良性前列腺增生组织中一氧化氮合酶活性的变化

为探讨一氧化氮（ＮＯ）与良性前列腺增生（ＢＰＨ）发病的关系，应用双波长分光光度法测定１５例正常前列腺及２５例ＢＰＨ组织中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性，并比较不同年龄组的正常前列腺及ＢＰＨ组织中ＮＯＳ活性水平。结果：ＢＰＨ组织中ＮＯＳ活性（９６．７７±２８．０２ｐｍｏｌ．ｍｇ－１．ｍｉｎ－１）明显低于正常前列腺者（２９０．９９±１３０．６８ｐｍｏｌ．ｍｇ－１．ｍｉｎ－１），Ｐ＜０．００１。不同年龄组的正常前列腺组织中ＮＯＳ活性水平与年龄无相关关系。而在５０岁、６０岁和≥７０岁三个年龄组之间的ＢＰＨ组织中ＮＯＳ活性水平有显著性差异，Ｐ＜０．０１，ＢＰＨ组织中ＮＯＳ活性水平随年龄增大呈下降趋势。结果提示前列腺组织中ＮＯＳ活性水平与ＢＰＨ有相关关系，ＮＯＳ活性降低可能是ＢＰＨ的年龄依赖性发病原因之一。     

突变型K5重组蛋白抑制小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长的作用

目的：体内实验观察人纤溶酶原K5缺失突变体Ⅰ（K5 mut1）对HepA小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。 方法:大肠杆菌中表达，组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5 mut1蛋白，SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定其表达；建立皮下种植肝癌小鼠模型，腹腔注射不同剂量K5 mut1重组蛋白，检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度（MVD）。结果： SDS-PAGE及Western blotting鉴定获得K5 mut1纯化蛋白；K5 mut1剂量依赖性地抑制小鼠肝癌（HepA）实体瘤生长，不同剂量K5 mut1治疗组肝癌组织MVD低于对照组，并随K5 mut1用药剂量增加而降低。 结论： K5 mut1具有抑制小鼠肝癌生长的作用，抑制肿瘤血管生成可能是K5 mut1抑制肿瘤生长的主要机制。结果提示K5 mut1具有治疗肝癌的潜在临床价值。     

生物化学动画库的构建及其应用

针对生物化学学科特点和Flash独特的优势，结合教学实际，构建了生物化学Flash动画库，提供了一批形象直观的动画，并应用于生物化学的教学实践，充分显示了Flash在提高生物化学教学质量方面所具有的潜力。     

人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)抑制小鼠肝癌的血管生成和肿瘤生长

[目的]体内、体外实验观察人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)对肝癌血管生成和肿瘤生长的影响.[方法]大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5蛋白,SDS-PAGE和Western blot方法鉴定K5蛋白的表达;MTT法分析K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRCEC)和肝癌细胞株Bel-7402、HepG2增殖的影响;建立皮下种植肝癌鼠模型,瘤内注射K5,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD).[结果]SDS-PAGE及Western blot鉴定获得K5纯化蛋白;K5特异性地抑制BRCEC的增殖,IC50=160 nmol/L,而对肝癌细胞株Bel-7402、HepG2的增殖无抑制作用;K5显著抑制小鼠肝癌生长,治疗组肝癌组织MVD明显低于对照组.[结论]K5抑制移植性小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长,特异性抑制血管内皮细胞的增殖可能是K5抑制肝癌血管生成的主要机制.K5具有治疗肝癌的潜在临床价值.     

人纤溶酶原K5突变体在大肠杆菌中的优化表达

 【目的】 降低成本，增大产出，提高K5突变体（mK5）在原核系统的单位表达量。 【方法】 调整可能影响表达的参数：抗生素浓度、pH、A600值、IPTG终浓度、诱导时间、诱导温度，同时固定其它参数。通过电泳分析，获得mK5在原核系统pET22b-BL21的最优表达条件；组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得mK5蛋白，SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定mK5蛋白；MTT法分析mK5对人视网膜毛细血管内皮细胞（HRCEC）增殖的影响。【结果】 优化后的表达条件为：最适细菌培养温度为37℃，最佳抗生素浓度为50μg/mL羧苄青霉素，最适pH值为7.0，在A600为0.9～1.0时加入终浓度为1.0 mmol/L的IPTG为最佳诱导条件，37℃诱导10 h为最佳诱导时间；优化条件后mK5纯化蛋白得率为21 mg/L，产量较优化前(15 mg/L)提高近30％；mK5特异性地抑制HRCEC的增殖，IC50=40 nmol/L。【结论】 本研究确定了mK5蛋白诱导表达的最适参数，并获得具有生物活性的高纯度、高表达量的重组蛋白，为工业化大规模发酵生产提供了基本参数。     

