海运法律中限制“合同自由”原则的历史变迁

1893年美国《哈特法》的制定标志着法律开始限制航运界的盛行已久的"合同自由"原则.此后不到一个世纪,《海牙规则》、《海牙-维斯比规则》和《汉堡规则》的相继出台,使得立法对海上货物运输合同的规制趋于严格,这引起了国际航运界普遍不满.2008年《鹿特丹规则》为适应航运市场新形势,赋予了批量合同较大的合同自由.     

SELEX筛选骨肉瘤HER2适配体方法的建立

目的应用SELEX(system evolution of ligands by exponential enrichment)技术筛选与HER2特异性结合的寡聚核酸适配体(aptamer)。方法体外合成了长度为78个碱基并含有35个随机寡核苷酸的ssDNA文库,通过生物素-链亲和素磁珠系统分离法制备次级ssDNA文库,且经以微孔为介质的SELEX正反筛法获得了与HER2特异性结合的DNA适配体;同时利用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA与靶蛋白HER2的亲和力,将亲和力最高的适配体群进行克隆、测序。最后利用生物学软件DNAMAN对适配体群进行了一级结构和二级结构的分析,同时将亲和性最高的适配体做了进一步的特异性的检验。结果经过12轮的筛选,获得了与HER2蛋白具有极高亲和力的适配体9号,亲和力从初始的0.18上升至0.86,提高了约5倍。特异性结果显示,9号适配体只与HER2具有较高的特异性。结论经过多轮的筛选,成功获得了特异性识别骨肉瘤HER2蛋白的单链DNA适配体,为骨肉瘤的诊断和治疗奠定了基础。