神经再生素促大鼠海马神经元生长的研究

目的 研究牛膝提取物神经再生素(NRF)对体外培养的大鼠海马神经元生长的促进作用及其对生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响.方法 以体外原代培养的胎鼠海马神经元为研究模型,通过相差显微镜采用Scion软件测量不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1mg/L)、不同作用时间(6h、12h、24h)对海马神经元神经突起生长的影响;通过实时荧光定量PER观察NRF不同浓度(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)及不同作用时间(6h、12h、24h)对海马神经元GAP-43基因表达的影响;采用免疫荧光细胞化学法和Western blotting,观察不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h后,对海马神经元GAP-43表达的影响.结果 NRF可有效地促进海马神经元的生长,加药后24h作用浓度为1mg/L时,作用最强;实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光细胞化学法和Western blotting的结果提示,NRF能增加体外培养的海马神经元GAP-43的表达,浓度为1.0mg/L时,作用最佳.结论 NRF能促进体外培养的海马神经元神经突起的生长和GAP-43基因的表达,表明NRF对海马神经元具有神经营养作用.     

碱性磷酸酶测定对良恶性胸水鉴别诊断的价值

本文测定了59例良恶性胸水中碱性磷酸酶(ALP)活性,并与癌胚抗原(CEA)进行同步对照,结果显示:恶性胸水中ALP活性高于良性胸水,两者差异有极显著意义(P<0.01),胸水ALP活性明显升高可强烈提示恶性胸水的诊断,具有较高特异性。胸水中ALP和CEA的升高呈非同步性,提示同时检测ALP和CEA具有互补诊断价值。     

海马神经元谷氨酸损伤研究

目的:本研究通过观察体外培养的大鼠胚胎海马神经元在谷氨酸损伤后,细胞活力变化及细胞损伤的方式,初步探讨谷氨酸对神经元的损伤机制。方法:通过MTT,观察不同浓度(62.5μM、125μM、250μM、500μM)的谷氨酸损伤后不同时间(6 h、12 h、18 h、24 h)海马神经元活力的变化。经相差显微镜观察谷氨酸对海马神经元胞体及突起的影响。通过TUNEL、Hoechst染色比较正常培养组和损伤组的凋亡率,分析谷氨酸对海马神经元的损伤作用。结果:MTT结果显示,谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,在所观察的剂量范围内,随着谷氨酸浓度的增加,作用逐步增强,至500μM达峰值,随着损伤后孵育时间的延长,海马神经元活力逐渐下降。TUNEL和Hoechst染色结果也显示,125μM谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,主要引起海马神经元的凋亡。结论:谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,且这种作用呈现剂量相关性。中等剂量(125μM)谷氨酸损伤主要引起海马神经元的凋亡。     

壳聚糖对背根神经节细胞的促黏附作用

目的 探讨壳聚糖对背根神经节(DRG)细胞生长的影响.方法 用多聚赖氨酸与壳聚糖做DRG细胞培养涂料,观察在两种条件下DRG的生长情况;并以实时定量PCR检测两组细胞A4galT基因的表达量.结果 壳聚糖对DRG细胞有促黏附作用,可引起DRG细胞A4galT基因表达上调.结论 壳聚糖对DRG细胞生长具有良好的生物相溶性,可以用作实验室良好而且廉价的培养皿涂料.     

神经再生素促海马神经元生长的基因芯片研究

目的:探索中药“神经再生素”对海马神经元生长的作用及生物学机制。方法:采用海马神经元培养及基因芯片技术,中药组加入神经再生素1μg/ ml ,对照组加入等量基础培养液。培养6 h后,观察海马神经元突起长度,并提取2组的神经元总RNA,经反转录分别用荧光标记成cDNA探针,与大鼠全基因组芯片杂交,芯片扫描,后行GCOS软件处理。结果:中药组细胞突起长度(18μm)明显长于对照组(12μm)(P<0 .01)。在基因芯片15866条基因中,248条基因上调,316条基因下调,这些基因有细胞组份、生物过程生长代谢调控因子、信号转导分子、凋亡调控因子、免疫蛋白、酶等。结论:中药“神经再生素”可促海马神经元生长。差异表达的基因为寻找药物作用的基因靶点提供了基础。     

中药神经再生素在基因水平对神经元生长的影响

目的 观察神经再生素(NRF)影响海马神经元生长的机制.方法 用胚胎17d的大鼠海马离体培养神经原,分用药组和对照组,培养6h加NRF(1μg/ml),检测神经元突起长度,提取细胞的总RNA并纯化,设计合成G蛋白偶联受体(GPCR)基因的引物,采用Taqman荧光探针,实时定量PCR,检测离体培养海马神经元用药组和对照组细胞GPCR基因表达量的变化.结果 用药组的神经元突起生长较长,GPCR的基因表达量显著高于对照组(P＜0.01).结论 NRF使海马神经元生长并增加GPCR基因的表达,GPCR可引起神经细胞生长的生物效应.     

背根神经节来源的雪旺细胞的离体培养

目的:优化小鼠雪旺细胞(SCs)的离体培养方法。方法:取新生小鼠的背根神经节,采用酶消化分散法,加入不同的培养液,第1组(NB组)用NB(neuronbasal medium),第2组(FBS组)用含10%FBS的DMEM,继用O4、S-100免疫荧光法染色鉴定SCs阳性细胞,并镜下计数,计算SCs纯度。结果:NB组SCs纯度于第1周为90%,第2周为86.6%;FBS组相应SCs纯度都低于30%。结论:无血清的NB培养液更有利于SCs的增殖和生长。