2′-O-甲氧乙基反义寡核苷酸应用于杜兴肌肉萎缩症的体外研究

目的:通过对反义寡核苷酸2′-O-甲氧乙基(2′-O-MOE)化学结构的体外实验,为杜兴肌肉萎缩症基因治疗方法提供一种候选的反义寡核苷酸药物。方法:在杜兴肌肉萎缩症小鼠H2K mdx细胞上转染不同长度和骨架修饰的2′-O-MOE反义寡核苷酸,利用RT-PCR技术检测其诱导外显子跳读的情况。结果:3种2′-O-MOE修饰的反义寡核苷酸体外诱导外显子跳读的效率显著高于目前临床检测的药物2′OmePS,表现出一定的浓度效应和时间效应。并且MOE25(PS)诱导外显子跳读的效率最好。结论:2′-O-MOE修饰的反义寡核苷酸能够有效地诱导H2K mdx细胞外显子跳读。     

己糖对杜兴肌肉萎缩症核酸药物Pip5e-PMO跳读活性研究

目的:在杜兴肌肉萎缩症模型上探究己糖混合物对核酸药物Pip5e-PMO介导的外显子跳读活性的促进作用。方法:选择成年mdx小鼠为测试动物模型,通过局部肌肉和系统尾静脉注射,比较Pip5e-PMO与己糖和生理盐水联用的作用效果,利用免疫荧光（IHC）和蛋白印迹法（Western blot）检测dystrophin阳性肌纤维的数量和分布及dystrophin蛋白的表达水平;利用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测外显子跳读。结果:在局部肌肉给药试验中,己糖能够促进Pip5e-PMO诱导dystrophin蛋白表达水平（P<0.05）。在系统试验中,对己糖和生理盐水组比较发现:按15 mg/kg的剂量单次系统尾静脉注射Pip5e-PMO,骨骼肌中dystrophin蛋白表达恢复至正常水平的50%;在心脏中,也检测到明显的dystrophin恢复表达和外显子跳读。但两组无显著性差别（P>0.05）。结论: Pip5e-PMO可诱导有效的外显子跳读和dystrophin蛋白表达,但己糖对其促进效果有限。     

肺癌介入化疗的护理

介入放射学是一门新兴的学科，近几年来在国内外发展很快，我院自1992年10月成立介入诊疗科以来，已对253例肺癌病人采用经皮穿刺支气管动脉灌注化疗取得良好疗效，现将护理体会报告如下。IM床资料253例均为门诊及住院病人，男性201例，女性52例，年龄范围26～75岁，中位年龄51岁。临床分期：11期29例，ma期88例，illb期92例，IV期44例。全部病例均经病理学细胞学证实而确诊为中晚期支气管肺癌。2术前准备21做好心理护理：当病人进入导管室，面对着庞大而复杂的各种机器和身着手术衣、戴着手套、帽子、口罩的医务人员，心理严重紧张。病人…     

负载酪氨酸酶抑制肽的牛奶外泌体抑制酪氨酸酶活性及黑色素生成研究

目的:探讨酪氨酸酶抑制肽（YRS）功能化的牛奶外泌体（mEXOYRS）,对酪氨酸酶活性及黑色素生成的抑制作用。方法:通过超速离心法获取牛奶外泌体（mEXO）;利用外泌体特异锚定肽CP05将YRS修饰在mEXO表面,获得mEXOYRS,随后通过流式细胞仪分析YRS的负载效率;在黑色素瘤细胞B16-F10中,检测细胞对mEXOYRS的摄取效率以及YRS与酪氨酸酶的共定位效率,评估mEXOYRS对B16-F10黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性的抑制效果及对黑色素合成的抑制作用;进一步将mEXOYRS均匀涂抹于Nude BALB/c小鼠黑色素瘤细胞B16-F10所成皮下瘤模型上,评估其在体内对黑色素合成的抑制作用;通过对C57BL/6小鼠表面皮肤涂抹mEXOYRS,评估其对小鼠毛囊的着色程度及小鼠皮肤的美白效果。结果:YRS通过外泌体特异锚定肽CP05高效负载至mEXO,并且不影响mEXO的形态结构及标志性蛋白的表达;在B16-F10黑色素瘤细胞摄取实验中,mEXO能够增强YRS与细胞内酪氨酸酶共定位的效率,在1周、2周及6周时均显著抑制细胞产生黑色素（F=56.117、48.954、560.006,均P＜0.05）;在Nude BALB/c小鼠黑色素皮下瘤模型中,与YRS组相比,mEXOYRS更好的抑制了黑色素的产生;在C57BL/6小鼠模型中,mEXOYRS降低了黑色素的产生,并显著降低了黑色素含量（F=173.083,P＜0.05）及酪氨酸酶活性指标（F=34.156,P＜0.05）,取得了美白效果。结论:YRS修饰的mEXO可通过内体转运途径,靶向运输到酪氨酸酶处,降低酪氨酸酶活性,并有效抑制黑色素生成,提高YRS的美白效果。     

