C57BL/6哮喘小鼠细胞内镁含量与肺组织β2受体mRNA表达的相关性研究

目的：探讨细胞内镁含量对C57BL/6哮喘小鼠肺组织β₂受体mRNA表达的影响。方法:健康4－6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠96只，体重(12±2)g，随机数字表法分为A、B、C、D 4组，每组各24只。应用鸡卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型。A、B组予低镁饲料喂食，C、D组予正常镁饲料喂食。B、D组腹腔内注射沙丁胺醇诱导β₂受体低调节，A、C组腹腔内注射生理盐水作对照。第1 d、21 d、34 d各组分别随机抽取8只检测血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂受体mRNA及蛋白表达。 结果:1 d血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达各组间差异无显著（均P>0.05）。21 d、34 d C组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达均显著高于A组［21 d：(0.84±0.09)mmol/L vs （0.57±0.10)mmol/L、(2.39±0.14)mmol/L vs （2.11±0.08)mmol/L、(0.75±0.09)mmol/L vs （0.59±0.06)pmol/g、（88.50±8.50)pmol/g vs （60.10±7.70)pmol/g，均P<0.05；34 d：(0.67±0.10)mmol/L vs (0.51±0.09)mmol/L、(2.17±0.08)mmol/L vs (2.05±0.09)mmol/L、(0.61±0.05)pmol/g vs (0.53±0.06)pmol/g、(76.60±7.10)pmol/g vs (58.00±7.60)pmol/g，均P<0.05］；21 d、34 d D组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达亦显著高于B组［21 d：(0.95±0.33)mmol/L vs (0.46±0.09)mmol/L、(2.32±0.18)mmol/L vs (1.87±0.14)mmol/L、(0.73±0.10)pmol/g vs (0.43±0.07)pmol/g、(96.90±8.00)pmol/g vs (47.90±4.90)pmol/g，均P<0.05；34 d：(0.71±0.10)mmol/L vs (0.31±0.08)mmol/L、(1.66±0.13)mmol/L vs (1.45±0.16)mmol/L、(0.40±0.07)pmol/g vs (0.33±0.05)pmol/g、(61.50±3.20)pmol/g vs (35.30±7.10)pmol/g，均P<0.05］。结论:细胞内镁缺乏的C57BL/6哮喘小鼠肺组织β₂受体表达减少，在激动剂作用下更易发生β₂受体低调节。     

靶向抑制高表达HRR蛋白增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性

同源重组修复(HRR)主要通过修复哺乳动物细胞中外源或内源性的DNA双链断裂,维持正常细胞基因组的完整性与稳定性,从而阻止细胞癌变。有研究发现高表达HRR蛋白的肿瘤细胞具有较强的损伤修复活力,通过修复放化疗诱导的DNA损伤,抑制凋亡途径以及活化细胞增殖信号通路,使其对放化疗产生耐受性,肿瘤细胞得以存活。这类HRR蛋白在肿瘤细胞中起到了癌基因的功效,维持了肿瘤细胞基因组的稳定性,促进了肿瘤的发生、发展,因而肿瘤细胞中高表达的HRR蛋白成为了肿瘤精准化治疗的潜在靶点。通过药物诱导HRR蛋白过度表达不仅能促进肿瘤细胞的凋亡,而且可以进一步提高肿瘤细胞对放化疗的敏感性。     

肝细胞生长因子对子宫内膜癌细胞增殖影响的实验研究

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对子宫内膜癌细胞HEC-2B增殖的影响及子宫内膜癌细胞HEC-2B中HGF受体C-met的表达,了解HGF对子宫内膜癌细胞的作用及其机制。方法体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-2B,用RT-PCR的方法检测HEC-2B中HGF受体C-met有表达。对HEC-2B进行24 h血清饥饿后用不同剂量的HGF作用于HEC-2B。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析细胞的增殖力,用流式细胞仪检测细胞的增殖周期。结果C-met在HEC-2B细胞中稳定表达,HGF促进细胞的增殖,并在一定的范围内有剂量依赖关系,各处理组与对照组相比,P<0.05。当HGF浓度达到60 ng.mL-1时,增殖水平较对照上调约1.9倍。结论HGF/C-met能够在体外促进子宫内膜癌细胞的增殖。     

