山西汉族遗传性多发性骨软骨瘤家系EXT1及EXT2基因突变研究

目的 对山西一个汉族遗传性多发性骨软骨瘤家系的EXT1和EXT2基因的全部外显子序列进行分析,以寻找致病突变.方法 用PCR扩增先证者EXT1和EXT2基因的全部外显子,将PCR产物送直接测序分析.结果 发现EXT1基因2种同义突变(P477P、E587E)、3种内含子突变(c.1537-48A＞G、c.1721 +203 A＞G、c.1722-103 C＞G).EXT2基因共发现5种内含子突变(c.-29-148 A＞T、c.1080-18 T＞A、c.1336-93 C＞T、c.1526-166 C＞T、c.1526-195C＞T).其中,EXT1 P477P、EXT1 E587E和EXT2 c.1080-18 T＞A为多发性骨软骨瘤突变数据库已收录的多态位点,其余7个位点尚未见报道.结论 对该家系EXT1、EXT2基因全部外显子的测序分析未发现明确的致病突变,该家系遗传性多发性骨软骨瘤的发生是否由除EXT1、EXT2外的其它EXT相关基因引起尚需进一步的连锁定位分析.     

大同地区耳聋基因GJB2和mtDNA1555突变分析

目的通过筛查大同地区87例耳聋患者常见基因GJB2和mtDNA1555的突变频率,研究该地区CJB2和mtD-NA1555基因突变情况及热点突变位点。方法采集大同地区87例耳聋患者外周血,对目的基因扩增并进行测序分析。结果所有患者中有58例GJB2基因检测到11个突变位点,与编码连接蛋白的非综合征耳聋突变数据库（http：／／davinci．crg．es／deafness／index．php？section=mut_db＆db=nonsynd）比对,9个位点已见报道,其中包括5个多肽位点c．79G〉A、c．341A〉G、c．608T〉C、c．368C〉A、c．765T〉C和4个致病住点c．235delc、c．109G〉A、c．176-c．191del16和c．299-c．300delAT,其中,c．79G〉A是主要突变方式,携带率为24．14％（42／174）。新发现两例未见报道的突变位点c．277A〉G和c．558G〉A;患者中只有1例检测到mtDNA1555A〉G位点突变。结论通过对大同地区GJB2基因和mtD-NA1555突变位点的研究,了解大同地区该基因突变谱,为后续国内耳聋基因型分布提供数据支持,同时也为耳聋的早期诊断,治疗提供理论依据。     

忻州地区耳聋患者常见耳聋基因GJB2、GJB3和线粒体DNA 12S rRNA 1555A〉G相关性分析

目的通过对忻州地区83例耳聋患者常见基因GJB2、GJB3和线粒体DNA 12S rRNA 1555A〉G测序分析,从分子水平研究该地区人群聋病的遗传病因和特点,为临床防聋治聋提供策略、依据。方法收集忻州地区83例耳聋患者外周血样本,提取DNA后对目的基因扩增并进行测序分析。结果83例耳聋患者中GJB2基因检测到57例发生突变,9个突变位点,与编码连接蛋白的非综合症耳聋突变数据库（http：／／davinci．crg．OS／deafneSS／index．php？Seccion=mut_db＆db=nonsynd）比对,8个位点已见报道,其中包括3个多态位点c．79G〉A、c．341A〉G、c．368C〉A和5个致病位点c．235delC、c．30-35delC、c．109G〉A、c．176-c．191dell6和c．299-c．300delAT,其中,c．79G〉A和c．341A〉G是主要突变方式,携带率为30．12％（42／174）和23．49％（39／166）。新发现1例未见报道的突变位点c．186C〉T;患者均未检测出GJB3和线粒体DNA12SrRNA1555A〉G基因突变位点。结论通过对忻州地区常见耳聋基因突变位点的研究,了解忻州地区该基因突变谱,为后续国内耳聋基因型分布提供数据支持,同时也为耳聋的早期诊断、治疗提供理论依据。     

