抗HER-2抗体chA21对人乳腺癌SKBR3细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的探讨抗HER-2工程抗体chA21在体外对高表达HER-2的人乳腺癌SKBR3细胞凋亡的诱导作用及其分子机制。方法采用透射电镜和原位末端标记技术(TUNEL)观察和检测chA21对SKBR3细胞凋亡的诱导,采用免疫细胞化学技术检测凋亡相关基因bc l-2、bax、Fas及caspase-3表达的改变。结果chA21作用72 h,可见SKBR3细胞凋亡,chA21高浓度组(5.4mg/L)凋亡指数显著高于低浓度组(0.2 mg/L)(P<0.01);chA21处理组SKBR3细胞的bax、Fas及caspase-3表达增加,而bc l-2表达及bc l-2/bax比值降低,上述改变在chA21高、低两个浓度组间有显著差异(P<0.01)。结论chA21在体外可诱导SK-BR3细胞凋亡,其分子机制与调节凋亡相关基因bax、bc l-2、Fas及caspase-3的表达有关。     

抗HER-2嵌合抗体chA21对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的 探讨抗HER-2嵌合抗体chA21在体外对高表达HER-2的人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡诱导作用及其分子机制。方法 chA21处理体外培养的SKOV3细胞，采用透射电镜和原位末端标记技术观察和检测细胞凋亡情况，采用免疫细胞化学技术检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Fas及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase-3）表达情况。结果 chA21作用72h，可见SKOV3细胞凋亡，其作用呈剂量依赖性；SKOV3细胞Bax、Fas和caspase-3表达升高、Bcl-2表达下调、Bcl-2／Bax降低，并呈剂量依赖性。结论 chA21在体外可诱导SKOV3细胞凋亡，其分子机制与调节凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Fas及caspase-3的表达有关。     

蛇毒C型凝集素类似蛋白Agkisacutacin单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备并鉴定抗蛇毒C型凝聚素类蛋白Agkisacutacin的单克隆抗体(mAb)。方法:以Agkisacutacin蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过常规的细胞融合方法制备抗Agkisacutacin蛋白的mAb。用间接ELISA法检测杂交瘤细胞分泌mAb的稳定性。用荧光染色法做杂交瘤细胞的核型分析。用Western blot检测mAb的特异性。结果:获得3株可稳定分泌抗AgkisacutacinmAb的杂交瘤细胞株。结论:成功制备了抗Agkisacutacin的mAb,为检测Agkisacutacin蛋白作为新型抗血栓药物的体内代谢规律的方法和研究抗血栓的机制提供了重要的工具。     

基因工程抗体联合紫杉醇对BT474细胞的促凋亡作用

目的:探讨抗p185c-erbB-2/neu基因工程抗体联合紫杉醇促进p185过表达的人乳腺癌细胞系BT474凋亡的效应及其机制。方法:采用MTS法检测基因工程抗体联合紫杉醇对BT474细胞增殖的抑制作用。用AnnexinV-FITC/PI法检测BT474细胞的凋亡率;以流式细胞术(FCM)分析DNA含量及细胞周期分布;用EMSA分析NF-κB的活化水平。结果:基因工程抗体联合紫杉醇对BT474细胞增殖的抑制作用具有协同效应,并可诱导细胞凋亡,将细胞阻滞在G1期;并可显著抑制BT474细胞中NF-κB的活化。结论:紫杉醇诱导乳腺癌细胞BT474凋亡的同时,可活化NF-κB。基因工程抗体联合紫杉醇是通过抑制NF-κB的活化而增强紫杉醇诱导癌细胞凋亡的作用。     

p185高表达人卵巢癌裸鼠模型的建立

目的 建立高表达p185的人卵巢癌裸鼠模型。方法 BALB／c裸鼠皮下接种高表达p185的人卵巢癌细胞株SKOV3,观察成瘤情况及移植瘤病理组织学特点,并用SP免疫组织化学法测定移植瘤的p185表达情况。结果 12只裸鼠均荷瘤成功,病理组织学与免疫组化均证实移植瘤保持了原细胞系特征。结论 高表达p185人卵巢癌裸鼠模型的成功建立为抗p185抗体药物的体内药效研究提供了理想的平台。     

310例中国人基因组干扰素α1/α2基因多态性研究

目的 若药品α-干扰素亚型与人体体内基因型不一致,接受抗病毒治疗的患者可被诱导产生更多的抗干扰素中和抗体,导致不应答和治疗失败。通过分析中国人群干扰素α1(IFNA1)和α2(IFNA2)基因多态性,可帮助阐明重组人干扰素α1和α2在中国人群中的遗传背景,为临床用药提供参考。方法 在单核苷酸多态性数据库中分别检索IFNA1基因和IFNA2基因编码区错义突变单核苷酸多态性(SNP)位点,再在千人基因组数据库查询收录的中国人IFNA1和IFNA2等位基因的分布情况,分析两种基因多态性并计算出相关的等位基因频率。结果 在千人基因组数据库共收录310例中国人双倍染色体基因组序列,所有中国人均有IFNA1和IFNA2基因座,其中,IFNA1基因座含有IFNα1、IFNα1(Ala137Val)和IFNα1(Arg148Gln) 三种等位基因,基因频率分别为99.6%、0.2%和0.2%;IFNA2基因座也含有IFNα2b、IFNα2b(Leu140Val)和IFNα2b(Ala120Thr)三种等位基因,基因频率分别为98.4%、0.2%和1.4%。结论 IFNα1和IFNα2b分别是中国人群IFNA1和IFNA2基因座的优势等位基因,在我国批准上市的IFNα1b、IFNα2a和IFNα2b三种亚型α-干扰素中,仅有IFNα2b与中国人基因型一致。     