血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化

 [目的]研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43（Cx43）表达的变化及与细胞周期分布的关系。[方法]分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大,72h后用RT-PCR和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及Cx43表达量的关系。[结果]血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强,S期、G2-M期细胞百分比增加,细胞内G2-M（二倍体）DNA含量降低,Cx43蛋白表达低于对照组,Cx43mRNA表达水平也较对照组明显下调,Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关。[结论]血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因表达明显下调,导致Cx43蛋白表达亦出现下调,这一改变可能与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关,提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程,而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关。     

GDNF mRNA、GFR-α1 mRNA在不同年龄大鼠SVZ和海马表达的变化及其意义

目的：观察不同年龄SD大鼠脑室管膜下区(SVZ)和海马GDNF mRNA及其受体GFR-α1 mRNA表达水平的变化，探讨其在神经发生及脑老化中的作用。方法：用RT-PCR方法检测胚胎18d、新生以及1、3、8、12月龄SD大鼠SVZ和海马GDNF mRNA及其受体GFR-α1 mRNA的变化。结果：随着年龄增长，SD大鼠SVZ和海马GDNF mRNA及其受体GFR-α1 mRNA表达水平逐渐降低。且各年龄组海马表达参数的幅度小于SVZ。结论：GDNF及其受体GFR-α1在神经发育及脑老化进程中起到一定的作用。     

抗EB病毒衣壳抗原IgG抗体亲合力诊断儿童传染性单核细胞增多症的价值及患儿免疫状态的变化

目的探讨抗EB病毒衣壳抗原(EBV-CA)IgG抗体亲合力对EB病毒(EBV)感染传染性单核细胞增多症(IM)的诊断价值及患儿免疫状态的变化。方法选取行抗EBV-CA IgG抗体亲合力及抗EBV-CA IgM抗体检测的儿童5 882例,其中IM 500例、非IM 5 382例,检测抗EBV-CA IgG抗体亲合力、抗EBV-CA IgM抗体、EBV DNA载量、外周血异型淋巴细胞(简称异淋)比例和外周血淋巴细胞亚群。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价抗EBV-CA IgG抗体亲合力、抗EBV-CA IgM抗体、异淋比例和EBV DNA单项及联合检测诊断IM的效能,并观察IM患儿的免疫状态。另选取临床诊断为IM并检测EBV DNA和淋巴细胞亚群的患儿502例,探讨EBV DNA阳性及阴性IM患儿的细胞免疫状况。结果在5 882例儿童中,抗EBV-CA IgG抗体亲合力、抗EBV-CA IgM抗体、EBV DNA和异淋比例4项指标任意1项阳性的患儿为1 031例(17.53%),其中IM的发生率最高(38.1%)。ROC曲线分析结果显示,抗EBV-CA IgG抗体亲合力、抗EBV-CA IgM抗体、异淋比例和EBV DNA诊断IM的曲线下面积(AUC)分别为0.883、0.729、0.788和0.664,4项指标联合检测的AUC为0.847。依据年龄将1 031例患儿分为婴儿组(1岁)、幼儿组(1～3岁)、学龄前期组(4～6岁)和学龄期组(7～17岁)。除婴儿组外,其他3组中的IM患儿CD3-CD16~+CD56~+自然杀伤(NK)细胞比例、CD3-CD19~+B细胞比例、CD3~+CD4~+T细胞比例及CD4~+/CD8~+比值显著低于非IM患儿(P0.01),CD3~+T细胞比例、CD3~+CD8~+T细胞比例显著高于非IM患儿(P0.01)。婴儿组中的IM患儿CD3-CD19~+B细胞比例显著低于非IM患儿(P0.01),CD3~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞比例显著高于非IM患儿(P0.01),而CD3-CD16~+CD56~+自然杀伤(NK)细胞比例、CD3~+CD4~+T细胞比例、CD4~+/CD8~+比值IM患儿与非IM患儿之间差异无统计学意义(P0.05)。EBV DNA阳性IM患儿与阴性IM患儿比较,上述变化更明显。结论抗EBV-CA IgG抗体亲合力对IM的诊断价值优于异淋比例、抗EBV-CA IgM抗体和EBV DNA。IM患儿细胞免疫功能明显紊乱,EBV DNA阳性的IM患儿紊乱程度更严重。     

