显多于对照组(P<0.05)。培养第14 d后倒置显微镜下可见实验组中血小板样颗粒物明显多于对照组，而且经凝血酶诱导后有明显血小板凝集。结论: IL-6和IL-11可诱导脐血中CD34+细胞分化为巨核细胞并产生功能性血小板。     

基于Ion Torrent S5平台的二代测序技术对HLA-DRB1基因分型模棱两可进行分析

目的基于Ion Torrent S5平台NGS法进行HLA-DRB1基因分型检测的模棱两可结果的种类、比例进行分析。方法对471例脐带血造血干细胞库标本采用基于Ion Torrent S5平台的二代测序法检测HLA-DRB1位点,并同步对其中的94例标本采用PCR-SBT测定HLA-DRB1位点,余下377例标本采用PCR-SSO流式磁珠法检测。使用分型软件指定NGS法的HLA-DRB1分型结果,以HLA-DRB1*后第三区的数字作为高分辨水平统计,直接计算法分析模棱两可组合比例。结果标本中470例HLA-DRB1基因NGS检测结果与PCR-SBT法或PCR-SSO法相符合;其中1例标本NGS法漏检一个等位基因,符合率为99.8%。NGS法检测结果中,471例标本中有160例标本HLA-DRB1等位基因型出现模棱两可,比例为33.97%(160/471)。最常见的模棱两可结果组合为DRB1*09∶01∶02/09∶21。结论基于Ion Torrent S5平台的NGS技术可降低HLA-DRB1基因分型的模棱两可结果比例,但仍有一定比例的模棱两可组合结果,同时应注意NGS法检测漏检等位基因的风险。     

血红蛋白试纸条在无偿献血者血红蛋白初筛中的应用

无偿献血者献血前必须检测血红蛋白,目前在采供血机构检测血红蛋白的方法主要有CuSO4比重法和血细胞计数仪法。采供血机构现在大多采用CuSO4比重法筛选献血者,该方法虽然操作简单,但存在的一定的误差[1~3]。血球计数仪虽然测定结果准确,但携带不方便,不适合于流动献血车的工作模式,往往应用于单采成分献血者的筛选。笔者采用血红蛋白试纸条对献血者进行了血红蛋白分析,为献血者血液筛选提供了一种可选择的方法,现将结果报告如下。对象与方法1对象165份血标本均来自我中心无偿献血者。其中120份样本采用血红蛋白试纸条和血球计数仪同时测…     

汉族Rh血型DⅥ表型Ⅲ型的分子结构研究

Rh血型系统的部分D表型（或不完全D表型，panial D phenotype）可以分成D^Ⅱ（D category Ⅱ，D^Ⅱ）-D^Ⅶ（D category Ⅶ，D^Ⅶ）6个表型（D^Ⅰ已经被废除），其中D^Ⅵ（D category Ⅵ，D^Ⅵ）表型临床意义显著。D^Ⅵ表型女性妊娠RhD阳性胎儿可导致严重的新生儿溶血病，如果D^Ⅵ表型患者被误检为RhD阳性而接受RhD阳性血液，产生抗RhD的风险也很高。     

胎母出血评估指南

英国血液学标准委员会(BCSH)1999年首次发布了胎母出血(FMH)评估指南,本文对其进行了修订和扩展.2006年BCSH发布了抗D免疫球蛋白预防使用指南,继续建议做FMH检测.室间质量评价(EQA)活动表明,酸洗脱实验和流式细胞计数技术检测FMH的准确性得到了提高,但仍有错误发生,因此开展这些试验的实验室应有完善的质量保证系统.酸洗脱试验检测母亲血循环中的胎儿细胞,可能不能用于预防新生儿溶血病(HDN).指南中指出这些试验在什么情形下可能有效或无效.同样流式细胞计数试验检测少量D阳性细胞需要排除妊娠的背景,胎儿D阳性细胞会计数在内.     

一例Bw亚型的糖基转移酶等位基因鉴定及蛋白结构分析

目的对1例Bw亚型个体进行分子遗传学及蛋白结构分析。方法采用血清学技术进行红细胞表面抗原和血清中抗体的测定,并用PCR-基于序列的分型(PCR-sequence-based typing,PCR-SBT)方法进行ABO基因的全编码区序列和第1内含子区红系特异性调控元件的分析。进一步对存在突变位点的第5~7外显子扩增片段进行T-A克隆分离单倍体和序列验证分析。应用Pymol软件对突变蛋白进行3D结构的模拟,分析氨基酸残基的变化对蛋白结构稳定性的影响。结果该样本血清学表现为B抗原减弱,血清中含有抗-B抗体。ABO基因全编码区测序初步确定其基因型为ABO*B.01/ABO*O.01.01伴有c.734C/T的杂合突变。第1内含子红系特异性调控元件区碱基序列无异常。通过单倍体克隆分离,确定突变位点c.734T位于ABO*B.01等位基因链,另一个等位基因为ABO*O.01.01。该突变将B糖基转移酶活性中心245位Thr置换为Ile。蛋白3D结构的模拟分析发现氨基酸置换后,与之结合的残基未发生改变而连接的氢键距离发生变化,同时增加了与远距离水分子之间的连接。结论B糖基转移酶基因c.734C>T突变导致酶活性中心氨基酸置换,影响了突变B糖基转移酶蛋白稳定性,引起酶活性减弱,从而产生了Bw变异型。     

2015-2019 年杭州地区献血人群HBsAg流行状况

目的了解近年来杭州地区献血人群HBsAg流行及分布状况,以便进一-步改进和完善HBV感染的预防策路。方法遵循献血者知情同意,采用ELISA法分别使用两种不同厂家的试剂检测献血后标本的HBsAg。回顾性分析2015年1月至2019年12月杭州地区无偿献血人群HBsAg阳性率,对年龄性别.献血次数等不同分布组的HBsAg阳性情况进行比较。结果共检测无偿献血者741 441人,HBsAg阳性率为0.231%。2015-2019 年HBsAg阳性率分别为0.321% .0.241% .0.251% .0.179% .0.172% ,差异有统计学意义(P<0.001)。将无偿献血人群分为18-2425-34.35-44.45--5455-60岁年龄组,各年龄组随着年龄增加献血人群比例下降,HBsAg阳性率存在差异,其中45-54岁年龄组阳性率最高(0.512%) ,差异有统计学意义(P<0.001)。男、女献血者HBsAg阳性率分别为0.271%和0.168% ;初次献血者阳性率为0.336% ,两次献血的人群阳性率为0.017%,两者差异均有统计学意义(P<0.001)。结论杭州地区无偿献血人群HBsAg阳性率低,不同年龄.性别和献血次数人群的阳性率存在差异,提高重复献血者率有利于提升血液安全。     

浙江义乌人群RhDEL表型相关的RHD 1227A等位基因检测

Rh血型系统涉及新生儿溶血病、溶血性输血反应和自身免疫性溶血性贫血等疾病,具有重要临床意义.该系统目前共发现48个抗原,其中D抗原具有最强的免疫原性,所以D抗原成为目前临床输血前的必检抗原.与白种人不同的是,Rh(D)抗原在中国人群中占绝对多数,尤其是汉族人群,仅有0.2%-0.5%的个体为Rh(D)抗原阴性[1-2].