腺病毒介导的RNA干涉对乳腺癌SKBR3细胞HER2的下调及生长抑制效应

目的:探讨采用腺病毒做为载体介导基于RNA干涉的针对高HER2肿瘤的基因治疗的可能性。方法:构建HER2-绿色荧光蛋白融合蛋白表达质粒pHER2-GFP,并与9种针对HER2不同靶序列的siRNA表达质粒分别共转染CHO-K1细胞,根据荧光蛋白表达量从中筛选出沉默效率最高的质粒。将筛选出的质粒转染HER2高表达乳腺癌SKBR3细胞,检测它们对HER2表达的影响。随后,将siRNA转录单元克隆入腺病毒载体,成功包装病毒后感染SKBR3细胞,再次测定其下调HER2的效应及其对细胞生长的影响。结果:2种有效下调HER2表达的质粒被筛选出来。将此2种质粒所含siRNA转录单元包装入腺病毒后仍然保持了原有的基因沉默效应。HER2下调增加了SKBR3细胞中G1期细胞的比例,并且诱导部分细胞凋亡。MTT和细胞长期增殖抑制实验表明腺病毒介导的RNA干涉抑制了SKBR3细胞生长。结论:重组腺病毒介导的RNA干涉能够下调HER2的表达并且对高表达HER2的乳腺癌细胞有生长抑制作用。     

抗HER-2嵌合抗体chA21对SKOV3细胞增殖的抑制及诱导其凋亡的作用

目的：探讨抗HER-2嵌合抗体chA21在体外抑制高表达HER-2的人卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导其凋亡的作用。方法：采用MTT比色法、HE染色、透射电镜、流式细胞术及TUNEL染色法等观察和检测chA21对人卵巢癌细胞SKOV3增殖抑制和凋亡的诱导作用：结果：chA21（0．2mg／L～5．4mg／L）可显著抑制SKOV3细胞增殖并诱导其凋亡．其作用呈剂量和时间依赖性：结论：chA21在体外可显著抑制SKOV3细胞的增殖，诱导凋亡可能是其主要的作用途径，     

125 I标记的抗p185抗体的体外代谢与体内生物学分布

目的：研究^125Ⅰ标记的抗p185抗体（鼠mAb A21、人鼠嵌合抗体A21 scFv-Fc及单链抗体A21 seFv）在体外的细胞代谢和在体内的生物学分布，为其在诊断和治疗高表达p185肿瘤的临床应用提供依据。方法：通过FACS检测抗体是否与高表达膜表面抗原p185的SKOV，特异结合。采用氯胺T法进行碘标记抗体，用细胞放射免疫分析实验，检测抗体在SKOV、细胞中的代谢。建立荷SKOV，裸鼠模型，以观察抗体的体内生物学分布。结果：体外细胞代谢实验表明，抗体在与细胞膜表面结合后，进而被内吞入细胞，在细胞内降解和脱碘，最后被分泌出细胞外。体内药物代谢实验表明，抗体在动物体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚，而无关抗体未出现放射性浓聚，呈全身分布。结论：mAb A21，A21 seFv-Fc和A21 scFv对于高表达p185的卵巢癌在体内和体外都具有亲和力，可单用作高表挟D185肿瘤的诊断和治疗。     

高灵敏血清HER2蛋白检测方法的建立及临床应用

本研究采用双抗体夹心ELISA法,以前期研制的抗人表皮生长因子受体2 (HER2)单克隆抗体HuA21与生物素标记HerA分别为包被抗体与检测抗体,培养CHO细胞进行转染HER2胞外区(HER2-ECD)基因的表达载体,选择抗性克隆进行培养,并分离、纯化抗原作为标准抗原,建立可定量检测人血清中HER2含量的技术,为肿瘤患者的治疗及预后评估提供参考.建立的ELISA法检测灵敏度为7.8 pg/ml,检测范围为0 ～ 500 pg/ml,其批内变异系数为0.2％～10.9％,批间变异系数为1.4％ ～12.4％,在人血清中的抗原回收率为86.84％ ～ 116.40％.使用本方法检测临床标本,结果显示HER2阳性的转移性乳腺癌患者血清HER2含量明显高于早期乳腺癌患者及健康人的平均水平(P＜0.05).因此本研究成功建立了双抗体夹心ELISA法检测人血清HER2技术,其检测结果特异、稳定、可靠,可定量检测肿瘤患者血清HER2水平.