成年大鼠纹状体海人藻酸损伤后nestin的表达

目的　 研究成年大鼠纹状体海人藻酸 (kainicacid,KA)损伤后不同时间点nestin的表达并探讨其机制。方法　向成年SD大鼠纹状体内立体定位注射 0 .5 μlKA(1mg/ml) ,分别于手术后第 1、3、7、14天用免疫组织化学法检测纹状体内nestin表达的变化。结果　 正常纹状体内可观察到微弱的淡染nestin样免疫活性阳性细胞 ;大鼠纹状体KA损伤后 1d ,nestin样免疫活性增强 ;第 3天nestin样免疫活性达峰值 ,nestin样免疫活性阳性细胞的胞体肥大 ,突起粗大 ,分支增加 ;此后nestin样免疫活性阳性细胞染色强度减弱 ,其胞体和突起逐渐变小变细。 结论　 成年大鼠纹状体内注射海人藻酸可诱导nestin的大量表达 ,该表达可能与脑损伤后的自身修复相关。     

MK-801对海马脑片培养缺氧缺糖损伤中bcl-2、bax蛋白质表达的影响

目的 :观察NMDA受体拮抗剂MK -80 1对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响。方法 :将体外培养 2周的海马脑片随机分为正常对照组 (HOTC)、单纯缺氧缺糖组 (OGD)和预加MK -80 1后再缺氧缺糖组 (MK -80 1+OGD) ,作HE染色 ,Bcl -2、Bax免疫组化反应染色。结果 :HOTC组、OGD组和MK -80 1+OGD海马脑片CA1区均有不同程度Bcl -2、Bax蛋白表达和细胞缺失形成的空洞。HOTC组MK -80 1+OGD组Bcl-2蛋白的表达均强于OGD组 (2组均P <0 .0 5 ) ;Bax蛋白的表达均弱于OGD组 (2组均P <0 .0 5 ) ,同时细胞缺失形成的空洞有所减少。结论 :MK -80 1可以引起缺氧缺糖性海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达变化并减轻其锥体细胞损伤程度     

海马脑片缺氧缺糖模型的制备方法

离体神经组织培养尤其是海马脑片培养，可以弥补在体动物实验方面的一些局限性，是现代神经科学工作者常用的研究方法之一。实验证实，离体海马脑片缺氧缺糖培养模拟“脑缺血”，可以重现在体动物实验时海马各区对缺血敏感性不同的特点，所以许多学者利用海马脑片缺氧缺糖培养模型来研究缺血性脑损伤的细胞和分子机制。目前海马脑片缺氧缺糖模型的制备有多种．但各方法间存在着差异，本文对目前运用较多的浸没法、充N2法和三气缺氧培养箱法进行了比较，并将其中两种方法予以结合。以期为海马脑片缺氧缺糖模型的应用提供参考。     

前脑缺血再灌流后大鼠海马 NMDA受体亚单位NR1蛋白的表达变化

目的　观察大鼠前脑缺血再灌流后海马各区域NMDA受体亚单位NR1表达的变化和差异 ,探讨NR1在缺血性脑损伤中的作用。　方法　免疫组织化学和图像处理技术。　结果　 1 在前脑缺血再灌流后早期 ,海马各区域NR1的表达水平显著下降 (P <0 0 5 )。CA1区 ,下降趋势持续存在且不可逆 ,直至再灌流后第 7d ,NR1在该区域的染色强度降至对照组的 17% (P <0 0 5 )。CA3区及齿状回 ,NR1的表达下降是可逆的 ,再灌流后 72h ,齿状回的表达恢复正常 ,再灌后第 7d ,CA3区的表达也恢复到对照组的 96 % ,两组间染色强度无显著差异。 2 在迟发性神经元坏死出现前的缺血再灌流的早期 ,NR1在CA1区、CA3区及齿状回表达下降的幅度不一致 ,再灌后 6h以前 ,CA1区的下降幅度明显小于CA3区及齿状回 (P <0 0 5 ) ,再灌后 12h ,CA1区的下降幅度仍低于CA3区 (P <0 0 5 )。结论　短暂性前脑缺血后 ,NR1在海马CA1区、CA3区及齿状回表达下降的幅度和可逆性存在显著差异 ,这种差异可能是造成CA1区缺血敏感性的重要原因。     

