CD151基因对血管内皮细胞表面整合素α3β1／α6β1表达的影响

目的研究重组腺相关病毒介导的CD151基因转染人脐静脉内皮细胞（HUVECs）对整合素α3β1／α6β1表达的影响。方法包装携带CD151、CD151-QRD和CD151-ARSA的重组腺相关病毒,转染HUVECs细胞,用Western Blot和流式细胞仪检测HUVECs细胞CD151及整合素a3131／a6131的表达。结果CD-51组及其各突变体组的CD151表达均明显高于对照组（P〈0．01）,但3组间互相比较CD151蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。Western Blot及流式细胞仪检测显示CDl51组α3、α6及β1的表达明显高于对照组、CD151-QRD组和CD151-ARSA组（P〈0．05）,其余各组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CD151基因转染能促进整合素α3β1／α6β1的蛋白表达,其机制可能与CD151胞外大环QRD194-196。“及C末端囊泡运输基序YRSL”。。。有关。     

Effects of transfection of ICAP-1α and its mutants on adhesion and migration of 2H-11 cells

This study examined the effect of integrin cytoplasmic domain-associated protein 1α (ICAP-1α) and its mutatants T38A and I138A on the adhesion, migration and tube formation of 2H-11 cells.rAAV-ICAP-1α, rAAV-T38A and rAAV-I138A were constructed.After infection, the expression of ICAP-1α and p-ERK1/2, p-c-Jun protein was measured by Western blotting.Adhesion ability was evaluated by using MTT.Cell migration was determined by using Boyden chamber method.Tube formation test was conducted on Matrigel.The results showed that in ICAP-1α, T38A and I138A groups, ICAP-1α protein expression was increased.In T38A and I138A groups, phospho-ERK1/2, phospho-c-Jun protein expressions were significantly increased as compared with the control group and the GFP group.ICAP-1α group protein expression was obviously decreased when compared with the control group and the GFP group.Cell adhesion ratio was 0.1429±0.0080 in control group, 0.1434±0.0077 in GFP group and the ratio in T38A and I138A groups increased to 0.3210±0.0082 and 0.3250±0.0079, respectively.In ICAP-1α group, the ratio was decreased to 0.1005±0.0073.In T38A and I138A groups, the number of migrating 2H-11 cells was increased to 31.45±3.20 and 33.10±5.40 against 18.51±2.80 in control group and 20.47±3.12 in GFP group.In ICAP-1α group, the number was decreased to 12.06±1.72.The number of tube-like structures was increased to 20.41±2.54 in T38A and to 22.26±3.07 in I138A groups as compared to those of control group 12.45±1.84 and GFP group 13.63±2.71.In ICAP-1α group, the number of tube-like structures was decreased to 8.32±1.24.It was suggested that rAAV-T38A and rAAV-I138A transfection can substantially increase 2H-11 cell adhesion, migration and angiogenisis, while rAAV-ICAP-1α can greatly inhibit the effect.These effects might be correlated with ERK1/2 and c-Jun protein phosphorylation.     

ICAP1α及突变体T38A、I138A在内皮细胞ECV304整合素β1内化中的作用

目的:探讨ICAP1α及突变体T38A、I138A在内皮细胞ECV304内化整合素β1中的作用和机制。方法:构建pAAV-ICAP1α及其突变体pAAV-T38A和pAAV-I138A真核表达载体,转染ECV304。ECV304分为ICAP1α组、T38A组、I138A组、绿色荧光蛋白(GFP)组和未转染组,用NHS-SS-Biotin标记整合素β1,并利用生物素-亲和素系统以及Westernblot检测整合素β1内化情况。结果:各组细胞转染的质粒均稳定表达;Westernblot检测ICAP1α组、T38A组、I138A组、GFP组、未转染组内化的整合素β1相对光密度值分别为1.07±0.04、0.68±0.06、0.70±0.02、0.87±0.06、0.88±0.04;与GFP组和未转染组比较,ICAP1α组整合素β1内化明显增多(P<0.05);与GFP组、未转染组和ICAP1α组比较,T38A组和I138A组整合素β1内化明显减少(P<0.05),GFP组与未转染组无差别(P>0.05)。结论:转染ICAP1α后内皮细胞ECV304表面整合素β1内化增加,而转染T38A和I138A后内皮细胞ECV304表面整合素β1内化减少;ICAP1α可能通过第38位的苏氨酸残基(38Tyr)和第138位的异亮氨酸残基(138Ile)调控整合素β1的内化。     

