活化血小板葡萄糖摄取及血小板膜整合素对其的影响

目的 :了解活化血小板葡萄糖摄取过程及血小板膜整合素对其影响 ,探讨整合素与血小板能量代谢的关系 ,旨在研究血小板能量代谢涉及的信号传导 ,并为目前临床应用血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)单抗抗血小板活化提供新的理论依据。方法 :用液态闪烁计数方法检测在血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa单抗 10E5及血小板整合素αυβ3 单抗 6 0 9干预与否情况下凝血酶激活后血小板摄取氚标 2 脱氧葡萄糖 ([3 H]2 DG)率。结果 :在生理浓度范围内活化血小板 [3 H]2 DG摄取率较静息时明显升高 ,单抗 10E5可充分阻断活化血小板葡萄糖摄取 ,单抗 6 0 9可部分阻断。结论 :整合素家族单抗可抑制血小板激活后葡萄糖摄取 ,提示其可能参与血小板能量代谢信号传导过程 ,并可能以GPⅡb/Ⅲa为主     

2型重组腺相关病毒对人脐血CD34+造血干/祖细胞的转导效率研究

为探讨 2型重组腺相关病毒 (rAAV 2 )载体能否有效地转导脐血CD34+造血干 /祖细胞 ,采用rAAV 2 /GFP感染经免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干 /祖细胞 ,在荧光显微镜下观察GFP的表达。结果显示 ,转导 19小时后感染复数 (MOI)为 2× 10 5时 ,CD34+细胞GFP基因的表达率为 4 3%。结论 :rAAV 2能有效地转导脐血CD34+造血干 /祖细胞。     

绿色荧光蛋白(GFP)融合于人整合蛋白αⅡb C端不影响αⅡbβ3复合物在CHO细胞正常表达

本研究选择αⅡb作为靶蛋白观察绿色荧光蛋白(GFP)标记对αⅡbβ3复合物生物合成过程和表达的影响。从人αⅡb表达载体p3．1—2b中经PCR扩增的αⅡb基因全长cDNA，插入表达载体pEGFP—N1中构建αⅡbGFP融合蛋白表达载体，测序正确后利用脂质体将重组质粒与表达人整合蛋白B，亚基的真核表达质粒p3．1—3a共转染CHO细胞，对转染后细胞用Western blot方法鉴定αⅡbGFP基因在CHO细胞中的表达并用激光共聚焦显微镜确定融合蛋白的细胞内定位，结果表明：经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒，Western blot证明转基因CHO细胞有人αⅡbGFP基因的表达，融合蛋白细胞内定位研究显示αⅡbGFP可以由内质网转运至高尔基体．．结论：成功构建了人αⅡbGFP融合蛋白真核表达载体；GFP融合于αⅡbC端不影响αⅡbβ3复合物在CHO细胞的正常表达。     

活化血小板葡萄糖摄取及血小板膜整合素对其的影响

目的：了解活化血小板葡萄糖摄取过程及血小板膜整合素对其影响，探讨整合素与血小板能量代谢的关系，旨在研究血小板能量代谢涉及的信号传导，并为目前临床应用血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)单抗抗血小板活化提供新的理论依据。方法：用液态闪烁计数方法检测在血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa单抗10E5及血小板整合素αvβ3单抗609干预与否情况下凝血酶激活后血小板摄取氚标2－脱氧葡萄糖[^3H]2-DG)率。结果：在生理浓度范围内活化血小板[^3H]2-DG摄取率较静息时明显升高，单抗10E5可充分阻断活化血小板葡萄糖摄取，单抗609可部分阻断。结论：整合素家族单抗可抑制血小板激活后葡萄糖摄取，提示其可能参与血小板能量代谢信号传导过程，并可能以GPⅡb/Ⅲa为主。     

Amifostine:一种广谱细胞保护剂与恶性血液病

Amifostine作为一种化疗正常细胞广谱保护剂具有内在促干细胞增殖作用,可提高白血病大剂量化疗效果,增强自体干细胞移植体外净化作用,改善骨髓异常增生综合征无效造血,在恶性血液病患者的应用具有广阔前景。     