NR2B反义寡核苷酸对脑缺血海马CA1区NR2BmRNA表达的影响

为研究NMDA受体2B亚单位(NR2B)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide to NR2B,ANR2B)对短暂性脑缺血后海马CA1区NR2B mRNA表达的影响,分别向成年SD大鼠海马CA1区内立体定位注射ANR2B、NR2B正义寡核苷酸(SNR2B)、无菌生理盐水(NS),或者插针不注射(NSNO),24h后行四动脉阻断前脑缺血手术(缺血15min、再灌注24h),经心冲灌固定取脑,连续冰冻切片,原位杂交组织化学方法染色,光镜下观察各组每侧鼠脑NR2B mRNA的表达变化,并用LEICAQWin进行图像分析。结果显示,单纯缺血组海马各区的NR2B mRNA显色强度明显增加;缺血再灌组、假手术组和正常组海马CA1区内ANR2B注射点及其周围的NR2B mRNA显色明显下降;而在注射SNR2B、NS或NSNO的各组海马切片上,NR2B mRNA显色均无明显变化。结果表明ANR2B可以特异性地在体局部防止缺血后NR2B mRNA的高水平表达。     

NR2B反义寡核苷酸对大鼠海马CA1区NR2B蛋白质表达的影响

目的 观察NMDA受体2B亚单位（NR2B）反义寡核苷酸（ANR2B）对海马CA1区NR2B蛋白质表达的影响，筛选有效的反义寡核苷酸，为探讨针对NR2B的新药物提供形态学基础。方法 设计、筛选、合成ANR2B。正常SD大鼠，海马CA1区立体定位注射ANR2B，灌注取脑，连续冰冻切片，ABC免疫组织化学方法染色，光镜下观察NR2B蛋白质的表达变化。结果 注射ANR2B后，注射区及其周围NR2B免疫组织化学染色强度明显下降。仅有少量锥体细胞和颗粒细胞散在分布；而在注射NR2B正义寡核苷酸（SNR2B）、生理盐水及生理盐水插针不注射的海马切片上，海马CA1区的染色特征与注射ANR2B者有明显差别，其作用区锥体细胞、颗粒细胞及顶树突的NR2B免疫组织化学染色强度无明显变化。结论 ANR2B能够降低NR2B蛋白质在正常大鼠海马CA1区的基础性高表达。     

局灶性脑缺血后脑室下区NMDA受体亚单位NR2B的表达变化

目的 观察局灶性脑缺血后侧脑室脑室下区N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR2B的表达变化.方法 44只雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组和脑缺血再灌注组,线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)90 min再灌注模型,术后分3、7、14、21、28天5个时间点取脑,连续石蜡切片,免疫组化反应、图像分析系统行NR2B阳性细胞灰度值测量.结果 脑缺血后,缺血侧NR2B的表达在再灌注后3天开始增加,7天达到高峰(P<0.05),28天降至正常水平(P>0.05);缺血对侧的变化趋势同缺血侧,但表达变化的幅度明显减小.结论 局灶性脑缺血后,SVZ区NR2B表达增加,可能参与该区的神经发生.     

短暂性前脑缺血后大鼠海马各区域bcl-2家族表达变化的研究

目的 观察大鼠前脑缺血再灌流后海马各区域bcl 2家族的表达变化规律。方法 免疫组织学和图象处理技术。结果 (1)前脑缺血再灌流后 6h、12h、24h,bax在CA1区的表达明显增加 (49. 1±8. 0~59. 2±6. 3vs50. 1±4. 0~72. 3±8. 9,P<0. 05);再灌流后 12h,Bax在CA3区的表达略有增加 (P<0. 05);而Bax在齿状回的表达始终无明显变化。(2)在前脑缺血再灌流后 12h、24h,bcl 2及bcl xl在海马三个亚区的表达都明显增加(bcl 2: 72. 7±9. 6~95. 6±6. 4;bcl xl: 67. 7±6. 4 ~88. 1±9. 0, P<0. 05)。结论 CA1区在缺血性脑损伤的早期即出现Bax的表达增加,这个变化可能是CA1区较其他亚区更易产生迟发性神经元缺失的重要原因之一。     

一种经济实用的大鼠侧脑室置管方法

在中枢神经系统的动物实验中,理想的给药方法是先在动物的侧脑室埋植一套管,待动物从置管所引起的应激反应中恢复过来后,再从套管中给药,以避免应激反应对实验结果的影响.     

NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B在生后大鼠海马的免疫组织化学表达

目的 :观察大鼠海马NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B三种蛋白质的生后发育变化。方法 :生后不同时段的SD大鼠各 5只 ,作HE染色 ,NR1、NR2A、NR2B组化反应染色。结果 :生后各时间点海马结构各区锥体细胞及颗粒细胞胞体中均有NR1、NR2A、NR2B的表达 ,NR2B还在锥体细胞的顶树突中有较强表达。NR1与NR2B在P1d和P4d ,两者在CA3区的表达均高于CA1区 ,P1w后两者在CA1区的表达则高于CA3区 ,在P2w～P3w其表达至峰值。而NR2A在P1d、P4d时其在海马结构各区的表达较高 ,随发育时间表达下降 ,约在P4w降至谷底。整个发育过程中 ,NR1在海马各区的表达始终高于NR2A和NR2B的表达。提示生后早期中NR1、NR2A、NR2B的表达具有发育性时空差异