Tim3在再生障碍性贫血和骨髓增生异常综合征鉴别诊断中的意义

目的：探究T细胞免疫球蛋白黏液素（T cell immunoglobulin and mucin,Tim）3在再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）和骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome,MDS）鉴别诊断中的意义。方法：流式细胞术检测24例AA患者、20例MDS患者和17例健康对照者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）中CD4+Tim1+和CD4+Tim3+细胞比例。实时荧光定量PCR检测AA、MDS患者和健康对照者PBMC中Tim3 mRNA和S型凝集素半乳糖凝集素9（galectin?9,Gal?9）mRNA表达水平。结果：健康对照者、AA和MDS患者PBMC中CD4+Tim1+细胞比例差异无统计学意义;MDS患者的CD4+Tim3+细胞比例明显高于AA患者和健康对照者（P < 0.05）;高危组MDS患者CD4+Tim3+细胞比例明显高于低中危组MDS患者（P < 0.01）和健康对照者（P < 0.05）;健康对照者、AA和MDS患者的Tim3 mRNA和Gal?9 mRNA水平差异无统计学意义。结论：MDS患者Tim3表达水平明显高于AA患者,并与疾病危险度有关,提示Tim3可能参与MDS的发病,并可能成为临床鉴别AA与MDS的标志物。     

汉黄芩素调控Ywhaz蛋白抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移

目的:探讨汉黄芩素对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭能力的影响,并研究汉黄芩素对酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)蛋白水平的影响。方法:体外培养HCT116和HT29细胞系,设空白组、汉黄芩素不同浓度组(浓度分别为5,10,20,40μmol·L-1)作用不同时间后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测汉黄芩素对结肠癌细胞增殖的影响,并用Annexin V-FITC/PI双标后流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡率;穿透小室(Transwell)小室法检测处理24 h后细胞侵袭和迁移力的变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)检测不同浓度汉黄芩素作用24 h后Ywhaz mRNA的水平,并运用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测该蛋白及其磷酸化水平。结果:与空白组比较,汉黄芩素可明显抑制结肠癌细胞系的增殖,具有浓度和时间依赖性,并促进结肠癌细胞系的凋亡率,其中20和40μmol·L-1的汉黄芩素抑制细胞增殖作用显著(P0.01),且不同浓度的汉黄芩素(10,20,40μmol·L-1)作用于结肠癌细胞后,明显降低肿瘤细胞的穿膜数(P0.05,P0.01),汉黄芩素可下调Ywhaz mRNA水平和蛋白水平的表达,并降低Ywhaz的磷酸化水平(P0.05,P0.01)。结论:汉黄芩素可显著抑制HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与下调Ywhaz的蛋白水平及其蛋白的磷酸化水平有关。     

Laptm53′UTR对小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞增殖与凋亡的影响

目的:通过建立稳定过表达溶酶体相关穿膜蛋白5(lysosomal associated protein transmembrane 5,Laptm5)3'不翻译区(3'UTR)的B细胞淋巴瘤38B9细胞株,探讨Laptm5 3'UTR对小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞株增殖、凋亡的影响.方法:荧光定量PCR及Western blotting检测小鼠B细胞及38B9细胞中Laptm5 miRNA及其蛋白质的表达水平;将小鼠Laptm5 3'UTR及其含有的microRNA结合位点突变的突变型基因片段构建入逆转录病毒表达载体pMSCV-PIG,包装成逆转录病毒,感染小鼠B细胞淋巴瘤细胞38B9,流式细胞术检测逆转录病毒感染率,细胞计数法及流式细胞术观察Laptm53'UTR或其突变型过表达后389B9细胞的增殖、凋亡情况.结果:相比小鼠B细胞,B细胞淋巴瘤细胞中Laptm5的miRNA及蛋白均显著降低(P＜0.01).成功获得稳定过表达Laptm5 3'UTR(突变型)的38B9细胞株.Laptm5 3'UTR细胞株比Laptm5 3'UTR突变型过表达细胞株的增殖能力显著减慢,凋亡率显著增加[(7.87±1.08)％vs(0.45±0.07)％,P＜0.01].结论:小鼠Laptm5 3'UTR具有抑制B细胞淋巴瘤增殖、促进其凋亡的作用,该作用可能与其影响相关microRNA的调控有关.     

Myc可控表达的B细胞淋巴瘤小鼠模型的建立

目的建立Myc可控表达的B细胞淋巴瘤小鼠模型。方法将p53敲除小鼠的骨髓细胞与编码Myc雌激素受体融合蛋白(MycER)病毒包装的细胞混合后注入小鼠皮下。腹腔注射他莫昔芬(TAM),1次/d。结果正常对照组小鼠未出现肿瘤;模型组小鼠持续注射TAM后,肿瘤迅速生长。停止注射TAM后,肿瘤大小迅速减小。3周后,肿瘤恢复生长,但速度较慢;此时若注射TAM,肿瘤生长异常加速。结论本研究通过TAM实现对Myc"失活"及"激活"两种状态的调控,成功建立Myc可控表达的B细胞淋巴瘤小鼠模型。     