C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道mRNA表达

【目的】观察C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道（TRPM6）mRNA的表达,探讨哮喘低镁血症的可能原因。【方法】健康4～6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠48只,体质量（12&#177;2）g,随机数字表法分为哮喘组和对照组,每组各24只。哮喘组应用卵蛋白（OVA）建立哮喘小鼠模型。第1天（1d）、21d、34d天每组分别随机抽取8只检测血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA的表达。【结果】1d血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA表达水平哮喘组与对照组之间差异无显著性：[（0.85&#177;0.07vs.0.89&#177;0.12）mmol/L、（2.48&#177;0.14vs.2.49&#177;0.07）mmol/L、0.51&#177;0.08vs.0.49&#177;0.06,P均〉0.05];21d哮喘组血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA表达水平均显著低于对照组：[（0.84&#177;0.09vs.0.95&#177;0.07）mmol/L、（2.39&#177;0.14vs.2.44&#177;0.09）mmol/L、0.32&#177;0.06vs.0.52&#177;0.05,P均〈0.05];34d哮喘组血浆Mg^2＋、红细胞内Mg^2＋、肾组织TRPM6mRNA表达水平亦显著低于对照组：[（0.67&#177;0.10vs.0.94&#177;0.10）mmol/L、（2.17&#177;0.08vs.2.43&#177;0.08）mmol/L、0.24&#177;0.05vs.0.53&#177;0.06,P均〈0.05]。肾组织TRPM6mRNA表达水平与血浆Mg^2＋浓度呈正相关（r=0.630,P〈0.001）;肾组织TRPM6mRNA表达水平与红细胞内Mg^2＋浓度呈正相关（r=0.715,P〈0.001）。【结论】肾组织TRPM6mRNA的低表达可能是导致C57BL/6哮喘小鼠低镁血症的原因。     

微小RNA let-7基因表达在膀胱癌生物学行为中的作用

目的 探讨膀胱癌组织中微小RNA(miRNA)表达在膀胱癌发生发展中的作用. 方法 Trizol法抽提9例膀胱癌患者癌组织及癌旁正常膀胱组织标本总RNA,分离与富集miRNA,随机选取2组miRNA标本与miRNA表达谱芯片杂交,采用LuxScan 3.0和SAM 2.1软件对芯片结果 进行图像数据分析.在差异性表达的miRNA中筛选出感兴趣的let-7基因,采用印迹杂交技术对9组miRNA标本中let-7基因进行验证. 结果 膀胱癌组织和正常膀胱组织标本中差异性表达有显著性意义的miRNA 71个,其中表达上调33个,表达下调38个;差异性表达有极显著性意义的miRNA(上调或下调≥4倍)26个,其中显著上调12个,显著下调14个.let-7基因验证结果 与芯片表达结果 一致,癌组织let-7基因表达吸光度值为479.6±228.2,正常膀胱组织为694.6±152.9,组间差异有统计学意义(P<0.05). 结论 膀胱癌组织和正常膀胱组织中存在差异表达的miRNA,let-7基因在膀胱癌的发生中可能起着抑癌基因的作用.     

RNAi技术沉默Bcl-2基因对人膀胱癌细胞株T24增殖影响的研究

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Bcl-2基因表达对人膀胱癌细胞株T24增殖的影响。方法针对Bcl-2 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,转染T24细胞。采用Western blot检测重组质粒对Bcl-2蛋白表达的影响,MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用,Annexin-V-PI双染法流式细胞术(FCM)检测转染重组质粒后细胞的凋亡状况。结果成功构建了pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,并成功转染T24细胞。重组质粒抑制Bcl-2基因的表达接近70%;转染重组质粒后,T24细胞的活力降低为(66.9±5.6)%;重组质粒组的T24细胞凋亡率为34.55%～45.39%。结论pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒明显下调Bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡。     

前列腺癌患者噬菌体抗体库的构建

[目的]构建前列腺癌患者的噬菌体抗体库,为前列腺癌特异性的人源性抗体 Fab片段的筛选及其应用奠定基础.[方法]由前列腺癌患者外周血分离得淋巴细胞,完整提取其总 RNA,经 RT PCR及半套式扩增得到免疫球蛋白全部轻链和重链 Fd段基因,然后经酶切、纯化、连接等步骤克隆进载体 pComb3,并电转化大肠杆菌 XL1 Blue,从而构建前列腺癌患者噬菌体抗体库.[结果] 成功构建噬菌体抗体 Fab片段库,其轻链及重链 Fd段与载体 DNA的重组率分别为 87%、 79%,库容为 23.2× 107,滴度为 87× 1012 mL- 1.[结论]本研究成功构建了前列腺癌患者噬菌体抗体库.