乙型脑炎Vero细胞灭活疫苗毒株的遗传稳定性

目的 研究流行性乙型脑炎Vero细胞灭活疫苗毒种（P3毒株）在生产过程中的遗传稳定性,为疫苗的安全性和免疫原性评价提供依据.方法 检测P3毒株鼠脑传代一代毒株、主种子、工作种子、疫苗及疫苗续传5代后病毒E蛋白基因核苷酸及氨基酸序列,并与GenBank中乙脑病毒P3株（AF036919）进行比对分析,同时比较主种子、工作种子、疫苗及疫苗续传5代后毒株的病毒滴度、抗原含量及效价.结果 以上5代次病毒的E蛋白基因核苷酸及蛋白质序列完全相同,同源性均为100％,与GenBank中乙脑病毒P3株（AF036919）比较显示：核苷酸序列中第E9、E10、E324、E330、E1223、E1338基因位点存在差异,同源性为99.73％,其中只有E1223突变引起相应氨基酸aE408突变（L→S）,同源性为99.80％,但该位点为非毒力相关位点,而其他位点均为沉默突变.4个代次疫苗毒株病毒滴度均≥8.0 lgLD50/ml,且各代次抗原含量及效价较为相似.结论 在生产乙型脑炎灭活疫苗（P3株）过程中建立的以Vero细胞为基质的乙脑毒种库具有良好的遗传稳定性.     

一株引起无菌性脑膜脑炎柯萨奇B组3型病毒的分离和VP1基因分析

目的对一株从无菌性脑膜脑炎患者中分离到的柯萨奇B组3型病毒(coxsackie virus B3,CVB3)分离株KMA103-09进行VP1区的基因特征分析。方法采用Hep-2、RD细胞对患者粪便标本进行病毒分离,肠道病毒组合血清进行鉴别,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒目的片段,测序后进行VP1基因分析,用Mega4.1等软件分析处理。结果肠道病毒组合血清鉴别为柯萨奇病毒B组3型(Cox.B3),从病毒性脑膜脑炎患者粪便标本中,分离到CVB3,其VP1区的核苷酸长度为849bp,未发现核苷酸插入与丢失。与山东04433/SD/CHN/2004/CB3株、山东05280/SD/CHN/2005/CB3株及山东YZ127/SD/CHN/2005/CB3株氨基酸同源,与其余国内分离株同源性高于为99.29%,与国外毒株的同源性为95.41%~96.47%。在进化树上与AM06HZ/SD/CHN/2006/CB3株显示在同一个分支上。结论分离的肠道病毒为柯萨奇病毒B组3型(Cox.B3),分离株(KMA103-09)VP1区变异较小。     

云南省2007--2009年流行性腮腺炎病毒SH和HN基因的遗传特征分析

目的 分析2007-2009年云南省腮腺炎病毒(MuV)分离株的SH和HN遗传特征.方法 采用反转录-聚合酶链反应从Vero细胞分离的病毒株基因组中扩增出SH基因和HN基因,测序后用Mega4.1软件分析其遗传特征.结果 云南省分离14株MuV的SH基因其核苷酸和氨基酸同源性为98.3%～100.0%和96.5%～100.0%,与其他省份比较其同源性为92.6%～99.4%和87.7%～100.0%,其中Wsh1和Wsh2与其他F基因型差异较大;与疫苗株同源性为84.5%～85.1%和77.2%;与其他基因型同源性为83.4%～90.9%和70.1%～86.0%.6株MuV分离株的HN基因与核苷酸和氨基酸同源性分别为99.3%～99.5%和99.1%～99.7%;与中国分离株SP株的核苷酸和氨基酸同源性均为99.8%;与其他基因型同源性为94.7%～96.8%和95.5%～99.1%;与疫苗株的同源性为92.4%～93.2%和95.5%～96.4%.结论 2007-2009年云南省流行的MuV均为F基因型;其HN基因比SH基因保守.

Abstract：

Objective To analyze genetic characterization of the small hydrophobic and hemagglutinin-neuraminidase genes of mumps virus(MuV)isolated in Yunnan province,China from 2007 to 2009.Methods Fourteen MuV strains were isolated in Yunnan,China from 2007 to 2009.Using RT-PCR,the SH gene fragments contained 316 nucleotides in all strains and HN gene of six strains were sequenced.The sequences were aligned with other mumps virus sequences downloaded from GenBank using Mega 4.1 software.Results Fourteen isolated strains were closely related to other reference strains of F genotypes.In SH gene,the homology of nucleotide and amino acid among the fourteen isolated strains were 98.3%-100.0%and 96.5%-100.0%,respectively,and 92.6%%-99.4%and 87.7%-100.0% of homology when compared with that of strains isolated from other provinces in China,respectively.Wsh1 and Wsh2 strains had less homology when compared to other strains of F genotypes.The fourteen strains had homology of 84.5%-85.1%and 77.2%compared to vaccine strains on nucleotide and amino acid,respectively,and had homology of 83.4%-90.9% and 70.1%-86.0% compared to that of other genotypes.In HN gene,the homology of nucleotide and amino acid among the six isolated strains were 99.3%-99.5% and 99.1%-99.7%,respectively,and also 99.8% and 99.8% of homology respectively when compared to the SP strain in China.All the six strains had homology of 92.4%-93.2% and 95.5%-96.4% when compared to the vaecine strains on nucleotide and amino acid,respectively,and had homology of 94.7%-96.8% and 95.5%-99.1%compared to other genotypes.Conclusion Fourteen strains isolated in Yunnan from 2007 to 2009belonged to F genotype of MuV while the HN gene seemed more conservative than SH gene.     

