CLINICAL SIGNIFICANCE OF THE DETECTION OF MINIMAL RESIDUAL DISEASE IN CHILDHOOD B-ALL BY FLOW CYTOMETRY

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CD10在儿童期B-急性淋巴细胞白血病中的表达特点及其在微小残留病检测中的意义

本研究的目的是观察CDl0在儿童期B急性淋巴细胞白血病(BALL)中的表达情况，并探讨CDl0在白血病微小残留病检测中的应用价值。用流式细胞术分析58例儿童期急性淋巴细胞白血病表型，观察CDl0在BALL病例骨髓细胞中的表达特点，并将CDl0抗体与其它多种抗体构成四色组合用于B-ALL的微小残留病检测，评价其所起到的作用。结果表明，65、5％(38／58)的BALL具有CDl0过强表达(CDl0^bright)的特点，而且CDl0^bright与CD34的阳性表达率有关——CDl0^bright多出现于CD34阳性率高的B-ALL中。CDl0^bright在微小残留病检测中，与其它异常表达的抗原形成的组合能够在双参数点图上很好地区分出白血病细胞群与正常细胞群。即使在其他抗原表达无异常时，也可因CDl0的过强表达而使白血病细胞群与正常细胞群区分开。结论：CDl0^bright与BALL中CD34的高比例表达相关，CDl0^bright也是微小残留病检测的一个很好的指标，CDl0的表达与其他用于微小残留病检测的抗原表达的应用有互补作用。     

胃肠道癌患者外周血CD8＋T细胞功能相关标志物的检测及意义

目的　探讨胃肠道癌患者外周血T细胞亚群和CD8 T细胞CD2 8共刺激分子等功能相关性标志物的表达及意义。方法　用三色或四色荧光标记流式细胞术检测 2 7例胃肠道癌患者及 16例正常对照的外周血淋巴细胞。结果　与正常对照组相比 ,肿瘤患者外周血T细胞标志如CD3 、CD4 、CD8 表达水平及CD4 /CD8 比值差异无显著性 ;CD8 CD2 8-T细胞显著增加 (P <0 .0 1) ,而CD8 CD2 8 T细胞显著降低 (P <0 .0 5 )。表达HLA DR的活化CD8 T细胞显著增加 (P <0 .0 1) ,分泌IFN γ的CD8 T细胞 (Tc1)明显增多 (P <0 .0 1) ,而分泌IL 4的CD8 T细胞 (Tc2 )则正常人和肿瘤患者均很低。患者CD8 T细胞CD2 8及IFN γ的表达变化与肿瘤分期无关。结论　胃肠道癌患者中CD8 T细胞存在系统性活化的表现 ,其机制可能与CD2 8/B7以外的信号传递有关。胃肠道癌患者体内Tc1细胞的增加与肿瘤的分期缺乏明确关系。     

儿童期急性白血病免疫分型诊断新方案的临床应用

目的 建立一种胞膜与胞浆抗原相结合、特异与敏感标志相结合的三色流式细胞术检测方法，研究儿童期急性白血病的免疫表型特点。方法 用CD45／SSC双参数点图区分白血病细胞和正常血细胞后，先用系列特异和敏感指标确定白血病细胞的系列来源，然后根据不同系列来源进一步检测。结果 CD45／SSC能明确区分白血病细胞和正常血细胞。胞浆抗原cCD79a、cCD3和MP0分别是B-ALL、T-ALL和AML的特异性抗原，且能够覆盖白血病分化的各阶段。CD19和CD7分别是B-ALL和T-ALL的系列敏感抗原。这两类抗原的结合在确定急性白血病的系列来源时特异、敏感、可靠，避免了仅用胞膜标记时因抗原跨系表达而获得可疑结果。结论 该方案可提高儿童期白血病免疫分型诊断的准确性，对患者的预后进行评估，是一种值得推广的免疫分型方案。     

儿童期急性白血病免疫分型诊断新方案的临床应用

目的建立一种胞膜与胞浆抗原相结合、特异与敏感标志相结合的三色流式细胞术检测方法,研究儿童期急性白血病的免疫表型特点.方法用CD45/SSC双参数点图区分白血病细胞和正常血细胞后,先用系列特异和敏感指标确定白血病细胞的系列来源,然后根据不同系列来源进一步检测.结果CD45/SSC能明确区分白血病细胞和正常血细胞.胞浆抗原cCD79a、cCD3和MPO分别是B-ALL、T-ALL和AML的特异性抗原,且能够覆盖白血病分化的各阶段.CD19和CD7分别是B-ALL和T-ALL的系列敏感抗原.这两类抗原的结合在确定急性白血病的系列来源时特异、敏感、可靠,避免了仅用胞膜标记时因抗原跨系表达而获得可疑结果.结论该方案可提高儿童期白血病免疫分型诊断的准确性,对患者的预后进行评估,是一种值得推广的免疫分型方案.     