Amifostine：一种广谱细胞保护剂与恶性血液病

Amifostine作为一种化疗正常细胞广谱保护剂具有内在促干细胞增殖作用，可提高白血病大剂量化疗效果，增强自体干细胞移植体外净化作用，改善骨髓异常增生综合征无效造血，在恶性血液病者的应用具有广阔前景。     

3例获得性血友病A报告及文献复习

<正>获得性血友病A(acquited hemophilia A,AH-A)是由于非血友病患者体内自发性产生针对凝血因子Ⅷ(FⅧ)的特异性自身抗体(FⅧantibody,亦称FⅧ抑制物)而引起的1种出血性疾病[1,2]。这种自身抗体能引起FⅧ活性降低,产生     

血小板膜糖蛋白αⅡb基因A2334 C突变对αⅡ bβ3复合物合成及转运的影响--附一例报告

目的探讨血小板膜糖蛋白αⅡb基因A2334C突变对αⅡbβ3复合物合成的影响。方法构建αⅡb基因A2334C真核表达载体，测序正确后用脂质体将其与表达人整合素β3亚基的真核表达质粒αⅡbβ3共转染CH0细胞，对转染后细胞用Westelmblot法鉴定αⅡb基因A2334C突变体在CH0细胞中的总体表达；用流式细胞仪分析转运至细胞膜表面的αⅡb基因A2334C亚基；为了明确突变亚基的亚细胞定位，构建了αⅡb基因A2334C GFP融合蛋白表达质粒并用激光共聚焦显微镜确定GFP融合蛋白的细胞内定位。结果Western blot证明转基因CH0细胞有αⅡb A2334C基因的表达，但是成熟αⅡb的比例较正常对照低；流式细胞仪检测发现在细胞膜上有该亚基的分布，但是只有正常的25％；进一步的融合蛋白细胞内定位研究显示，αⅡb基因．A2334C GFP可以由内质网转运至高尔基体。结论αⅡb基因A2334C突变没有影响αⅡb的合成及其与B3的结合，但是仅有少部分前体αⅡb能够进一步形成成熟的αⅡb，其膜上的表达仅为正常的25％。该突变不影响αⅡbβ3由内质网向高尔基体的转运。该突变的致病机制可能是αⅡb的折叠错误使其容易降解导致膜上αⅡbβ3复合物减少及血小板功能减弱。     

盐酸右美托咪定对H2O2诱导的库普弗细胞氧化应激和炎性反应的影响

目的：观察α2肾上腺能受体激动剂盐酸右美托咪定能否抑制过氧化氢(H2O2)诱导的库普弗细胞(Kupffer cells,KCs)氧化应激和炎性反应。方法：分离和培养KCs,分别用盐酸右美托咪定或育亨宾处理24 h后,以H2O2作用30 min建立细胞氧化损伤模型,应用MTT比色法检测H2O2诱导的损伤细胞的存活率;用相应的试剂盒测定各组细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)释放量。结果：盐酸右美托咪定显著抑制H2O2诱导的KCs的损伤,提高细胞的存活率,抑制上清液中LDH,MDA,TNF-α释放,这种作用可以被α2受体拮抗剂育亨宾完全拮抗,而育亨宾本身对细胞的氧化损伤和炎性反应没有影响。结论：盐酸右美托咪定可以减轻H2O2诱导的KCs的氧化应激和炎性反应,其可能是通过α2肾上腺能受体发挥作用。     

pcDNA3.1F9质粒介导人凝血因子IX在肠上皮细胞中的表达

目的探索肠上皮细胞用于血友病B基因治疗的可能性。方法用已构建好的质粒载体pcDNA3.1F9,以脂质体介导法转染肠上皮细胞SW480,RT-PCR检测mRNA的转录,ELISA、一期法检测蛋白表达及凝血活性。结果转染后的细胞中有人凝血因子IX(humancoagulationfactorIX,hFIX)mRNA的转录;ELISA法测得转染后24h细胞上清中的hFIX蛋白量为(11.72±0.24)ng·106cell-1·24h-1,转染后48hhFIX蛋白量为(381.34±16.16)ng·106cell-1·24h-1。一期法结果示细胞上清中的hFIX有凝血活性,转染后48h达(45±0.85)%·106cell-1。结论肠上皮细胞SW480转染pcDNA3.1F9质粒后可表达有凝血活性的hFIX,肠上皮细胞有望成为血友病B基因治疗的靶细胞。