Sabin IPV基础免疫后不同时间的中和抗体水平研究

目的 探讨不同剂量配比的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin IPV)基础免疫后中和抗体的持续时间及加强免疫前后中和抗体水平的变化.方法 用不同配比的Ⅰ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备两批Sabin IPV,并使用GSK制备的DTaP-w IPV作为阳性对照组,对18只Wistar大鼠进行3针基础免疫后,每间隔3个月采血直到加强免疫前,并同时于加强免疫后1个月采血,并对血清中抗脊髓灰质炎病毒3个型别的中和抗体效价进行初步研究.结果 大鼠采用0、1、2月免疫程序进行3针免疫后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体的几何平均滴度随着时间的变化均有所下降,但绝大部分组大鼠的血清中和抗体阳转率仍维持在100％,在加强免疫后,各组的三个型别的中和抗体水平在短期内明显升高.结论 Sabin IPV有良好的免疫持久性,并在加强免疫后,可产生更高水平的中和抗体.     

粪便中脊髓灰质炎病毒IgA的ELISA检测方法比较

脊髓灰质炎是由脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型引起的传播广泛且危害极大的急性传染病.黏膜免疫在抗脊髓灰质炎免疫应答过程中颇为重要.     

治疗性及预防性HIV疫苗的前景和挑战

开发有效的预防性疫苗是控制HIV流行的最好方法。在这十年中通过效力试验得到了有关第一代疫苗保护力的资料。几种新的能够促进恒河猴体内CD8^ T细胞应答的混合型疫苗正在进行人体试验。治疗性HIV疫苗的前景有了新希望。然而无论在工业界还是科学界，HIV疫苗开发都存在难以克服的挑战。     

治疗性及预防性HIV疫苗的前景和挑战

开发有效的预防性疫苗是控制 HIV流行的最好方法。在这十年中通过效力试验得到了有关第一代疫苗保护力的资料。几种新的能够促进恒河猴体内 CD8+ T细胞应答的混合型疫苗正在进行人体试验。治疗性 HIV疫苗的前景有了新希望。然而无论在工业界还是科学界 ,HIV疫苗开发都存在难以克服的挑战     

一株柯萨奇病毒B组5 型(Cox.B5) 病毒的分离及VP1基因分析

目的研究2009年昆明市无菌性脑膜炎的病原柯萨奇B5(coxsackie virus B5,CVB5)分离株(KMA193-09)的VP1基因特征。方法采用RD细胞、Hep-2细胞对患者粪便标本进行病毒分离,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒VP1基因并进行序列测定,用Mega 4.0等软件分析处理。结果从无菌性脑膜炎患者粪便标本中,分离到CVB5,其VP1区的核苷酸长度均为831bp,未发现核苷酸插入与丢失。与浙江COXB5/ZHEJIANG/12/02(CFS)株、山东02336/SD/CHN/2002/CB5株及浙江COXB5/ZHEJIANG/13/02株氨基酸同源性最高为98.19%,与国外毒株的同源性为95.67%～97.83%。在进化树上与YZ081/SD/CHN/2005/CB5株显示在同一个分支上。结论分离的肠道病毒为柯萨奇病毒B组5型(CVB5),分离株(KMA193-09)VP1区变异较小。     

双表达载体研究GM—CSF对HCV C基因免疫应答的影响

目的 HCV C蛋白基因诱导的免疫应答较弱，因而增强HCV C蛋白基因免疫对于开发HCV疫苗具有要其的重要性。方法 将GM－CSF基因与pc154基因插入双表面载体pcDNA3.0 BA构建成双价质粒pcDNA3.0 APC154GM-CSF,肌肉免疫Balb/c小鼠。结果 GM－CSF和pc154在Cos-7细胞中同时获得瞬时表达；pcDNA3.0 BApc154GM-CSF双价质粒较单价pcDNA3.0 BApc154诱导小鼠产生抗体的几何平均滴度显著增高（P＝0.04），而pcDNA3.0 BApc154 pcDNA3.0 BAGMCSF混合质粒较单价质粒pcDNA3.0 BApc154诱导小鼠产生抗体的滴度极显著降低（P＜0.01）。HCV C蛋白抗原特异性的脾淋巴细胞增殖能力，双价质粒较单价及单价混合质粒极显著增高（P＜0.01）。结论 双表达载体同时输送GM－CSF与pc154基因能增强Balb/c小鼠对HCV C蛋白基因的体液免疫应答及免疫鼠脾淋巴细胞对特异性抗原刺激的增殖能力。     

膜结合表达对HCV C基因免疫的影响

目的：探讨膜结合表达对基因免疫的影响。方法：流感病毒跨膜蛋白基因修饰带HBV preC分泌型信号肽的HCV C69基因,构建pc69TM质粒,^35S-甲硫氨酸代谢标记和免疫沉淀检测质粒体外瞬时表达蛋白;肌肉免疫Balb/c小鼠。结果 pc69TM基因表达出的蛋白存在于膜上。免疫鼠淋巴细胞对特异性抗原刺激的增殖能力pc69TM较分泌表达型质粒pc69显著增强（P=0.03）,而2种质粒诱导小鼠产生抗体效价差异不显著（P=0.765）。结论 膜结合表达能增强HCV C69基因免疫的淋巴细胞增殖能力。