骨髓转移癌细胞形态学分析的临床应用价值

目的 分析骨髓转移癌骨髓细胞形态学特点及其临床应用价值.方法 对骨髓转移癌患者进行常规髂前或髂后上棘抽取骨髓液涂片,同时制备血涂片,瑞氏-姬姆沙复合染色后显微镜检查及分析.同时进行血常规、血沉检查.结果 患者RBC为2.2±1.1×1012 /L、Hb为84±33g/L,明显低于对照组,血沉为49.4±38.5mm/h显著高于对照组.血涂片中幼稚细胞为4.5±3.1个/100个WBC,而对照组未找到幼稚细胞.患者骨髓增生活跃,且找到转移癌细胞.结论 血液学与骨髓细胞形态学分析对骨髓转移癌的临床诊断具有重要意义,对非典型癌细胞应慎重判断,避免漏诊与误诊.     

胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸抑制疟原虫红前期发育

目的 观察胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸（cytidine-phosphate-guanosine oligodeoxynucleotide,CpG ODN）对疟原虫红前期发育的影响。 方法 通过构建约氏疟原虫BY265株18S rRNA外标准品质粒,与小鼠三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）内标准品共同组成TaqMan RT-PCR分析模型。用不同剂量（0.05×10⁵ 、0.1×10⁵、0.5×10⁵、1×10⁵和2×10⁵个）约氏疟原虫唾液腺子孢子感染BALB/c小鼠,42 h后处死小鼠取其肝脏,制备约氏疟原虫cDNA进行TaqMan RT-PCR反应,以小鼠肝脏虫荷指标检验模型的有效性。将12只BALB/c小鼠随机均分为CpG组、CpG对照组和PBS对照组,CpG组和CpG对照组小鼠分别尾静脉注射脱氧寡核苷酸1826（ODN1826）及其对照（ODN1826 control）各30 μg,PBS对照组注射0.01 mol/L PBS溶液 200 μl。24 h后各组每鼠感染100个子孢子,于感染后42 h处死小鼠取肝脏,制备约氏疟原虫cDNA进行TaqMan RT-PCR,定量分析感染疟原虫24 h前CpG ODN预处理小鼠肝脏虫荷的变化。 结果 构建的约氏疟原虫外标准品质粒所插入的BY265株18S rRNA基因与17XNL株18S rRNA基因相似性为98%,它与小鼠GAPDH内标准品共同组成的TaqMan RT-PCR分析模型能够正确反映小鼠肝脏虫荷与唾液腺子孢子感染量的正比关系。感染疟原虫24 h前给予CpG ODN处理,CpG组小鼠肝脏虫荷为CPG对照组的1/5（0.28/1.33）,两者差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 本实验建立的TaqMan RT-PCR分析模型适用于红前期疟原虫（肝脏）虫荷指标的研究。CpG ODN能显著抑制红前期疟原虫的发育。     

蚊期和红内期持续表达绿色荧光蛋白的重组约氏疟原虫

目的 构建蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白（GFP）的约氏疟原虫BY265株。 方法 用SacⅡ酶酶切含有伯氏疟原虫ssu-rrna基因和GFP基因的重组质粒pl0017使之线性化,用电转化的方法将该重组质粒转化入红内期约氏疟原虫BY265株,获BY265-EGFP重组疟原虫,尾静脉注射感染昆明小鼠,24～30 h后用乙胺嘧啶饲喂小鼠5～6 d,鼠尾静脉采血涂片观察原虫感染率。以疟原虫基因组DNA为模板,PCR鉴定转染重组质粒pl0017的约氏疟原虫。斯氏按蚊叮咬感染BY265-EGFP重组疟原虫的小鼠,按蚊血餐后第7天和第16天解剖蚊胃和唾液腺,观察疟原虫能否在蚊体内正常发育。 结果 荧光显微镜观察到呈绿色荧光的红内期各期形态正常的约氏疟原虫。PCR检测结果表明,GFP和ssu-rrna基因已成功整合到约氏疟原虫基因组中。按蚊感染实验证实重组BY265株能在蚊体内正常发育。 结论 构建了蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白的约氏疟原虫。     