不同冻干保护剂在外泌体储存中的研究

目的:通过测试海藻糖等不同冻干保护剂,分析其对外泌体的完整性、分散度以及生物学功能的保护作用。方法:超速离心法收集293T细胞来源的外泌体,在冻干过程中加入50～200 mmol/L赖氨酸、2%和4%乳糖、2%海藻糖和5%菊粉等不同的冻干保护剂;通过透射电镜分析外泌体的颗粒形貌、分散度;利用纳米粒度分析仪分析外泌体粒径分布和数量;利用血浆外泌体诱导血管成管实验,检测冻干后血浆外泌体诱导血管生成的能力;免疫印迹分析储存不同时间的外泌体上的标志蛋白CD63和CD81的表达情况;利用激光扫描共聚焦分析不同储存时间的外泌体被C2C12细胞摄取的能力。结果:50、100、200 mmol/L赖氨酸可以维持冻干293细胞外泌体完整性,但是不同浓度赖氨酸都无法解决外泌体冻干时的聚集问题。5%菊糖在冻干外泌体的分散度上表现良好,但是造成外泌体膜破损。4%乳糖和2%海藻糖可以维持外泌体形貌完整并保持外泌体分散度,并且保护效果相当。2%海藻糖冻干后血浆来源外泌体能诱导血管内皮细胞成管。将外泌体用2%海藻糖冻干后室温储存1 d、1周和1个月,和-80 ℃组外泌体相比,冻干外泌体仍然保持原有的形貌和分散度,不会改变外泌体的粒径分布,外泌体总颗粒数也没有差异（P＞0.05）,并且总颗粒数显著高于不加冻干保护剂组（F＝28.8,P＜0.001）。常温条件下储存1个月,和-80°C组外泌体相比,冻干外泌体标志蛋白CD63和CD81表达水平没有差异,而不加海藻糖的外泌体CD81和CD63蛋白表达水平明显下降。添加2%海藻糖冻干后的外泌体常温储存不同时间后依旧能被细胞摄取,不会影响外泌体作为纳米载体的进入细胞的固有属性。结论:2%海藻糖可作为外泌体的冻干保护剂,为外泌体的运输和长期储存提供可行的方案。     

肝动脉插管化疗栓塞治疗中晚期肝癌的术后护理

我们自1994年1月～1999年12月,对104例中晚期肝癌患者肝动脉插管化疗栓塞(ＴＡＥ)后的病人进行了严密的观察和护理,获得了满意的疗效,现报道如下。1　临床资料1.1　一般资料　本组104例,男86例,女18例,年龄37～67岁,平均48.5岁。全组均有临床检查,ＡＦＰ测定,并经Ｂ超、ＣＴ确定最后诊断,确认手术困难或不能切除的中、晚期肝癌患者,其中肝细胞癌96例,胆管细胞癌8例。1.2　治疗方法　采用Ｓｅｌｄｉｎｇｅｒ法行选择性肝动脉插管化疗栓塞(ＴＡＥ),先行肝动脉造影了解肿瘤大小、位置、类型及供血动脉情况。根据肿块大小取40%碘化油(肿瘤直径1…     