运城地区耳聋患者常见耳聋基因突变分析

目的通过筛查运城地区耳聋患者常见耳聋基因GJB2、PDS和线粒体DNAl555位点的突变频率,来研究该地区常见耳聋基因突变的发生情况。方法采集运城市特殊教育学校75例耳聋患者外周血,对目的基因扩增并测序。结果75例患者中,45例患者的GJB2基因发生突变,其中,c．235delc、e．79G〉A和c.341A〉G的突变频率较高,分别为12％、22％和18．7％,另外还检测出4个突变频率较低的位点C．608T〉C（2％）、C．109G〉A（0．67％）、c．368C〉A（1．33％）和C．176—191del16（0．67％）;3例患者的PDS基因第19外显子发生突变,C．2168A〉G与IVs7—2G〉A突变频率分别为1．33％和2％;仅有1例患者mtDNA1555发生突变。结论通过对山西运城地区常见耳聋基因突变的研究,对建立山西省耳聋基因突变数据库提供素材,同时也为耳聋的预防,基因诊断及治疗提供强有力的依据。     

DNA去甲基化对急性B淋巴细胞白血病细胞株中DNA甲基转移酶基因及微RNA作用的研究

目的：探索甲基化转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）细胞株NALM-6的作用以及对细胞中微RNA（miRNA）表达水平的影响。方法用不同浓度5-Aza-CdR处理NALM-6细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖情况,采用荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测5-Aza-CdR处理后细胞DNA甲基转移酶（DNMT）基因mRNA表达水平的变化,采用miScript miRNA PCR Array芯片检测去甲基化后细胞中表达量发生改变的miRNA。结果 NALM-6细胞经不同浓度5-Aza-CdR处理不同时间后,细胞生长受抑,最高抑制率达（74.163±0.381）%。5-Aza-CdR作用浓度与DNMT基因mRNA表达水平呈反比,浓度为1000μmol／L的5-Aza-CdR作用细胞72 h后,DNMT-1的相对表达量降至0.453±0.021,DNMT-3L的相对表达量为0.003±0.001, DNMT-3B的相对表达量为0.395±0.019。miScript miRNA PCR Array筛选出3个miRNA（miR-184、miR-23a-3p、miR-34a-5p）与DNA甲基化相关。结论5-Aza-CdR可下调NALM-6细胞中DNMT基因的表达,并对细胞增殖有抑制作用。miR-184、miR-23a-3p和miR-34a-5p在B-ALL的发生、发展中与DNA甲基化相关。     

遗传性多发性骨软骨瘤一家系10例

先证者(图1,Ⅳ1) 男,16岁.全身性骨软骨瘤,腿部骨瘤严重影响行走,于2000及2001年两次手术切除,在其家系中病情最为严重.家系调查:该家系4代30人,无近亲婚配,患者10例,其中男性7例,女性3例(图1),其他成员无症状.Ⅲ1,39岁,手腕、腿部均存在硬性肿块,1980年手术切除;Ⅱ3,48岁,胸部第3肋骨囊肿,1982年手术切除;Ⅲ3,36岁,腿部及左肩部骨端隆起;Ⅲ6,42岁,腿部有硬性肿块,1989年手术切除;Ⅰ2、Ⅱ2、Ⅱ3、Ⅲ7腿部均有硬性肿块,无手术史;Ⅳ2～Ⅳ3因年龄较小,尚无临床症状.     

急性缺氧诱导小鼠心肌细胞微小RNA-34a升高和凋亡实验研究

目的:探讨急性缺氧对心肌细胞miR-34a表达、蛋白磷酸酶1核靶向亚基(PNUTS)蛋白和凋亡的影响。方法:原代培养小鼠乳鼠心肌细胞，缺氧24 h造模，使用antimiR-34a纳米颗粒干预。将其随机分为三组：对照组、缺氧组、缺氧+antimiR-34a纳米颗粒组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测miR-34a表达，Western blot检测PNUTS蛋白表达，流式细胞术测凋亡率。结果:与对照组相比，缺氧24 h后miR-34a表达明显增高(P<0.05),PNUTS水平降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);与缺氧组相比，缺氧+antimiR-34a纳米颗粒组的miR-34a表达下降(P<0.05),PNUTS水平升高(P<0.05),凋亡率下降(P<0.05)。结论:急性缺氧上调小鼠心肌细胞miR-34a基因表达，下调其下游PNUTS蛋白表达，同时上调凋亡率；antimiR-34a纳米颗粒抑制急性缺氧诱导的小鼠心肌细胞miR-34a升高，PNUTS降低以及细胞凋亡。