延胡索纤溶酶的分离纯化及部分性质

目的从延胡索(Rhizoma corydalis)中分离纯化具有溶解纤维蛋白活性的单体蛋白单一组分,并对粗酶性质做初步研究。方法利用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换色谱从延胡索中纯化纤溶酶。结果从延胡索中纯化出两种纤溶酶,表观相对分子质量分别为33 000和59 000。粗酶用丝氨酸蛋白酶抑制剂鉴定为丝氨酸蛋白酶,ED-TA对酶活没有抑制作用。延胡索纤溶酶粗酶体外溶纤性质主要表现为激酶活性,在4~50℃活性稳定,50~75℃酶活有所下降;最适pH值为8.0,在pH 3.0左右,仍能保留大部分酶活;能抵抗胰蛋白酶水解和胃蛋白酶的作用。结论延胡索纤溶酶性质稳定,有希望研发成为一种溶栓新药。     

一种体内溶栓活性优于总蚯蚓纤溶酶的组分

目的筛选高效低毒的蚯蚓纤溶酶单一组分。方法通过亲和色谱从赤子爱胜蚓获得含多组分的总蚯蚓纤溶酶(EFE)，经离子交换分离得到3个主要溶栓组分EfP-0-2，EfP-I-1和EfP-I-2，与EFE比较体内外溶栓效果和毒副作用。结果与其他组分比较，EfP-I-1的体外溶栓作用较强；当静脉注射4.5 mg·kg^-1时，各组分对纤维蛋白原的影响均不明显，只有EfP-I-1能显著溶解动静脉旁路血栓；当静脉注射达6 mg·kg^-1时，只有该组分对延长出血时间的影响不明显；急性毒性实验表明，该组分的LD₅₀是EFE的2.17倍。结论EfP-I-1有较高的体内外溶栓活性和较低的毒副作用。由于该组分在总EFE中所占比例较高，并易于分离纯化，故适于作为单一组分的溶栓药物进行开发。     

纤维蛋白酶谱检测蚯蚓纤溶酶组分

 目的建立鉴定蚯蚓纤溶酶粗酶液中活性组分的方法。方法根据蚯蚓纤溶酶能水解纤维蛋白的性质,建立了纤维蛋白-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Fibrin-SDS-PAGE),优化了电泳条件,电泳后酶所在部位为透明区带。结果分离胶中纤维蛋白终质量浓度为0.4×10^-3mg·L^-1,电泳后胶板用2.5% TritonX-100复性30min,PBS缓冲液(pH7.2)保温30min,考马斯亮蓝R-250染色,7%醋酸脱色,可以得到清晰的酶谱。结论该方法灵敏度高,用2μg样品,就能准确检测出粗酶液中所有纤溶酶组分。     

蚯蚓纤溶酶的研究进展及趋势

综述了蚯蚓纤溶酶的理化性质、酶学性质、药效学特性、化学修饰及分子生物学等方面的研究进展 ,提出了蚯蚓纤溶酶研究领域的发展方向。     

牛血块高纯SOD的制备

利用牛血块制备出超氧化物歧化酶（SOD）粗品,比活≥5000u/mg pro。在此基础上,经DEAE离子交换展拆纯化SOD,比活≥10000 u/mg pro。聚丙烯酰胺凝胶电泳和 NBT活性染色证明,该品达电泳纯。     

人La多肽融合蛋白在E.coli中的表达

目的　构建在E .coli中表达人La多肽的质粒。方法以人脾cDNA为模板 ,通过PCR获得La多肽 (全长 )的DNA片段。将此片段利用双酶切定向克隆到MBP(麦芽糖结合蛋白 )融合系统的载体pMALTM c中 ,表达可溶性融合蛋白 ,并通过亲和层析予以纯化。结果免疫印迹实验 (IBT)证明 ,表达的融合蛋白具有La抗原多肽的特异性 ,而敏感性超过生化制备的ENA制品。结论重组融合蛋白与天然ENA制品存在免疫学同一性     

对流免疫电泳的一种改良方法——对流免疫扩散电泳法

对流免疫电泳(C工E)敏感度高,但对于多坑原抗体的系统[如可提取性核抗原(ENA)及其抗体]则特异性较差.经典的免儿双扩散(ID)法特异性高,临床上常用于复杂的抗原抗体系统分析,然而该法的最大缺点是敏感度低,所需时间长.本文介绍CIE.     

胃癌患者人乳头瘤病毒感染状况的检测

人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）属小DNA病毒,与许多部位鳞状上皮细胞良性及恶性肿瘤性病变有关,其中HPV感染与宫颈癌的相关性已得到公认。近年来研究显示,胃癌的发生与幽门螺杆菌和爱泼斯坦巴尔病毒（Epstein—Barr virus,EBV）等生物因素感染有关,     

抗可提取性核抗原Sm和抗RNP单克隆抗体的制备与特性鉴定

可提取性核抗原（ｅｘｔｒａｃｔａｂｌｅｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＥＮＡ）为哺乳动物细胞核的生理盐水抽提物。从广义上讲，包括１０多种核抗原成分，狭义则指Ｓｍ和ＲＮＰ两种，它们是由核内核糖核酸和蛋白质组成的复合物。测定抗ＥＮＡ抗体对系统性红斑狼疮、混...     

视网膜剥离的超声诊断应用分析

目的探讨视网膜剥离超声诊断技术的临床应用价值。方法选择120例患者,其中实验组64例68眼完全剥离,56例64眼部分剥离,对照组因眼部不适行超声检查者,共72例124眼。观察网脱部位的血管分支和视网膜中央动脉,在血流明显处取样测量舒张末期最高血流速度、收缩期最高血流速度、平均血流速度、搏动指数、阻力指数等各项检查数据。结果二维超声检查诊断,实验组120例132眼中108例116眼诊断为视网膜剥离,诊断相符率为87.88%,彩色超声诊断确诊视网膜剥离者112例124眼,诊断相符率达93.94%。实验组CRA、PSV、ESV、AV值显著低于对照组差异有统计学意义(P<0.05)。实验组中完全剥离比部分剥离减小,差异有统计学意义(P<0.05)。比较两组RI、PI值,实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论二维超声结合彩色多普勒检查对视网膜剥离诊断率高,为临床诊断提供更加可靠的依据。