活组织块保存与存活的实验观察

细胞冻存与复苏在医疗、生物、优生学等多个领域已广泛应用，但对于一些难得的组织，因实验工作的原因还需要重复实验，反复培养，或直接用组织块接种到动物体内。为了减轻患者的痛苦和减少反复取材的麻烦及浪费，我们以人胚肌肉小组织块为材料，用组织块方法保存，观察其活细胞率和培养细胞的存活率。     

肺神经内分泌癌的免疫组化与免疫电镜研究

本文应用免疫组化与免疫电镜技术对20例肺神经内分泌癌进行了研究,另6例非神经内分泌癌作为对照。结果表明:嗜铬颗粒蛋白A免疫组化染色19/20例阳性,免疫电镜能够比较特异地标记神经分泌颗粒,具有确诊意义;神经特异性烯醇化酶染色20/20例阳性,非神经内分泌癌3/6例阳性,免疫电镜下无特异性分布,适宜作为诊断的筛选指标;S-100蛋白和5-HT亦可作为诊断之参考。     

抗人肺巨细胞癌单克隆抗体的制备与鉴定

在抗人肺巨细胞癌单克隆抗体(简称单抗)的研制中,建立了裸鼠人肺巨细胞癌移植模型,并对荷瘤裸鼠进行免疫重建、取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,经筛选克隆出两株单抗LD13和LD15。融合率为100％,首次检测阳性孔率为70％,优于对照组常规免疫的方法。     

放射性碘标记组合单克隆抗体在移植人结肠癌细胞系裸鼠体内的放射免疫显像

肿瘤放射免疫定位的关键是提高T/N(肿瘤/非肿瘤)比值和ID％/g(每克组织中注入剂量的摄取百分数)。将针对不同抗原决定簇的多株单克隆抗体组合应用是一条有效的途径。我们用抗结肠癌单克隆抗体CL-2,CL_3和抗胰腺癌单克隆抗体PS-9组合     

氩激光对培养的牛视网膜色素上皮细胞损伤的扫描电镜观察

目的采用扫描电镜观察氩激光对体外培养的牛视网膜色素上皮(RPE)细胞表面的损伤情况。方法培养牛视网膜色素上皮细胞,将第4代细胞传代成融合状态后,用氩激光对RPE细胞进行照射,激光能量为0.8W,曝光时间为0.2s,光斑直径为200μm,激光照射后用扫描电镜观察色素上皮细胞表面超微结构变化。结果激光照射后,可见光斑中央区的细胞脱失,光斑周边损伤细胞主要表现为表面微绒毛的减少或消失,微绒毛卷曲,有些细胞边缘卷曲及细胞膜破裂出现不规则小孔。结论激光对体外培养的RPE细胞照射可造成色素上皮细胞脱失,细胞膜损伤及微绒毛损伤。     

转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸微球对干细胞的调控

文题释义：转化生长因子β3：是转化生长因子β超家族成员,在胚胎软骨形成的多个时期都是必不可少的软骨组织形成的关键调节因子,可以促进间充质干细胞迁移并诱导其向软骨组织分化与成熟,促进软骨缺损的愈合。 聚乳酸-羟基乙酸微球：属于食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准的可生物降解聚合物,具有可控的降解性和良好的生物相容性,被广泛应用于医药领域。由于其生物可降解性,聚乳酸-羟基乙酸微球微球被广泛应用于小分子药物、蛋白质和其他大分子药物的可控持续释放。 背景：转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球系统可使药物在作用部位维持有效药物浓度,提高生长因子的利用率。 目的：优化转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球制备工艺,探究其对脂肪间充质干细胞增殖和迁移的影响。 方法：采用乳化-溶剂挥发法制备转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球,并对微球的形态、粒径大小、药物空间分布、包封率、载药量和缓释性能进行表征。将转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球溶解于PBS中,于相应的时间点检测上清液中转化生长因子β3浓度,对应时间点扫描电镜观察微球形态。将脂肪间充质干细胞分6组培养,分别加入培养基(阴性对照)、含转化生长因子β3的培养基、含空白聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基、含10,100,1 000 g/L转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基,于对应的时间点CCK-8法检测增殖。将脂肪间充质干细胞分别与培养基(阴性对照)、含转化生长因子β3的培养基、含聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基、含10,100,1 000 g/L转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基以非接触方式共培养24 h,检测细胞迁移数量。结果与结论：①转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸微球呈球形,表面光滑,无粘连,粒径均匀分布,微球直径2-50 μm,微球内的蛋白药物分布均匀,具有较高的包封率与载药量;②缓释微球具有良好的降解性能,体外可于6个月后完全降解;同时具有良好的缓释性能,体外可缓慢释放转化生长因子β3长达45 d;③空白微球及含转化生长因子β3的缓释微球对脂肪间充质干细胞增殖无影响;④空白微球对脂肪间充质干细胞的迁移无影响,转化生长因子β3及含转化生长因子β3的缓释微球可促进脂肪间充质干细胞的迁移,不同质量浓度缓释微球间的促进效果无差异;⑤结果表明,转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球可在不影响脂肪间充质干细胞增殖的情况下促进其迁移。 ORCID: 0000-0002-2267-4589(杨振) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

