IL-15对前T细胞发育的调节作用

IL 15参与前T细胞向T细胞分化发育的多个环节。IL 15促进胸腺内T/NK双潜能细胞向NK细胞或T细胞发育 ,此过程可能是NK细胞或T细胞发育成熟的自然状态。IL 15同时还参与NK1 T细胞发育 ,该作用远强于IL 2。IL 15还可显著促进树突状上皮样T细胞 (DETC)和CD8aaTCR 上皮内淋巴细胞(IEL)的发育。     

脂质体介导Endostatin IL-12基因联合治疗移植型鼠肝癌的实验研究

目的:探讨脂质体介导Endostatin及IL-12基因联合治疗肝癌的可行性.方法:将已构建的Endostatin和IL-12真核表达载体给荷瘤BALB/c鼠瘤内注射,每周两次测量瘤体积.ELISA法检测肿瘤局部IL-12、IL-2、Endostatin含量,MTT法检测NK细胞杀伤活性,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况.结果:联合治疗组肿瘤体积明显小于其它各组(P＜0.05);肿瘤局部IL-12、IL-2、Endostatin的表达明显高于pVAX1空载体和生理盐水对照组(P＜0.05);NK细胞杀伤率和肿瘤细胞凋亡率分别为52.0%和48.2%.结论:联合应用Endostatin和IL-12基因可有效抑制鼠肝癌的生长.     

两种端粒酶逆转录酶启动子真核表达载体的构建

目的：构建hTERT启动子和保留HBV同源序列的缺失点变hTERT启动子（pGL3-del445）的真核表达载体，为进一步研究HBV与hTERT启动子的关系奠定实验基础。方法：通过双酶切及PCR方法从pCR-TRTP载体上将全长及含有HBV同源序列的hTERT启动子的基因序列克隆到pPL-basic多克隆位点上，构建真核表达载体pGL-3-TRTP与pGL3B-del445，将该两质粒与pRL-tk共转染不同细胞系，评估其端粒酶启动子活性。结果：经测序证明成功构建了全长及含有HBV同源序列曲hTERT启动子的真核表达载体pGL3-TRTP和pGL3B-del445，共转染实验中，证实在永生细胞系中重组子高效表达，在非永生正常细胞中重组子不表达。结论：构建的两种重组表达载体具有端粒酶启动子活性，在不同端粒酶表型的细胞系中其表达具有选择性。     

重组内皮抑素联合靶向性preS2反义RNA对肝癌细胞的体内抑制作用

单纯抗血管生成治疗肿瘤 ,仅使肿瘤处于休眠状态 ,容易出现复发。如何将抗血管生成与其他肿瘤治疗方法有效结合 ,是目前肿瘤基因治疗中的研究热点。本研究首次提出重组内皮抑素联合靶向性preS2反义RNA抑制肝癌细胞的策略 ,并进行体内实验研究。构建肝癌细胞特异性HBVpreS2反义RNA表达载体 ,并将其与针对表皮生长因子受体(EGFR)的 16肽配体寡肽和流感病毒血凝素HA2 0寡肽混合 ,制备肝癌靶向性HBV反义RNA转移系统 ,即AFP增强型四元复合体。同时 ,以自行构建的毕赤酵母菌表达重组人内皮抑素蛋白 ,纯化后 ,进行动物实验。培养整合有…     

散结片对人肝癌细胞和荷瘤鼠免疫细胞影响的实验研究

目的 :探讨散结片抑瘤机制。方法 :以不同浓度的散结片醇提物和水提物分别处理人肝癌 SMMC- 772 1细胞 ,以 MTT法测提取物对其线粒体代谢活性的影响 ;腹腔注射含水提物 10 m g/ m l· d的水溶液 ,测其对小鼠移植性实体瘤的抑制作用及对小鼠 T、B淋巴细胞比率和腹腔吞噬细胞活性的影响。结果 :1散结片醇提物对人肝癌细胞的抑制作用随浓度提高而增加。 2水提物对人肝癌细胞作用不明显。但能明显抑制小鼠 S- 180实体瘤 ,并明显提高 T、B淋巴细胞比率。 3水提物可明显提高小鼠腹腔吞噬细胞活性。结论 :散结片醇提物能降低体外培养的人肝癌细胞线粒体代谢活性 ;水提物能提高小鼠 T、B淋巴细胞比率和腹腔吞噬细胞活性 ;对小鼠移植性实体瘤有很强的抑制作用。     