向成骨细胞和成脂肪细胞分化的小鼠骨间充质干细胞调节单核细胞来源的破骨细胞发育

为探究分化阶段的骨间充质干细胞对于破骨细胞的影响,将小鼠密质骨来源的间充质干细胞体外诱导分化,研究其对于破骨细胞发育的调控作用。从小鼠密质骨中分离培养得到间充质干细胞,将其进行成骨和成脂肪诱导1周,分别将成骨分化和成脂肪分化的间充质干细胞与CD11b+的单核细胞共同培养,并以抗酒石酸的酸性磷酸酶染色鉴定破骨细胞。结果表明:向成骨分化和成脂肪分化的间充质干细胞均可以调节单核细胞向破骨细胞分化。与未分化的间充质干细胞相比,成骨分化的间充质干细胞促进破骨细胞发育的作用减弱,而成脂肪分化的间充质干细胞促进破骨细胞发育的作用增强。结论:间充质干细胞调节破骨细胞发育的能力在其分化为不同种类细胞后发生相应变化,提示间充质干细胞通过分化为子代细胞而对破骨细胞发育发挥选择性的调节。     

肿瘤标志物联合检测对结直肠癌诊断敏感性的应用价值分析

[目的]探讨联合检测肿瘤标志物（TSGF、CEA、CA199和CA125）辅助诊断结直肠癌的临床应用价值。[方法]收集84例结直肠癌患者术前血清,以52例健康人血清为对照,用电化学发光免疫分析法检测肿瘤标志物TSGF、CEA、CA199和CA125浓度。[结果]TSGF、CEA、CA199和CA125单独检测的结直肠癌诊断敏感性分别为66．67％、66．67％、58．18％和42．86％。其中,2项、3项和4项联合检测的最高敏感性分别为70％、84．2％和91．18％,均显著高于单项的诊断敏感性（P〈0．05）。[结论]TSGF、CEA、CA199、CA125联合检测能有效提高结直肠癌诊断的敏感性,可辅助临床对结直肠癌的诊断的应用价值。     

约氏疟原虫235 ku多基因家族的基因克隆和序列分析

目的 克隆约氏疟原虫不同虫期235ku棒状体蛋白（Plasmodium yoelii yoelii 235 ku rhoptry proteins，Py235）的基因，并对其进行序列测定和分析。方法根据疟原虫棒状体235 ku蛋白的基因序列，设计引物。用Tri—pure与氯仿等试剂提取不同时相点的约氏疟原虫总RNA．逆转录合成cDNA．用PCR的方法扩增Py235基因片段。将获得的预期大小的PCR产物插入PMD18-T克隆载体，转化XLl—Blue感受态细胞，蓝白筛选白色克隆，进行体外扩增．提取质粒，进行酶切鉴定，对含有目的插入片段的克隆进行序列测定。结果 从不同侵入虫期的疟原虫总RNA中成功克隆出292bpPy235基因片段，测序结果与GeneBank报道序列具有很高的相似性。结论 在疟原虫235ku多基因家族，不同侵入虫期疟原虫Py235基因的mRNA转录与表达具有一定的遗传稳定性，但表型也有变异，从而获得侵入不同宿主细胞的功能。     

肾移植受者血清C-反应蛋白动态变化及其临床意义

目的　观察肾移植受者血清C 反应蛋白 (CRP)的动态变化 ,探讨CRP与急性排斥的关系。方法　以透射比浊法检测5 6例肾移植受者术前和术后不同时间血清中CRP浓度并同时检测尿素、肌酐的水平 ,以 5 0例健康献血员作对照。结果　肾移植受者术前CRP水平 (2 4 7± 0 5 8)mg/L与正常人对照组 (1 79± 0 6 6 )mg/L无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而术后 1dCRP明显升高至 (2 2 12± 12 78)mg/L(P <0 0 1) ,并于第 2d达峰值 (36 6 0± 14 5 2 )mg/L ,第 4d开始下降 ,至第 12d恢复至接近术前水平 (6 5 5± 4 2 0 )mg/L ,CRP总体变化趋势与肾功能改善基本一致。发生急性排斥者CRP均有一明显上升过程 ,应用免疫抑制剂冲击治疗后大部分迅速下降。结论　本检测结果提示血清CRP动态变化与急性排斥反应的发生及免疫抑制剂冲击治疗的效果密切相关。     

