NADPH氧化酶NOX4抑制剂调节肝癌相关成纤维细胞的形成和机制研究

目的：研究NADPH氧化酶（NOX4）抑制剂GLX351322抑制肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）形成的作用和机制。方法：小鼠成纤维细胞NIH3T3和肝癌H22共培养,5 μmol/L（IC50）的GLX351322进行NIH3T3预处理。CCK-8法检测成纤维细胞的活力,PI染色后流式细胞术检测细胞周期的改变,免疫荧光染色检测CAFs标志物α-SMA和FAP的表达,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测CAFs标志物α-SMA、Desmin、FAP、TSP-1、FSP、CyclinD的表达水平以及TGF-β1、Smad1的表达。H22构建荷瘤小鼠模型后,GLX351322处理,免疫组织化学染色检测肿瘤组织中α-SMA的表达情况以及CAFs标志物的表达水平。结果：GLX351322预处理后可以抑制NIH3T3的增殖,细胞活力下调,周期改变。同时可以下调CAFs标志物α-SMA、Desmin、FAP、TSP-1、FSP、CyclinD的表达,且TGF-β信号受到抑制。而在荷瘤小鼠模型中,GLX351322也可以显著抑制α-SMA的表达以及CAFs标志物的表达水平。结论：NOX4抑制剂GLX351322可以抑制肿瘤相关成纤维细胞的形成,其作用和TGF-β信号抑制有关。     

樟芝多糖抑制肿瘤相关成纤维细胞生成的作用研究

目的: 研究樟芝多糖抑制肝癌细胞条件性培养基诱导骨髓间充质干细胞（MSC）向肿瘤相关成纤维细胞转化的作用。方法: 分离人肝癌细胞HepG2培养基（CM），将骨髓间充质干细胞分为正常组、对照组和实验组，正常组为常规DMEM培养基+10%胎牛血清（FBS），对照组为CM+10%FBS培养，实验组为CM+10%FBS培养+10 mg/L的樟芝多糖培养。应用CCK-8试剂盒检测MSC的细胞活性，BrdU标记-流式细胞术检测细胞增殖率，流式细胞术检测细胞凋亡率，PI染色检测细胞周期变化，Western blot法检测α-平滑肌激动蛋白（α-SMA）、肌间线蛋白（Desmin）、成纤维细胞活化蛋白（FAP）、凝血酶敏感蛋白1（Tsp-1）、成纤维细胞特异蛋白（FSP）的表达以及转化生长因子β1（TGF-β1）、信号转导分子（Smad1、Smad2）的表达水平，免疫荧光染色法检测α-SMA、FAP和FSP的表达水平。结果: 对照组MSC的细胞活力显著高于正常组和实验组（P<0.05），三组细胞的细胞凋亡率无统计学差异（P>0.05），对照组MSC中G0/G1期比例降低，S期比例增高，相比正常组和实验组具有统计学差异（P<0.05），对照组MSC中α-SMA、Desmin、FAP、Tsp-1、FSP的表达水平以及TGF-β1、Smad1、Smad2的表达水平显著高于正常组和实验组（P<0.05），免疫荧光结果也显示对照组中α-SMA、FAP和FSP的水平显著高于正常组和实验组（P<0.05）。结论: 肝癌细胞条件性培养基可以促进MSC向肿瘤相关成纤维细胞转化，而樟芝多糖可以抑制该转化，这是樟芝多糖抗肿瘤作用的机制之一。     

米诺环素抑制炎症小体介导的细胞焦亡改善阿尔茨海默病小鼠的认知能力研究

目的: 研究米诺环素(minocycline, Mino)抑制炎症小体介导的细胞焦亡改善阿尔茨海默病认知能力的作用机制。方法: 脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导大鼠神经细胞株PC12构建神经细胞焦亡损伤模型,将细胞分为对照组、LPS组、LPS+Mino组,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,蛋白免疫印迹法检测炎症小体关键蛋白NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain containing 3, NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC)、Caspase-1及pro-Caspase-1的水平以及焦亡执行蛋白Gasdermin-D(GSDMD)、p30-GSDMD的水平,酶联免疫吸附法检测培养基中白介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平。APP-PS1双转基因小鼠10只,随机分为对照组和实验组,实验组采用50 μg的米诺环素灌胃给药,分别在给药前和给药后3周采用Morris水迷宫实验检测小鼠的认知记忆能力,处死小鼠后取海马CA3区检测组织中NLRP3、ASC、Caspase-1及pro-Caspase-1的蛋白表达,以及炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α、焦亡执行蛋白GSDMD、p30-GSDMD的水平。结果: 米诺环素可以抑制LPS诱导的细胞凋亡,LPS+Mino组细胞活力显著高于LPS组,而细胞凋亡率显著低于LPS组,差异具有统计学意义(P<0.05)。而LPS+Mino组中炎症小体关键蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达低于LPS组,同时焦亡执行蛋白p30-GSDMD低于LPS组,GSDMD高于LPS组,培养基中IL-1β、IL-18、TNF-α的水平低于LPS组,差异具有统计学意义(P<0.05)。动物实验中,米诺环素可以显著改善小鼠的认知能力;Morris水迷宫实验中,小鼠潜伏期缩短,相比对照组具有统计学意义(P<0.05)。同时小鼠穿越平台次数明显增多,相比对照组具有统计学意义(P<0.05)。实验组小鼠炎症小体关键蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达低于对照组,同时焦亡执行蛋白p30-GSDMD低于对照组,GSDMD高于对照组,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α的水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论: 米诺环素可以通过抑制炎症小体活化,抑制神经细胞焦亡的发生,同时改善阿尔茨海默病小鼠的认知能力。