老年记忆减退大鼠NO2^—含量和NOS活性的变化

目的：同时测定老年性记忆减退大鼠一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性和一氧化氮（ＮＯ）的终末代谢产物亚硝酸盐含量（ＮＯ２＾－），研究ＮＯ与老年记减退发生的关系，为探讨老年性记忆减退发生的机制及寻找新的治疗方法提供理论依据。方法：用Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫将老年大鼠（２４月龄）筛选为记忆正常和记忆减退两组，以老年记忆减退大鼠作为老年记忆减退模型；用双波长分光光度法测定一氧化氮合酶（ＮＯＳ）比活性；用改良硝酸还原酶法     

TaqDNA聚合酶一步法获得TGF-β_1基因片段的RT-PCR扩增产物

以组织细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，加入ＴａｑＤＮＡ聚合酶和一对以ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ为模板设计的引物，经变性、退火、延伸共３０次循环后，可以得到以ｃＤＮＡ为模板的扩增产物。实验证实ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有逆转录酶活性，用一步常规聚合酶链反应即可获取逆转录聚合酶链反应的ＴＧＦβ１４６８ｂｐ扩增产物。     

老年大鼠脑突触体谷氨酸,γ—氨基丁酸的代谢变化

采用SD雄性青年大白鼠(3月龄)和老年大白鼠(27月龄),分别取其海马、额皮质和颞皮质制备突触体,观察衰老时,突触体高亲和力摄取和释放Glu、GABA的变化。结果表明:①老年大鼠海马、额皮质和颞皮质突触体对~3H—Glu、~3H—GABA的高亲和力摄取较青年鼠均极显著下降;②老年大鼠海马突触体释放Ser、His、Gly、Thr、Met及GABA显著减少,释放Glu无明显改变;③β—丙氨酸抑制青年鼠突触体摄取~3H-GABA,抑老老年鼠突触体摄取~3H-Glu和~3H-GABA。本文结果提示,衰老时大鼠脑突触体两种递质氨基酸Glu和GABA的代谢减退。     

一氧化氮及其基因表达与前列腺增生膀胱颈梗阻的关系

一氧化氮（ＮＯ）是生物体内的一种重要信使分子，参与多种生理功能的调节，并在多种疾病的发病中起重要作用。最近有研究表明前列腺组织中也存在ＮＯ，并参与其平滑肌张力的调节［１］。本研究通过测定前列腺增生（ＢＰＨ）组织中ＮＯ合酶（ＮＯＳ）及其基因表达的变化，...     

老年学习记忆减退大鼠脑线粒体DNA缺失

目的和方法:测定老年大鼠脑mtDNA缺失型(以下简称缺失型),缺失mtDNA比例,探讨mtDNA缺失与老年性学习记忆减退的关系,为研究其分子机制提供基础资料。用Morris水迷宫将老年大鼠(24个月)筛选为老年学习记忆正常和学习记忆减退两组。用稀释PCR法测定大鼠大脑皮质、海马和小脑缺失型mtDNA比例。结果:青老年鼠大脑皮质、海马和小脑均存在mtDNA缺失,片段为4834bp;青年鼠的缺失比例约为0.00018%。老年记忆正常鼠上述3个脑区缺失型mtDNA缺失比例分别是青年鼠的6倍、6倍和2倍;老年记忆减退大鼠上述脑区的缺失型mtDNA比例分别是老年记忆正常鼠的2倍、1.8倍和3倍。结论:衰老时脑组织缺失型mtDNA增多,而老年学习记忆减退鼠较老年学习记忆正常鼠mtDNA缺失进一步成倍增加,表明相关脑区的mtDNA缺失在老年学习记忆减退的细胞分子机制中发挥重要作用。