贵州白纹伊蚊对登革病毒易感性的研究

目的 用细胞、分子生物学技术进行贵州省白纹伊蚊不同地理株对登革病毒(DEN)易感性的研究。方法 采集贵州省9个地(州)市共计15个县(区)白纹伊蚊幼虫标本，饲养为成蚊；取羽化后3～5日龄期的贵州不同地理株白纹伊蚊，用不同型别的DEN分别经口连续感染3d，于首次感染后的4、7、10、14d收集感染成蚊标本；制备蚊悬液，碘化钠法提取RNA，用DENNS1基因区通用引物经逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)检测DEN核酸；蚊悬液接种C6／36细胞进行病毒分离，制作细胞抗原片，经间接免疫荧光法检测DEN抗原；同时感染白纹伊蚊海南株作为对照。结果 DEN1-4型国际参考株感染白纹伊蚊贵州省不同地方株，其感染比率分别为12／15、12／15、8／15和13／15。结论 白纹伊蚊贵州省不同地方株对DEN1-4型国际参考株普遍易感，表明贵州省具备引起登革热流行的条件。     

白纹伊蚊对登革病毒垂直传递能力研究

目的利用细胞及分子生物学技术，研究白纹伊蚊贵州省贵阳、兴义、毕节株对1—4型登革病毒（DEN1—4）的垂直传递能力。方法采集贵州省贵阳、兴义、毕节市市郊自然界白纹伊蚊，驯化3代。分别取羽化后3～5d龄成蚊为实验组，白纹伊蚊海南株为对照组；用DEN1—4国际参考株分别感染各组蚊虫，将感染后亲代及子1～3代成蚊制备蚊悬液，接种C6／36进行病毒分离并鉴定；间接免疫荧光法检测DEN抗原；常规方法提取总RNA。利用DENNS1基因区通用引物经逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测DEN核酸，限制性内切酶酶切分型。结果白纹伊蚊贵阳、兴义、毕节、海南株亲代蚊虫均对DEN易感；白纹伊蚊兴义株与海南株均能垂直传递DEN-1、4到子3代。传递DEN-3到子2代，白纹伊蚊兴义株能垂直传递DEN-2到子3代，白纹伊蚊贵阳．株能垂直传递DEN-1到子3代，传递DEN-2、3、4到子2代，白纹伊蚊毕节株能垂直传递DEN-1到子2代，DEN-4至子3代，未发现能垂直传递DEN-2、3。结论对DEN1—4易感的白纹伊蚊贵阳、兴义、毕节株能垂直传递DEN，且对DEN的垂直传递能力与其地理来源有关；贵州省3个地方株的白纹伊蚊卵可在干燥室温条件下越冬保存DEN。     

贵州自然界白纹伊蚊体内登划病毒带毒情况

目的:利用细胞、分子生物学技术对贵州省自然界白纹体内带登革病毒(DEN)情况进行调查.方法:采集贵州省9个地(州)市共计18个县(区)白纹伊蚊幼虫标本,饲养为成蚊;     

麻疹疫苗及加佐剂经滴鼻免疫小鼠的抗体应答

目的：观察麻疹减毒活疫苗和灭活疫苗经滴鼻免疫小鼠后的抗体应答。方法：用活的或灭活麻疹疫苗及分别加明胶、植物血凝素(PHA)的疫苗滴鼻免疫小鼠，于末次免疫后10d取血清、唾液、呼吸道分泌物，用间接ELISA法检测特异性IgG，IgA抗体水平，并与皮下注射组及对照组进行比较。结果：各滴鼻组小鼠血清及呼吸道分泌物中均产生一定水平的特异性IgG及In抗体，皮下注射组小鼠呼吸道分泌物中未产生特异性IgA抗体；加明胶后的免疫效果优于加PHA的。结论：麻疹疫苗滴鼻免疫小鼠后可诱导全身及局部抗体应答，明胶可增强其免疫效果，而麻疹疫苗皮下注射免疫小鼠未能诱导局部抗体应答。     

不明原因发热病人血清中2型登革病毒特异性抗体的检测

目的：了解贵州省夏秋季不明原因发热病人中2型登革病毒的感染情况。方法：收集贵州省不同地区2002和2003年夏秋季不明原因发热病人血清364份，用间接酶联免疫吸附测定（ELISA）检测抗2型登革病毒特异性IgM，IgG类抗体。结果：病人血清抗2型登革病毒特异性IgG类抗体平均阳性率为12．6％，特异性IgM类抗体平均阳性率为18．4％，特异性IgG，IgM类抗体均阳性为4．7％。42份病人双份血清中，抗2型登革病毒特异性IgG类抗体效价增高4倍或以上为13份（31％）；结论：贵州省夏秋季发热病人部分为2型登革病毒感染。     

