猪苓多糖对LPS诱导的J774炎症模型的抗炎作用及其机制

目的:研究猪苓多糖对脂多糖(LPS)诱导的J774巨噬细胞炎症模型细胞因子的调节作用,并探讨其可能的抗炎作用机制。方法:J774细胞以2×105个/孔接种于6孔培养板,将细胞分为空白组、LPS模型组、LPS加猪苓多糖低剂量组(1 mg·L-1)、LPS加猪苓多糖中剂量组(10 mg·L-1)、LPS加猪苓多糖高剂量组(100 mg·L-1),每组6个复孔。J774给予10 mg·L-1LPS刺激3 h,同时猪苓多糖干预共刺激3 h后收集细胞,实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-10(IL-10),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-6(IL-6)mRNA的表达,Western blotting检测猪苓多糖对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38),细胞外信号调节蛋白激酶42/44(ERK42/44),p65丝裂原活化蛋白激酶(p65)蛋白磷酸化表达的影响。结果:与空白组相比,LPS模型组细胞因子IL-1β,IL-10,TNF-α,IFN-γ和IL-6 mRNA表达量显著升高(P0.01),炎症模型建立成功。给予猪苓多糖干预后,猪苓多糖可降低由LPS诱导导致的炎症因子的升高与LPS导致的p38,ERK42/44,p65磷酸化的表达(P0.01,P0.05)。结论:猪苓多糖可以降低LPS导致的炎症反应,可能是通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路来降低炎症损伤。     

甘草与白术配伍对IEC-6细胞p53,p21基因表达的影响

通过研究不同剂量甘草与白术配伍对DFMO模型小肠上皮细胞(IEC-6)增殖及p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,探讨甘草与白术配伍对细胞增殖影响的分子基础.采用流式细胞术分别检测药物对IEC-6细胞分裂速度及细胞周期的影响,qRT-PCR检测药物对IEC-6增殖相关基因p53,p21 mRNA的影响,Western blot检测药物对IEC-6细胞p53,p21蛋白表达的影响.白术颗粒可上调DFMO模型IEC-6细胞内p53,p21 mRNA和蛋白的表达水平;而甘草颗粒与白术颗粒不同比例配伍均能显著下调单独白术颗粒作用对DFMO模型IEC-6细胞p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,促进IEC-6细胞的增殖.对于DFMO模型IEC-6细胞,配伍用药甘草能调和白术对小肠上皮细胞的影响.     

补肾强督治偻方对脂多糖刺激的小鼠RAW264.7细胞炎性细胞因子表达的影响

【目的】研究补肾强督治偻方及其不同萃取成分对脂多糖(LPS)诱导的细胞炎性模型的细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨其主要的抗炎有效成分。【方法】采用系统溶剂法萃取补肾强督治偻方各成分,体外培养RAW264.7细胞,以LPS(1μg/m L)诱导炎症模型,补肾强督治偻方总方及不同溶剂萃取成分干预24 h,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测细胞TNF-α、IL-1βm RNA的表达。【结果】LPS刺激的RAW264.7细胞的炎症细胞因子TNF-α、IL-1βm RNA表达均显著升高(P<0.05),水与正丁醇萃取的补肾强督治偻方成分均可显著抑制RAW264.7巨噬细胞炎症模型TNF-α、IL-1βm RNA的表达(P<0.05),且呈一定的剂量依赖关系。【结论】水提取与正丁醇提取的补肾强督治偻方成分可能是其主要的抗炎有效成分部位,抑制炎症细胞因子基因表达可能是补肾强督治偻方治疗强直性脊柱炎的机制之一。     

猪苓多糖对巨噬细胞RAW264.7的双向免疫调节作用

目的观察猪苓多糖对γ干扰素(IFN-γ)诱导M1亚型巨噬细胞膜表面蛋白的影响及对相关细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-αm RNA的作用,探讨猪苓多糖对巨噬细胞的免疫调节作用。方法实验分为空白对照组、IFN-γ模型组、猪苓多糖组和IFN-γ加猪苓多糖组。IFN-γ诱导巨噬细胞极化为M1型后用猪苓多糖干预,采用流式细胞术检测膜蛋白CD14、TLR4、CD86、CD40、CD16/32的阳性表达率,ELISA法检测细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β、IL-17及IL-10的表达量,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β及IL-10 m RNA的相对表达量。结果 IFN-γ可单独诱导M1巨噬细胞模型,猪苓多糖作用于M1型巨噬细胞,分泌的因子增加,但是对膜蛋白影响不大;猪苓多糖单独作用于巨噬细胞,可以增加膜白蛋的表达量,分泌的因子和空白对照组比较有统计学差异。结论猪苓多糖可以极化巨噬细胞为M1型,可以增加由IFN-γ诱导的M1炎症因子的表达,同时也增加抑炎因子的表达,有着双向的调节作用。     

猪苓对LPS诱导的J774细胞IL-6与iNOS表达的影响

目的研究猪苓对脂多糖(LPS)诱导的J774细胞白细胞介素(6IL-6)与iNOS表达的影响。方法体外培养J774细胞,用不同浓度的猪苓进行干预,MTT法测定猪苓对J774细胞活力的影响;利用LP(S10μg/mL)刺激细胞建立炎症模型,经不同浓度猪苓进行干预后,RT-PCR法检测细胞中IL-6、iNOS mRNA的表达。结果猪苓在0.05～50μg/mL剂量范围内对J774细胞无明显细胞毒性作用。猪苓可明显抑制LPS诱导的J774细胞IL-6、iNOS mRNA的表达,并具有一定的量效关系。结论猪苓呈浓度依赖性抑制LPS诱导的J774细胞IL-6、iNOS的表达,从而发挥抗炎作用。     

猪苓多糖对M1型巨噬细胞细胞因子表达的调节作用

目的通过诱导构建M1型巨噬细胞模型研究猪苓多糖对白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和转化生长因子β(TGF-β)、IL-10 mRNA的表达影响,探讨猪苓多糖对巨噬细胞的免疫调节机制。方法实验分为空白对照组、γ干扰素(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞模型组、猪苓多糖高中低剂量组,浓度分别为200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL。用IFN-γ诱导RAW264.7巨噬细胞,用流式细胞术检测M1型巨噬细胞特异性指标CD16/CD32、CD86的表达,实时荧光定量PCR检测IL-1β、IL-10、iNOS、TNF-α、TGF-β的mRNA表达,观察不同剂量猪苓多糖对M1型巨噬细胞的影响。结果与空白组比较,IFN-γ的诱导RAW264.7巨噬细胞分化M1型巨噬细胞的特异性标志物CD16/CD32、CD86的表达明显升高。100μg/mL猪苓多糖组在3、6、9、12、24 h,IL-1β、iNOS、IL-10、TGF-β、TNF-α的mRNA表达升高,不同剂量猪苓多糖给药6 h后各因子的表达量升高(P0.01)。结论 IFN-γ单独作用于巨噬细胞,可以有效的诱导RAW264.7巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞;猪苓多糖促进M1型巨噬细胞IL-1β、iNOS、IL-10、TNF-α的mRNA表达。