CD151基因对前列腺癌细胞增殖、转移的促进作用及其机制

目的研究人前列腺癌细胞株PC3细胞转染CD151基因后其增殖和迁移能力的变化及机制。方法用FuGENE HD分别将质粒pAAV-CD151(CD151组)、pAAV-GFP(GFP组)转染入PC3细胞,并设加入等体积PBS的对照组。48 h后采用Western blot检测CD151蛋白、磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)和总ERK的表达。采用MTT法检测CD151基因对PC3细胞增殖的影响,采用Boyden趋化小室研究CD151基因对PC3细胞迁移的影响。结果与对照组和GFP组相比,CD151组的CD151蛋白表达水平明显增加(均P<0.05);磷酸化ERK的表达量亦明显高于其它两组;细胞增殖能力比对照组和GFP组明显增高[相对吸光度值分别为:(0.245 7±0.006 4)vs(0.175 2±0.007 4)、(0.179 0±0.008 4)];细胞迁移数(107.8±9.6)亦显著高于对照组和GFP组[(53.0±7.6)和(57.0±5.2),P<0.05]。结论 CD151在前列腺癌细胞的增殖、转移中起着重要作用,是肿瘤转移的重要分子基础,其分子机制可能是CD151对ERK信号通路的激活。     

武汉市某医院老年慢性阻塞性肺疾病住院患者发生衰弱现状及影响因素分析

目的 调查老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)住院患者发生衰弱现状,并分析其影响因素。方法 采用便利抽样法选取2021年1月至2022年12月华润武钢总医院住院的260例老年COPD住院患者为研究对象。采用自制一般资料问卷对患者开展调查,使用临床衰弱量表对患者的衰弱状况进行评估,检测血红蛋白、25-羟基维生素D(25-OH-D)、白细胞介素-6(IL-6)水平,采用单因素及多因素logistic回归分析老年COPD住院患者发生衰弱的影响因素。采用SPSS 25.0软件进行数据分析。根据数据类型,组间比较分别采用t检验及χ²检验。结果 本研究共发出调查问券260份,收回260份(100.00%),其中发生衰弱患者67例(25.77%)。性别、年龄、吸烟、锻炼习惯、营养状态、疾病严重程度和肺功能是老年COPD住院患者发生衰弱的影响因素(P<0.05);衰弱组患者的血红蛋白、25-OH-D水平显著低于未衰弱组,IL-6水平显著高于为衰弱组,差异有统计学意义(P＜0.05);根据logistic回归分析得知性别、年龄、吸烟、锻炼习惯、营养状态、疾病严重程度、肺功能、血红蛋白低表达、25-OH-D低表达、IL-6高表达是老年COPD住院患者发生衰弱的危险因素(OR＝3.174,1.556,3.162,1.735,2.649,5.089,2.162,1.314,1.974,2.173;P＜0.05)。结论 武汉市某医院老年COPD住院患者衰弱的发生率较高,性别、年龄、吸烟、锻炼习惯、营养状态、疾病严重程度、肺功能、血红蛋白、25-OH-D、IL-6水平均有影响,临床上应进行合理的干预,从而减少衰弱的发生。     

ICAP1α基因及其突变体T38A、I138A真核表达载体的构建和鉴定

目的:整合素β1-ICAP1α复合体在细胞黏附等过程中介导双向跨膜信号转导,并与囊泡特异性标记物共定位.文中构建并鉴定ICAP1α基因及其突变体T38A、I138A真核表达载体. 方法:以pCMV-SPORT6/ICAP1α质粒为模板,PCR扩增ICAP1α基因片段,双酶切后与AAV载体重组连接.同时采用重叠PCR定点突变法构建其突变体pAAV-T38A、pAAV-I138A表达载体.重组质粒经酶切鉴定和DNA 序列测定, 筛选出重组pAAV-ICAP1α、pAAV-T38A和pAAV-I138A真核表达载体. 结果:阳性重组质粒酶切后测序比对鉴定,与预期序列完全相符.结论:成功构建pAAV-ICAP1α、pAAV-T38A和pAAV-I138A真核表达载体,可为ICAP1α基因及其突变体T38A、I138A的生物学功能研究提供基因材料.     