人脱细胞软骨细胞外基质对异种软骨种子细胞的影响

目的观察人脱细胞软骨细胞外基质(hACAM)对异种兔软骨种子细胞增殖和表型的影响。方法将差速梯度离心法制作的人脱细胞软骨细胞外基质,配制成0.5%的浆料,分别铺于6孔细胞培养板和96孔细胞培养板,形成1 mm厚的薄膜,以此培养板为实验组。空白对照组培养板仅使用单纯培养液培养。在培养板上培养兔关节软骨细胞。通过hochest33258染色验证人软骨细胞外基质脱细胞完全与否;分别在第5、15天两个时间点,通过倒置显微镜、甲苯胺蓝染色观察两种培养方法的兔软骨细胞的生长形态、细胞表型和增殖情况,用CCK-8细胞增殖实验比较两种培养方法在第1、3、7、10天的增殖情况。结果通过hochest33258染色发现差速梯度离心的人软骨细胞外基质脱细胞完全。通过倒置显微镜观察第5和15天的实验组细胞增殖情况优于空白对照组,甲苯胺蓝染色的结果也证明这个观点;CCK-8细胞增殖试验显示第7天hACAM组在细胞增殖方面明显地优于单纯培养液的对照组(P=0.0298),hACAM组的软骨细胞与空白组的软骨细胞在第10天的增殖情况相比没有统计学差异。结论 hACAM免疫原性低,无细胞毒性,能够很好地促进异种软骨细胞的增殖。     

多媒体数字化系统在细胞生物技术研究中的应用

目的 在细胞生物学研究中，利用先进的多媒体技术对传统的图像资料采集方法进行改革，提高资料采集、储存和保管的质量。方法 实验于2002-02／2004-05在解放军总医院全军骨科研究所完成。利用计算机、数码照相机、扫描仪、刻录仪、计算机图像采集系统、彩色激光打印机及各种软件收集和再现各方面的信息资料，按研究目的制作不同数据库及多媒体文件，建立影像资料库，简化资料的处理过程。结果 2002-02起建立细胞生物学多媒体数字化系统，截至2004-05，累计采集图像16万张，相关资料容量60G。结论 此套系统效率高，成本低，技术易掌握，资料分类、保存、查找容易，便于医学科研工作。     

柠檬酸化半水硫酸钙作为骨移植替代材料的安全性及生物相容性评价

目的：以二水硫酸钙为原料，制备出高纯度柠檬酸化半水硫酸钙，并对其生物相容性进行评价。方法：实验于2004-09／2005-01在解放军总医院骨科研究所完成。柠檬酸化半水硫酸钙粉沫是粉状的二水硫酸钙经特殊处理制得。根据文献对实验材料进行生物相容性及安全性评价实验。①红细胞溶解性：材料粉末制备的浸提液加入抗凝兔血内恒温水浴60min、离心取上清液，分光光度计测定上清液吸光度。计算红细胞溶血率（％）=（实验组吸光度-阴性对照组吸光度）／（阳性对照组吸光度-阴性对照组吸光度）&;#215;100％、标准：≤5％为正常。②细胞毒性试验：采用四甲基偶氮唑盐比色法。兔骨髓基质干细胞经复苏、传代、培养24h后进行更换含材料浸提液的培养基继续培养、酶标仪测定1，3，5，7d吸光度。计算细胞相对增值率=实验组吸光度／对照组吸光度。③细胞材料表面贴附：骨髓基质干细胞细胞悬液滴在材料表面，培养3d后，倒置显微镜下观察材料边缘细胞生长情况。乙醇固定后用环境扫描电镜镜下观察材料表面的细胞贴附情况。④热源性：自体温试验筛选合格新西兰家兔的耳缘静脉注入材料浸提液后，定时测兔体温。标准：每只体温升高在0．6℃以下，3只体温升高总度数小于1．4℃。⑤皮肤刺激性：健康新西兰家兔脊柱两侧选点注射材料花生油及DMEM浸提液，每个点注射0．2mL。观察注射部位皮肤反应。⑥致敏性：将浸提液与完全氟氏佐剂完全乳化制成相应剂型试剂，以豚鼠为观察对象，观察腹部激发部位皮肤反应。结果：①材料特性：制备材料2h固化抗压缩强度达到26MPa，初凝时间5rain，终凝时间20min。扫描电镜观察为晶体形态均一、为规则的六面体结构。②细胞粘附与生长形态：骨髓基质干细胞在材料周围生长．环境扫描电镜观察细胞贴附材料表面生长，呈不规则的梭形、多角形，胞体伸出伪足长短不等。③红细胞溶解实验：红细胞溶血率为0．34％，远小于阳性标准，说明材料植入体内后不会引起机体本身的溶血反应。④热源反应：家兔平均体温升高为0．1℃，符合医用材料的热源反应要求，说明本材料本身不具有致热源作用。⑤皮内注射：两组浸提液皮内注射后均未引起家兔实验区的红斑及水肿反应，提示材料对动物机体没有刺激性。⑥致敏实验：致敏率为0，与阴性对照没有差别，说明材料没有致敏性。⑦细胞毒性实验的检测结果提示实验组细胞相对增值率和对照组无显著性差别，评分为0～1级，说明材料本身不具有细胞毒性。结论：生物安全性评价结果初步显示制备的材料具有良好的生物相容性，符合医用生物材料的基本要求。