小鼠脾内免疫法制备重组弓形虫SAG1抗原单克隆抗体

 目的 制备小鼠抗重组弓形虫SAG1抗原单克隆抗体,用于早期弓形虫感染的抗原检测。方法 用弓形虫RH株重组抗原SAG1进行常规免疫结合小鼠脾内免疫,杂交瘤技术制备单克隆抗体。ELISA法筛选阳性克隆,经亚克隆建株。诱生腹水法制备抗体,protein-G亲合层析法进行纯化,测定其亚类、效价;Western blot法分析其特异性;夹心-ELISA法检测抗体的敏感性及特异性;检测弓形虫感染小鼠血液循环抗原,同时用PCR法检测弓形虫B1基因并比较结果。结果 获得2株抗重组弓形虫SAG1抗原单克隆抗体3B6、10C4,抗体均为IgG1,轻链均为κ链,Western blot显示2株单抗均能识别弓形虫天然的和重组的SAG1抗原。3B6、10C4敏感度分别为31.3 ng和62.5 ng,与血吸虫病、钩虫病及疟疾患者血清均无交叉反应。弓形虫早期感染检测PCR及ELISA法阳性检出率分别为63.2%、47.4%。结论 成功制备小鼠抗重组弓形虫SAG1抗原单克隆抗体,初步用于早期弓形虫感染诊断。     

全耐药铜绿假单胞菌中多药外排泵mRNA表达的定量RT-PCR检测

目的分析4种重要的药物外排泵系统在临床分离的全耐药铜绿假单胞菌与全敏感铜绿假单胞菌中表达的差异。方法用SYBR G reenⅠ实时定量RT-PCR方法检测临床分离鉴定的全耐药和全敏感铜绿假单胞菌中4种外排泵M exAB-OprM、M exCD-OprJ、M exEF-OprN、M exXY-OprM的mRNA。结果全耐药菌株较全敏感菌株多药外排泵M exAB、M exXY、M exCD、M ex-EF的mRNA表达明显增高(P<0.01)。以敏感菌株拷贝平均数×4判定明显高表达,则全耐药菌M exAB高表达率为18.9%;M exXY高表达率为13.5%;M exCD高表达率为56.8%;M exEF高表达率为35.1%。37株全耐药菌有1种外排泵高表达的8株;2种外排泵高表达的10株;3种外排泵高表达的4株;4种外排泵同时高表达的2株,4种外排泵表达均未增高的有13株。结论药物外排泵系统在临床全耐药铜绿假单胞菌耐药机制中起着重要作用,研究结果提示可能还存在其他耐药机制或存在外排泵功能与其表达量存在差异的情况。     

血清胱抑素C在急性肾盂肾炎中的应用

目的 探讨血清胱抑素C(CysC)在急性肾盂肾炎中的应用价值.方法 检测45例急性肾盂肾炎患者血清CysC及传统的肾功能指标血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平,并与45例健康体检者进行比较分析.结果 急性肾盂肾炎患者血清CysC水平显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而血清Cr、BUN水平与健康对照组比较无统计学差异(P>0.05).CysC的ROC曲线下面积大于Cr和BUN,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 与传统指标Cr、BUN相比,血清CysC在急性肾盂肾炎诊断和反映轻度肾功能损伤上更具优势.     

妊娠期牙龈炎龈沟液中免疫球蛋白测定

妇女在怀孕期，由于体内性激素含量变化常会出现牙龈肿胀、充血、出血等现象。本文对妊娠12周以内与28周以后，并患有不同程度牙龈炎孕妇的龈沟液进行IgA、IgG、IgM含量测定（共31份），另以16份同样患有不同程度的牙龈炎非妊娠妇女的龈沟液作对照，目的在于了解妊娠期内龈沟液中免疫球蛋白的含量有无特殊性。1材料与方法1．1对象及分组在上海石化疾病防治所与金山医院作产前检查的孕妇，随机抽样患有牙龈炎的妊娠12周以内的16人（下称初孕组），妊娠28周之后的15人（下称晚孕组），同时设相同年龄段并患有类似程度牙龈炎的非妊娠妇女16…     

免疫抑制比浊法测定HbA lC的可靠性评价

目的 评价用自动分析仪免疫抑制比浊法测定糖化血红蛋白(HbA1c)的可靠性。方法 按照CLIA88的要求,进行精密度、准确度和可报告范围的评估实验。结果 实验总不精密度为：x(HbA1c)为6．2％时,CV为4．0％;x(HbA1c)为8．2时,CV为2．9％;x(HbA1c)为15．2％时,CV为2．4％。HbA1c在4％～16％范围内线性良好。与Bio-Rad公司的：HPLC方法进行比较(n=42,Y=1．006X 0．114,r=0．970);在HbA1C临界值7．0％处的系统偏倚为0．16％(相对偏倚为2．3％)。结论 以美国糖尿病学会要求的允许误差指标,糖化血红蛋白的总不精密度(CV)不超过5％来判断,免疫抑制比浊法测定HbA1c的结果符合临床对糖尿病病人的治疗监测要求,具有快速、准确、简单的优点。     

