猪水疱病重组蛋白P1的豚鼠免疫试验

目的：研究重组猪水疱病病毒（SVDV）P1蛋白的免疫活性。方法：将自制的猪水疱病抗原经佐剂乳化免疫豚鼠，并应用T淋巴细胞增殖试验、阻断ELISA及微量细胞中和试验检测了所制备的免疫原免疫豚鼠后在体液免疫和细胞免疫方面进行了全面的评价。结果：前期制备的抗原免疫豚鼠后具有良好的免疫原性。结论：对该亚单位疫苗可做进一步的开发应用。     

羊传染性脓疱病毒抗干扰素基因(VIR)研究进展

羊传染性脓疱病毒(ORFV)是痘病毒科副痘病毒属的成员之一,引起严重的人兽共患传染病。该病毒基因组全长约134~139 kb,编码130多个蛋白,抗干扰素基因是ORFV编码的具有拮抗宿主干扰素功能的蛋白,在ORFV突破宿主免疫屏障过程中有重要作用。本文就抗干扰素基因的研究进展作一综述。     

山羊流产嗜衣原体广东株的鉴定及分子特征分析

目的 确诊疑似羊衣原体感染的病例,分析羊衣原体分子特征。方法 从广东某羊场采集疑似羊流产嗜衣原体病例的子宫内羊水,采用现场病理解剖观察、病料触片吉姆萨染色、显微镜观察、特异性目的基因ompA扩增和序列测定及遗传进化关系分析等方法进行了该病例的确诊及病原分子特征分析。结果 现场解剖发现和羊流产嗜衣原体感染症状极其吻合,吉姆萨染色后显微镜观察可见衣原体特有的特征,自病料中扩增出特异性目的基因片段,表明该病例为山羊感染流产嗜衣原体引起。基因序列遗传进化分析表明该流产嗜衣原体(GenBank登录号KP984478)与2013年公布的中国贵州分离株KF130872遗传关系最近(同源性为99.1%),属于同一进化分支,与2002年公布的德国分离株AJ004873遗传关系最远(同源性为98.2%)。结论 本研究为山羊流产嗜衣原体的最新流行病学动态奠定了基础。     

稳定表达猪瘟病毒E2蛋白细胞系的建立及其生物活性分析

目的:建立一种能稳定表达猪瘟E2蛋白的真核细胞系,并对E2蛋白的生物活性进行分析.方法:从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT-PCR得到了CSFV C-株结构蛋白基因E2,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro.经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒.将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆.通过细胞传代并结合PCR、免疫荧光及ELISA方法对表达蛋白的生物活性进行分析.结果:初步检测显示所建立的PK15-E2细胞能稳定携带外源基因进行传代,而且表达的E2蛋白能被CSF阳性血清所识别,并具有良好的生物活性.结论:通过该方法建立的真核表达系统是切实可行的,能为猪瘟的预防和诊断奠定良好的基础.     

DNA作为一种特异性刺激剂刺激淋巴细胞增殖的研究

目的为了探讨质粒DNA体外刺激淋巴细胞的增殖状况,建立了一种方便可靠的评价豚鼠细胞免疫水平的试验方法。方法用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色豚鼠全血,经植物血凝素(PHA)和质粒DNA刺激培养,利用流式细胞术分析细胞的增殖状况。结果豚鼠全血经PHA和DNA刺激,淋巴细胞增殖能力不同;未免疫组经DNA和PHA刺激后增殖的差异显著,免疫组差异不显著。DNA质粒在体内外均可作为刺激源刺激淋巴细胞增殖。结论建立了一种基于活细胞染料CFSE染色的豚鼠全血淋巴细胞增殖试验方法,可方便、快速、有效地评价细胞免疫水平。     

非洲猪瘟病毒蛋白调控Ⅱ型干扰素信号通路的新机制

非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)是一种大型DNA病毒,对家猪具有高度传染性和致病性,死亡率高达100%。然而,ASFV如何抑制JAK-STAT1信号传导以逃避免疫反应仍不清楚。在这项研究中,我们发现ASFV编码的蛋白MGF-505-7R抑制干扰素γ(Interferonγ,IFN-γ)介导的JAK-STAT1信号传导。从机制上讲,发现MGF-505-7R与JAK1和JAK2相互作用并介导二者的降解。进一步研究表明,MGF-505-7R分别通过上调E3泛素连接酶RNF125的表达和抑制Hes5的表达来促进JAK1和JAK2的降解。与野生型ASFV相比,缺失MGF-505-7R的ASFV始终诱导高水平的IRF1表达,并在原代猪肺泡巨噬细胞和猪中表现出复制受损。此外,缺失MGF-505-7R减弱了ASFV的毒力。因此,我们得出结论,敲除MGF-505-7R可作为开发针对ASFV的减毒疫苗的策略。