约氏疟原虫环子孢子蛋白对TNF-α刺激人肝癌细胞株核转录因子活化的抑制作用

目的 观察约氏疟原虫环子孢子蛋白（CSP）对肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激人肝癌细胞株HepG2核转录因子-κB （NF-κB）活化的影响。 方法 以约氏疟原虫BY265株子孢子总RNA为模板,用RT-PCR扩增CSP基因的编码区序列并克隆至pFLAG-CMV8载体,构建重组质粒pFLAG-CMV8-CSP。以兔抗CSP多克隆抗体间接免疫荧光法观察pFLAG-CMV8-CSP能否在HepG2细胞中正确表达,及其在细胞中的分布。实验分为3组,A组（阴性对照组）为转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,B组以100 ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,C组以100 ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8-CSP的HepG2细胞。采用双荧光素酶试验和凝胶迁移试验（EMSA）检测NF-κB 的核转位及其活化,观察pFLAG-CMV8?鄄CSP对于TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB是否具有抑制作用。 结果 　质粒pFLAG-CMV8-CSP主要在HepG2细胞胞浆中表达。 检测HepG2细胞浆中NF-κB活性,C组萤火虫荧光素酶活性与海肾荧光素酶活性比值为0.228±0.029,明显低于B组（0.571±0.030）和A组（0.438±0.085）（P＜0.05）。EMSA结果显示,C组的条带明显弱于B组。　结论 位于细胞浆中的疟原虫CSP蛋白通过抑制NF-κB核转位, 从而抑制TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB。     

夹层杯集菌离心涂片法初筛肺结核患者的临床应用价值

目的探讨夹层杯集菌离心涂片法检测抗酸杆菌提高门诊肺结核患者诊断准确率的临床应用价值。方法对1 762例门诊疑似肺结核患者的痰标本同时进行直接涂片法、浓缩集菌涂片法和夹层杯集菌离心涂片法检测抗酸杆菌,比较3种方法对即时痰的阳性检出率;对145例确诊肺结核住院患者的痰标本同时进行浓缩集菌涂片法和夹层杯集菌离心涂片法检测抗酸杆菌,比较2种方法对清晨痰的阳性检出率。结果夹层杯集菌离心涂片法检测门诊即时痰标本抗酸杆菌阳性检出率为15.6%,明显高于浓缩集菌涂片法（9.2%）和直接涂片法（5.9%）（P〈0.05）;同时夹层杯集菌离心涂片法在检测确诊肺结核住院患者的清晨痰标本阳性检出率显著高于浓缩集菌涂片法（P〈0.05）。结论夹层杯集菌离心涂片法检测抗酸杆菌能够有效地提高门诊患者的确诊率,减少肺结核病的漏诊率,为临床医生的诊断治疗提供了重要参考依据。     

大劣按蚊感染约氏疟原虫defensins基因的克隆及生物信息学分析

目的为探讨大劣按蚊对约氏疟原虫侵入的免疫反应,克隆大劣按蚊的抗菌肽defensins基因并对基因序列进行生物信息学分析。方法分别提取感染疟原虫的大劣按蚊的蚊胃总RNA,根据冈比亚按蚊defensins基因设计、合成简并引物,进行RT-PCR扩增目的片段,TA克隆后测序并进行序列分析。结果用简并引物的RT-PCR扩增出约氏疟原虫感染的大劣按蚊的189bp目的片段,序列分析表明与冈比亚按蚊defensins有87%同源性,与白蚊伊蚊defensinsD有88%同源性,为大劣按蚊的defensins基因。结论成功克隆并分析了大劣按蚊抗菌肽defensins基因,为进一步的重组表达和研究按蚊抗菌肽的生物活性奠定基础。