柯萨奇B组病毒IgM抗体检测方法的建立及在产科中的应用

应用间接免疫荧光法检测孕产妇血清中柯萨奇Ｂ组病毒ＩｇＭ抗体（ＣＢＶ－ＩｇＭ）并与ＥＬＩＳＡ法作比较，两法结果无显著性差异（ｘ＾２＝０．５，Ｐ〉０．５），１３７０名早，中，晚期孕产妇血清ＣＢＶ－ＩｇＭ抗体检出率均高于非孕组（Ｐ〈０．０５）。     

视网膜母细胞瘤中DLC-1启动子甲基化异常

目的探讨肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)启动子在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的甲基化情况及与临床参数的关系。方法收集37例RB石蜡切片,4例正常眼部组织标本和2株RB细胞系(WERI-Rb1及Y79)。用甲基化敏感性高分辨率熔解(MS-HRM)法定量检测DLC-1甲基化情况,用亚硫酸氢盐测序对其进行验证,并用RT-PCR检测WERI-Rb1和Y79细胞系中DLC-1 mRNA的表达。结果 35.1%的RB中存在DLC-1启动子甲基化,而在正常眼部组织中未发现甲基化;WERI-Rb1和Y79检测出DLC-1 mRNA表达。DLC-1启动子甲基化与肿瘤分化、伴随其他肿瘤和家族史均无显著关系,但单侧RB患者中的DLC-1甲基化率明显高于双侧患者(P<0.05)。结论 RB患者DLC-1启动子存在一定程度的甲基化,DLC-1甲基化在RB的发生、发展中具有一定的作用。     

C-erbB-2、nm23 与胃癌生物学特性的关系研究

目的　通过检测胃癌组织中C erbB 2和nm2 3mRNA的表达水平 ,分析其与胃癌淋巴结转移、浸润深度以及临床分期的关系。方法　用RT PCR检测了 6 3例胃癌患者C erbB 2和nm2 3mRNA的表达水平。结果　C erbB 2RNA的表达量在胃癌浸润程度较深组、有淋巴结转移组以及在胃癌Ⅲ、Ⅳ期组中显著增高 ,而nm2 3则呈相反的趋势。结论　C erbB 2对胃癌的生物学特性有促进作用 ,nm2 3则有抑制作用     

中国男性痛风患者SLC2A9基因单核苷酸多态性与尿酸水平的关系

目的 SLC2A9是新近发现的尿酸转运子,该基因单核苷酸多态性可影响血清尿酸水平。本研究检测SLC2A9基因第6内含子rs7442295多态性在中国男性痛风和原发性高尿酸血症患者中的分布情况以及与尿酸代谢指标的相关性。方法 选取268例原发性痛风患者和288名健康志愿者,分别检测血压、体质量指数、血尿酸、血糖、血脂、肾功能水平,并同时提取外周血DNA,运用高分辨率熔解曲线(HRM)分析rs7442295基因型,并用测序法证实。统计学方法采用x2检验及t检验。结果 运用HRM技术能准确区分rs7442295 A/A和A/G基因型,而G/G基因型则在本研究人群中未发现。A/A和A/G基因型在人群分布频率分别是96.2％和3.8％。与健康对照组相比,痛风组的A/A和A/G基因型频率及A、G等位基因频率分布差异无统计学意义(x2=0.003,P=0.82; x2=0.003,P=1.00),但携带A/G基因型个体的尿酸水平[(293±100) μmol/L]明显低于携带A/A基因型的个体[(392±133) μmol/L]（t=2.426,P＜0.01）,且正常尿酸组内A/G基因型频率明显高于高尿酸组(x2=6.279,P=0.01）,基于HRM技术的基因分型结果与测序法所得结果完全一致。结论 SLC2A9基因rs7442295多态性可能是评估中国汉族男性人群原发性高尿酸血症危险性的一个遗传学标志,HRM技术简单、方便、快速,并实现闭管检测,非常适合单核苷酸多态性分析。     

胃肠道肿瘤患者血浆组织因子的含量和mRNA的表达

目的探讨血浆中组织因子(Tissuefactor,TF)的检测对胃肠道肿瘤患者的临床意义。方法采用ELISA法测定32例胃癌、45例结直肠癌患者和30例正常人血浆中TF，并应用逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)检测这些患者和正常人外周血单核细胞中的mRNA。结果两组消化道肿瘤患者血浆中的TF均远远高于正常组，与病理分级并无相关性；采用RT-PCR法在大部分肿瘤患者单核细胞中可检测到TFmRNA，但在正常组中均不能检测到。结论肿瘤患者血浆中TF升高可能是由于单核细胞合成增加所致，检测TF在血浆中的水平和其mRNA的表达将有助于研究肿瘤发生发展的机制。