Trim72基因在肝癌转移中的功能研究

目的 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术验证与非小细胞肺癌转移相关的Trim72基因的敲除是否引起肝癌转移能力的变化.方法 建立稳定表达Cas9蛋白的小鼠肝癌细胞系Hepa1-6(Cas9),随后利用针对Trim72基因的单导向RNA(sgRNA)进行特异性基因敲除获得Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系,再通过体外Transwell实验和体内皮下瘤肺转移检测评估该细胞系的迁移和侵袭能力.结果 利用CRISPR-Cas9系统成功获得了Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系.Transwell实验结果表明,敲除Trim72基因后,Hepa1-6(Cas9)细胞系的体外迁移和侵袭能力增强;体内皮下瘤肺转移病理检查结果显示,Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系(实验组)所成皮下瘤的体内转移能力明显强于未转入相应sgRNA的Hepa1-6(Cas9)细胞系(对照组).结论 通过CRISPR-Cas9系统成功获得了敲除Trim72基因的Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系,该细胞系表现出较Hepa1-6(Cas9)细胞系更强的侵袭和转移能力,说明Trim72基因可能在肝癌的侵袭和转移中起重要作用,有望成为肝癌基因治疗的潜在靶点.     

诱导型狨猴肝纤维化模型的建立

目的：建立诱导型狨猴肝纤维化模型。方法：手术切除普通狨猴部分肝脏,通过腹腔注射二乙基亚硝胺（DENA-2.5 mg/kg）,并利用体质量和肝功能检测、病理分析、免疫组化,胶原染色和B超小动物活体成像等手段进行监测。结果：手术切除肝脏促使狨猴肝脏再生,并伴随肥大和炎症反应;DENA药物诱导会引发与人类类似的肝脏炎症,肝脏胶原聚集和血管增生,最终导致狨猴肝脏纤维化。结论：手术切肝联合DENA化学诱导可以成功获得狨猴肝纤维化模型。     

食管支架置入术的围手术期护理

近年来,镍钛合金支架置入术治疗食道狭窄已广泛应用于临床[1],并取得较好疗效.该法对良、恶性食道狭窄[2],尤其对合并食道气管瘘的患者能迅速缓解其吞咽困难和呛咳等症状[3],提高生活质量.     

负载化疗药物的外泌体对肝癌的靶向治疗研究

目的:在小鼠肝癌皮下瘤模型中探究肝癌靶向肽介导负载甲氨蝶呤（MTX）的肝癌细胞来源外泌体（tumor-derived exosome-TEX）的抗肿瘤效果及不良反应。方法:利用超速离心法收集负载MTX的小鼠肝癌细胞来源的外泌体（TEXMTX）;利用外泌体特异锚定短肽CP05将肝癌靶向肽SP94修饰在TEXMTX表面,活体成像检测靶向肽修饰的TEXMTX能否高效靶向肝癌组织;通过尾静脉注射荷瘤鼠,评估该靶向肽修饰的TEXMTX的抑瘤效果,同时检测治疗后各组小鼠血生化指标及组织形态学染色,评估该药物生物安全性。结果:负载MTX并不影响外泌体的基本结构和形态特征; SP94可将TEXMTX高效靶向运输到肿瘤部位;在皮下抑瘤实验中,与PBS组相比,SP94-CP05-TEXMTX能够显著抑制小鼠肝癌皮下瘤的生长（t=5.811,P＜0.01）,与MTX组和TEXMTX组相比,SP94-CP05-TEXMTX组肿瘤体积也显著减小（t=2.573、3.152,均P＜0.05）;血生化指标和病理指标显示,与PBS组相比, MTX组和TEXMTX组小鼠血清谷草转氨酶水平显著升高（t=7.084、5.260,均P＜0.05）。与MTX组和TEXMTX组相比,SP94-CP05-TEXMTX组小鼠谷草转氨酶水平显著下降（t=6.241、4.955,均P＜0.05）;SP94-CP05-TEXMTX组与MTX组相比,小鼠血清肌酸激酶水平也显著下降（t=5.073,P＜0.05）。结论:肝癌靶向肽修饰的TEXMTX可将MTX靶向运输到肝细胞癌组织,有效抑制肿瘤生长,提高化疗药物的生物安全性。