幽门螺杆菌和胃癌关系的分子研究

 目的 探讨HP感染在胃癌及癌前病变中的作用机制。方法 应用分子生物学方法检测C－Ha－ras基因点突变。结果 HP阳性患者C－Ha－ras基因的突变发生率明显高于HP阳性患者;胃癌组HP阳性患者中C－Ha－ras的突变率显著高于阴性患者。结论 HP的感染可能和胃癌的发生有关,基因突变可能是HP致胃癌的作用机制之一。     

p27KIPI与神经母细胞瘤分化的研究

目的探讨p27KIP1在神经母细胞瘤诱导分化及预后的作用.方法用BrdU诱导神经母细胞瘤细胞系TGW的分化,免疫组化法分析神经母细胞瘤分化过程中p27KIP1的表达特点,Western blot法分析p27KIP1的总体表达水平.结果BrdU引起p27KIP1的表达明显增加,主要位于细胞浆,p27KIP1的表达使神经母细胞瘤细胞株的生长停滞,p27KIP1在诱导分化作用下蛋白质表达的总体水平增加.结论p27KIP1的表达与神经母细胞瘤的分化呈正相关,p27KIP1可以抑制神经母细胞瘤的生长并可以成为以促进肿瘤细胞分化的基因治疗方案的基础.     

p53和C-Ha-ras基因在胃癌发生中的作用

目的　探讨 p5 3和C Ha ras基因突变在胃癌发生中的作用。 方法　用PCR SSCP和直接测序检测胃癌组织中C Ha ras(12、13密码子 )和 p5 3(外显子 7)基因的突变。 结果　胃癌组织中C Ha ras和 p5 3基因突变发生率显著高于浅表性胃炎和正常胃黏膜组织 ,基因的联合突变在部分胃癌组织中表达。结论　基因联合突变可能是胃癌发生的机制之一。     

p27KIPI与神经母细胞瘤分化的研究

目的：探讨p27^KIPI在神经母细胞瘤诱导分化及预后的作用。方法：用BrdU诱导神经母细胞瘤细胞系TGW的分化，免疫组化法分析神经母细胞瘤分化过程中p27^KIPI的表达，Western blot法分析p27^KIPI的总体表达水平。结果：BrdU引起p27^KIPI的表达明显增加，主要位于细胞浆，p27^KIPI的表达使神经母细胞瘤细胞株的生长停滞，p27^KIPI在诱导分化作用下蛋白质表达的总体水平增加。结论：p27^KIPI的表达与神经母细胞的分化呈正相关，p27^KIPI可以抑制神经母细胞瘤的生长并可以成为以促进肿瘤细胞分化的基因治疗方案的基础。     

流式细胞术检测儿童B细胞急性淋巴细胞白血病微小残留病

目的建立流式细胞术检测白血病微小残留病(minimal residue disease，MRD)的方法，初步探讨其临床价值。方法用多种四色荧光抗体组合对患儿初发时的白血病细胞进行检测，同时对照多份正常骨髓标本的检测结果，以能够使白血病细胞在双参数点图上出现的位置完全不同于正常骨髓细胞的位置的抗体组合作为有效组合，以这些有效抗体组合对患诱导治疗结束后的骨髓标本进行监测。对58例B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿初诊时的骨髓标本进行了抗体组合有效性的筛选，并对其中的30例患儿诱导治疗结束后的骨髓细胞进行了监测。结果有52例(89．7％)B-ALL患儿都可找到适用于MRD检测的抗体组合。四色组合由CD10／CD34/CD39外加一个有效标志如CD38、CD65、CD66c、CD21等组成。该方法的敏感度为0．01％，远高于形态学检测法。实验中8例患儿诱导治疗结束后的骨髓细胞形态学检测未见白血病残留细胞，但该方法检测结果白血病残留细胞分别为0．028％，1．430％，3．050％，0．015％，5．660％，2．700％，，0．027％和0．069％。结论流式细胞术检测MRD能提高对临床缓解期间患体内残存白血病细胞数量的评估能力。