贵州自然界白纹伊蚊体内登划病毒带毒情况

目的 :利用细胞、分子生物学技术对贵州省自然界白纹伊蚊体内带登革病毒 (DEN)情况进行调查。方法 :采集贵州省9个地 (州 )市共计 18个县 (区 )白纹伊蚊幼虫标本 ,饲养为成蚊 ;制备蚊悬液 ,碘化钠法提取RNA ,用登革病毒NS1基因区通用引物经逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测DEN核酸 ,限制性内切酶酶切鉴定阳性PCR产物并分型 ;蚊悬液接种C6 /36细胞进行病毒分离 ,制作细胞片 ,间接免疫荧光法检测DEN抗原。结果 :从独山县麻尾镇白纹伊蚊标本中分离到 1株DEN 2型病毒 ,从凯里、黄果树和镇远 3处地方株白纹伊蚊体内检测出DEN核酸 ,用抗DEN 4型单克隆抗体经间接免疫荧光(IFA)和RT PCR产物酶切分型鉴定分别为登革病毒 2型、4型。结论 :贵州省存在DEN感染的自然循环     

白纹伊蚊垂直传播登革病毒后E基因区部分序列的变化

目的：通过对登革病毒经垂直传播后亲代和子一代蚊体内病毒基因序列的分析，了解登革病毒在流行过程中的变异性。方法：用登革2型病毒(DEN-2)NGC株感染白纹伊蚊贵州兴义株，提取亲代及子一代蚊体内病毒总RNA，通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增蚊体内DEN-2病毒核酸，对阳性聚合酶链反应(PCR)产物进行序列测定和比较。结果：用DEN-2 NGC株感染白纹伊蚊贵州兴义株后，子一代蚊体内扩增的DEN-2 E基因区序列与亲代蚊体内扩增的序列比较，出现3个位点的突变，分别位于第174，215，336位点；亲代蚊体内扩增的DEN-2 E基因区部分序列与DEN-2 NGC株E基因区序列相同。结论：DEN-2在垂直传播后出现病毒E基因区的点突变。     

贵州自然界白纹伊蚊体内登革病毒带毒情况

目的：利用细胞、分子生物学技术对贵州省自然界白纹伊蚊体内登革病毒(DEN)带毒情况进行调查。方法：采集贵州省9个地(州)市共计18个县(区)白纹伊蚊幼虫标本，饲养成蚊；制备蚊悬液，碘化钠法提取RNA，用DENNSl基因区通用引物经逆转录-聚合酶链反应(TR-PCR)检测DEN核酸，限制性内切酶酶切鉴定阳性PCR产物并分型；蚊悬液接种C6／36细胞进行病毒分离，制作细胞片，间接免疫荧光法检测DEN抗原。结果：从独山县麻尾镇白纹伊蚊标本中分离到1株DEN-2型病毒，从凯里、黄果树和镇远3处地方株白纹伊蚊体内检测出DEN核酸，用抗DEN1～4型单克隆抗体经间接免疫荧光(IFA)和RT-PCR产物酶切分型鉴定，分别为登革病毒2型、4型。结论：贵州省存在DEN感染的自然循环。     

贵州自然界白纹伊蚊体内登革病毒带毒情况

目的 利用细胞、分子生物学技术对贵州省自然界白纹伊蚊体内DEN带毒情况进行调查。方法 采集贵州省9个地(州)市共计18个县(区)白纹伊蚊幼虫标本，饲养为成蚊；制备蚊悬液，碘化钠法提取RNA，用登革病毒(DEN)NS1基因区通用引物经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测DEN核酸，限制性内切酶酶切鉴定阳性PCR产物并分型；蚊悬液接种C6/36细胞进行病毒分离，制作细胞片，间接免疫荧光法检测DEN抗原。结果 从独山县麻尾镇白纹伊蚊标本中分离到1株DEN-2型病毒，从凯里、黄果树和镇远3处地方株白纹伊蚊体内检测出DEN核酸，用抗DEN1～4型单克隆抗体经间接免疫荧光(IFA)和RT-PCR产物酶切分型鉴定分别为登革病毒2型、4型。结论 贵州省存在DEN感染的自然循环。