ICAP1a及突变体T38A、1138A在内皮细胞ECV304整合素β1内化中的作用

目的:探讨ICAP1α及突变体T38A、I138A在内皮细胞ECV304内化整合素β1中的作用和机制.方法:构建pAAV-ICAP1α及其突变体pAAV-T38A和pAAV-I138A真核表达载体,转染ECV304.ECV304分为ICAP1α组、T38A组、I138A组、绿色荧光蛋白(GFP)组和未转染组,用NHS-SS-Biotin标记整合素β1,并利用生物素-亲和素系统以及Western blot检测整合素β1内化情况.结果:各组细胞转染的质粒均稳定表达;Western blot检测ICAP1α组,T38A组、I138A组、GFP组、未转染组内化的整合素β1相对光密度值分别为1.07±0.04、0.68±0.06、0.70±0.02、0.87±0.06、0.88±0.04;与GFP组和未转染组比较,ICAP1α组整合素β1内化明显增多(P<0.05);与GFP组、未转染组和ICAP1α组比较,T38A组和I138A组整合素β1内化明显减少(P<0.05),GFP组与未转染组无差别(P＞0.05).结论:转染ICAP1α后内皮细胞ECV304表面整合素β1内化增加,而转染T38A和I138A后内皮细胞ECV304表面整合素β1内化减少;ICAP1α可能通过第38位的苏氨酸残基(38Tyr)和第138位的异亮氨酸残基(138Ile)调控整合素β1的内化.     

突变型pAAV-CD151真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建CD151两种突变体,为研究CD151的功能及CD151-整合素复合体的功能奠定基础.方法 以pAAV-CD151质粒为模板,采用定点突变技术,构建整合素α3β1/α6β1结合缺陷QRD突变体(pAAV-CD151-QRD-AAA~(194-196)突变体)和CD151囊泡运输基序缺陷的ARSA突变体(pAAV-CD151-YRSL-ARSA~(245-248)突变体),并包装两种突变体的重组腺相关病毒.结果 经过测序鉴定成功构建了CD151的QRD和ARSA突变体,亦成功包装了重组腺相关病毒,病毒滴度符合本实验要求.结论 成功构建CD151两种突变体并包装成重组腺相关病毒,为进一步研究CD151的功能和作用机制奠定了基础.     

武汉市某医院老年慢性阻塞性肺疾病住院患者发生衰弱现状及其影响因素分析

摘要：目的 调查武汉市某医院老年慢性阻塞性肺疾病（COPD）住院患者发生衰弱现状，并分析其影响因素。方法 采用便利抽样法选取2021年1月-2022年12月我院住院的260例老年COPD住院患者。采用自制一般资料问卷对患者开展调查；使用临床衰弱量表（Fried）对患者的衰弱状况进行评估；采用全自动血液分析仪对血红蛋白的水平进行检测；采用化学发光免疫法对25-羟基维生素D（25-OH-D）的水平进行检测；采用噶庖呶椒ǘ园紫赴樗�-6（IL-6）的水平进行检测；单因素及多因素Logistic回归分析影响老年COPD住院患者发生衰弱的因素。结果 本研究对武汉市某医院老年COPD住院患者一共发出260份调查问券，收回260份，有效率为100.00%。260例患者中，发生衰弱的有67例，发生率为25.77%（67/260）；其中性别、年龄、吸烟、锻炼习惯、营养状态比较均有统计学意义（P<0.05）；衰弱组患者的血红蛋白、25-OH-D水平显著低于未衰弱组，IL-6水平显著高于为衰弱组（P＜0.05）；根据Logistic回归分析得知性别（OR=3.174，95%CI：1.415-7.117）、年龄（OR=1.556，95%CI：1.049-2.307）、吸烟（OR=3.162，95%CI：1.337-7.476）、锻炼习惯（OR=1.735，95%CI：1.103-2.729）、血红蛋白低表达（OR=1.314，95%CI：1.014-1.701）、25-OH-D低表达（OR=1.974，95%CI：1.073-3.631）、IL-6高表达（OR=2.173，95%CI：1.198-3.943）是老年COPD住院患者发生衰弱的危险因素（P＜0.05）。结论 武汉市某医院老年COPD住院患者发生衰弱的发生率较高，性别、年龄、吸烟、锻炼习惯、营养状态、血红蛋白、25-OH-D、IL-6水平均有影响，临床上应进行合理的干预，从而减少衰弱的发生。     

银杏内酯对小鼠急性肝坏死的保护作用

血小板活化因子 (ＰＡＦ)是炎性反应及细胞间相互作用的关键性脂质介质。我们发现ＰＡＦ在急性肝损害中有重要的介导作用[1] ,且可被特异性ＰＡＦ拮抗剂ＷＥＢ2 170部分阻断。银杏制剂是银杏叶提取物 ,为较强的ＰＡＦ受体拮抗剂 ,其成分是银杏内酯和黄酮 ,前者有明确的抗ＰＡＦ作用。我们曾用银杏叶片治疗急性高黄疸肝炎 ,收到一定的疗效[2 ] 。本实验用银杏内酯治疗急性肝损害的小鼠 ,以进一步明确银杏内酯抗ＰＡＦ作用及对肝脏的保护作用。材料和方法一、药物和试剂银杏内酯由中国科学院上海药物研究所惠赠 ,用前与纤维素混匀后用蒸馏水配…