长链非编码RNA与弥漫性大B细胞淋巴瘤关系的研究进展

弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)发病机制未明,治疗效果差,发生率与死亡率仍在不断攀升,因此探究DLBCL的发病机制与发现新的分子诊断标记和治疗靶点尤为重要。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是真核细胞中一类转录本长度大于200 bp的RNA,可在转录水平及转录后水平调控其靶基因的表达,并参与多种肿瘤的发生、发展、侵袭及转移等过程。近年来长链非编码RNA在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的作用不断被发现及证实。本文就HULC、PEG10、Linc RNA-p21、HOTAIR、LUNAR1、MALAT1和SubSig Lnc-17等长链非编码RNA与弥漫性大B细胞淋巴瘤的关系做一综述,希望为相关基础研究及临床诊断和治疗提供新思路。     

红细胞抗氧化机制的研究进展

氧化应激(oxidative stress)是指机体在遭受各种有害刺激时,体内高活性分子如活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)和活性氮自由基(reactive nitrogen species,RNS)产生过多,从而导致的细胞和组织损伤。红细胞的携氧功能使其不断暴露于内源性和外源性ROS所引起的氧化损伤中,因此红细胞建立了强大的抗氧化及损伤修复系统来及时清除ROS并保护细胞免受过氧化损伤。本文将重点介绍红细胞抗氧化机制方面的研究进展,以期为减轻红细胞的氧化损伤提供更多思路。     

应用体外器官培养研究人鼻咽癌不同克隆细胞株的侵袭特性

应用体外器官培养研究人鼻咽癌不同克隆细胞株的侵袭特性郁多男，高进（中国医学科学院中国协和医科大学北京基础医学研究所，北京１００００５）研究肿瘤细胞体外侵袭能力的方法很多，如利用单层内皮细胞［１］、人类羊膜［２，３］、小鼠膀胱［４］、眼晶状体囊［５］以...     

长链非编码RNA PCAT-1对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究

目的 研究长链非编码RNA前列腺癌相关转录本1(lncRNA PCAT-1)对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 qRT-PCR检测lncRNA PCAT-1在胰腺癌细胞系Capan-1、Capan-2、PANC-1、SW1990和正常胰腺细胞hTERT-HPNE中的表达水平.lncRNA PCAT-1表达最高的胰腺癌细胞系分为sh-NC组和sh-PCAT-1组,进行NC干扰慢病毒(shRNA)和PCAT-1 shRNA感染,qRT-PCR检测各组细胞中lncRNA PCAT-1的表达水平.3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓(MTS)实验检测沉默lncRNA PCAT-1的表达对细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测沉默lncRNA PCAT-1的表达对细胞周期和凋亡的影响;皮下移植瘤实验检测沉默lncRNA PCAT-1的表达对胰腺癌细胞体内生长能力的影响;Western blot检测lncRNA PCAT-1对细胞周期相关蛋白、凋亡相关蛋白和PI3 K/AKT信号通路关键蛋白的表达影响.结果 qRT-PCR检测结果显示lncRNA PCAT-1在胰腺癌细胞系的表达水平高于在正常胰腺细胞hTERT-HPNE中的表达(P＜0.05),与Capan-1、Capan-2和SW1990细胞相比,PANC-1细胞中lncRNA PCAT-1的表达最高.PANC-1细胞感染PCAT-1 shRNA,qRT-PCR结果显示,与sh-NC组相比,sh-PCAT-1组细胞中lncRNA PCAT-1的表达降低(P＜0.05);沉默lncRNA PCAT-1的表达后,PANC-1细胞的增殖能力降低,细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加,细胞体内裸鼠成瘤能力降低,细胞周期蛋白cyclinD1和CDK6蛋白的表达减少,抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白减少,促凋亡蛋白Bax蛋白表达增加,PI3 K/AKT信号通路关键蛋白pPI3K和pPAKT蛋白表达减少.结论 沉默lncRNA PCAT-1的表达可能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制胰腺癌细胞增殖和促进细胞凋亡.lncRNA PCAT-1可能是治疗胰腺癌的新型靶标.     

microRNA在造血系统发育中的功能研究进展

近几年microRNA（miRNA）已经成为生物医学最热门的话题之一。它是一类自然存在的非编码RNA小分子,约由18～25个核苷酸组成,通过碱基互补绑定目的RNA包括mRNA和其他非编码RNA调节基因的表达。造血是由多种机制调控的复杂过程,miRNAs通过调节多种基因的表达参与造血干细胞的定向分化与造血细胞的发育,包括红细胞的发育过程。     

长链非编码RNAuc.339在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的：分析uc.339在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法：非小细胞肺癌新鲜标本及其癌旁肺组织各30例,提取总RNA,采用实时定量PCR方法检测uc.339在非小细胞肺癌组织及其癌旁肺组织中的表达,分析差异性及其与临床病理特征的关系。癌性胸腔积液及非癌性胸腔积液各20例,离心沉淀,提取总RNA,采用实时定量PCR方法检测uc.339在癌性胸腔积液及非癌性胸腔积液中的表达;免疫组织化学检测P53在非小细胞肺癌中的表达。结果：uc.339在非小细胞肺癌组织中的表达低于癌旁肺组织(P<0.05),与临床分期有相关性(P<0.05),与p53的表达呈负相关(P<0.05),而与肿瘤病理类型、年龄、性别无明显相关性(P>0.05);uc.339在癌性胸腔积液中的表达低于非癌性胸腔积液(P<0.05)。结论：uc.339可能作为一种抑癌因子作用于非小细胞肺癌的发生、发展中,其作用机制可能与p53信号通路有关,在作为肿瘤标志物、判断预后及靶向治疗等方面具有应用价值。