TRAIL对HBV感染的免疫监视效应研究

目的：探索新型肿瘤坏死因子（TNF）相关的凋亡诱导配体（TRAIL）对乙型肝炎病毒（HBV）感染后的免疫监视效应。方法：应用酶联免疫吸咐（ELISA）和噻唑蓝（MTT）比色法及流式细胞术检测52例HBV感染者和24例健康对照者血清中可溶性TRAIL（sTRAIL）的表达,在转染HBV全基因组并稳定表达病毒抗原的HepG2.2.15肝癌细胞系研究TRAIL在У-干扰素（IFN-У）的作用下对HepG2.2.15细胞的生长抑制效应和凋亡诱导效应。结果：HBV感染者的外周血sTRAIL的表达量明显高于正常对照组（P ＜ 0．001）。各组HBV感染者sTRAIL的表达量与丙氨酸氨基转换酶（ALT）的值呈正相关。而细胞学的研究结果显示,在IFN-У的协同作用下,TRAIL能够显著抑制HepG2.2.15细胞的恶性增殖,并能够显著诱导HBV相关肿瘤细胞发生凋亡。结论：TRAIL是参与到HBV感染后所致疾病中的一个重要的免疫监视分子,TRAIL的作用效应极有可能直接影响疾病的预后与转归。     

PDCD4基因对T淋巴细胞亚群分化的影响

目的探讨PDCD4基因对小鼠T淋巴细胞亚群分化的影响。方法采用流式细胞术检测PDCD4基因缺失小鼠脾细胞和淋巴结细胞中的CD8+T和CD4+T,及其亚群Th1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)的特异性标记分子,并分析各细胞亚群的比例变化。结果 pdcd4-/-小鼠脾脏和淋巴结中CD8+T细胞数量较野生型C57BL/6小鼠有所下降(P<0.05),CD4+T细胞及Th1细胞也呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05);而PDCD4基因缺失后Th2和Th17的分化比例无显著变化(P>0.05);进一步分析CD4+T细胞群体中CD25+Foxp3+Treg的表达,发现pdcd4-/-小鼠CD25+Foxp3+Treg比例明显上调(P<0.05)。结论 PDCD4基因能够影响部分T淋巴细胞亚群的分化,PDCD4基因敲除小鼠中CD8+T细胞数量下降和CD25+Foxp3+Treg比例升高,提示PDCD4基因有可能在免疫调节方面起到一定作用。而PDCD4基因对于CD4+T以及Th1、Th2和Th17的分化并无明显作用。     

preS2反义RNA肝癌特异性表达载体的构建及相关特性研究

目的 构建针对preS2基因的肝癌特异性反义RNA表达载体，并对其特异性和有效性进行研究。方法 PCR扩增preS2(3203—340)基因，克隆至含甲胎蛋白启动子的EB病毒表达载体pEBAF，构建反义RNA表达载体pEBAF-as—preS2。脂质体转染肝癌细胞和ECV304细胞，3d后Northern blot检测preS2 mRNA的表达，ELISA检测HBV抗原，荧光定量PCR检测HBV DNA。结果序列分析表明，pEBAF-as-preS2构建成功，Northern blot证实反义RNA仅在AFP阳性的肝癌细胞中表达，pEBAF-as-preS2转染3d后，可显著抑制HepG2．2．15细胞HBV复制和抗原表达，对HBsAg、HBeAg表达的抑制率分别为33．4％和41．5％；对HBV复制抑制率为86％。结论 反义RNA表达载体pEBAF-as-preS2仅在肝癌细胞中特异表达、并可有效抑制HBV，有良好的开发应用前景。     

免疫负调控基因A20在肝癌中的表达及其真核表达载体的构建

目的 探讨免疫负性调控基因A20在肝癌中的表达并构建A20真核表达载体。 方法 采用免疫组化技术, 检测46例肝癌患者癌组织和癌旁组织中A20的表达情况, 并进一步构建A20真核表达载体, 测序正确后以脂质体法转染至SMMC-7721肝癌细胞系中, RT-PCR和Western blot检测转染后A20的mRNA和蛋白表达。结果 免疫组化结果显示, A20在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织, 差异具有统计学意义（P＜0.05）。A20的表达与肝癌分级分化和肿瘤大小有关（P＜0.05）, 成功构建A20真核表达载体, 并在SMMC 7721肝癌细胞系中获得高表达。结论 免疫负调控基因A20可能参与了肝癌的发生机制, 成功构建的A20真核表达载体可作为进一步研究的重要工具。