PCR检测龈下菌斑中齿垢密螺旋体与牙周组织破坏的关系

目的　建立龈下菌斑标本中齿垢密螺旋体PCR临床快速检测方法 ,了解齿垢密螺旋体感染与慢性牙周炎牙周组织破坏程度之间的关系。方法　 81例慢性牙周炎患者每例采取 2个不同患牙牙位的龈下菌斑标本 ,用终浓度为 1%的TritonX 10 0 10 0℃水浴 10min处理标本以制备DNA模板 ,用PCR检测标本中齿垢密螺旋体特有的相对分子质量 (Mr)为 5 3× 10 3 外膜蛋白基因 (tdpA)扩增片段。结果　 6 7例患者 ( 82 .7% )的 2份龈下菌斑标本齿垢密螺旋体tdpAPCR均为阳性 ,9例患者( 11.1% )的其中 1份龈下菌斑标本可见目的扩增片段 ,5例患者 ( 6 .2 % )的 2份龈下菌斑标本PCR均为阴性 ,16 2例龈下菌斑PCR检测总阳性率为 88.3% ( 143 16 2 )。牙槽骨吸收 >2 3和牙周袋深度≥7mm患牙龈下标本的PCR阳性率较高 (P <0 .0 5 ) ,牙龈指数与PCR阳性率无明显关系 (P >0 .0 5 )。结论　PCR检测tdpA基因可用于慢性牙周炎龈下标本中齿垢密螺旋体的临床快速诊断 ,齿垢密螺旋体感染与牙周组织破坏密切相关。     

牙龈卟啉单胞菌菌毛相关外膜蛋白pgmA基因的克隆和表达

目的:克隆牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)pgmA基因,构建pgmA基因表达载体,鉴定其表达产物的免疫性.方法:采用高保真PCR分别从牙龈卟啉菌ATCC 33277和47A-1菌株中扩增pgmA基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET32a的pgmA表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达,采用兔抗融合蛋白血清的Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性,采用ELISA 检测65株临床分离牙龈卟啉单胞菌与PgmA融合蛋白抗血清的反应情况.结果:所克隆的牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277与47A-1菌株pgmA基因的核苷酸序列同源性为100%,与报道的相应核苷酸序列同源性为98.98%,氨基酸序列同源性高达99.18%.pET32a-pgmA-BL21DE3系统的PgmA融合蛋白表达量为细菌总蛋白的50%左右.PgmA融合蛋白免疫家兔能获得相应抗体并与PgmA蛋白发生结合反应.ELISA结果证实92.3%的牙龈卟啉菌临床菌株(60/65)能与PgmA融合蛋白抗血清发生结合反应.结论:本研究成功地构建了Pg pgmA高效表达系统,所表达的PgmA融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性,可作为Pg检测试剂盒和Pg疫苗的候选抗原.     

慢性牙周炎龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白A的水平与牙周病变程度关系的研究

目的检测慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)患者龈下菌斑标本中牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白A(porphyromonas gingivalis outer membrane protein A,PgmA),了解PgmA水平与牙周病变程度的关系。方法采用SDS-PAGE检测原核表达系统重组PgmA(rPgmA)表达和Ni-NTA亲和层析法提取的rPgmA纯度,rPgmA免疫家兔获得抗血清,建立ELISA检测56例CP患者209个龈下菌斑标本中的PgmA,并分析PgmA水平与牙周病变程度的关系。结果rPgmA表达产量约为细菌总蛋白的50%。提纯的rPgmA SDS-PAGE后仅见单一的蛋白条带。90.0%的龈下菌斑标本(188/209)PgmAELISA阳性。重度CP龈下菌斑标本中PgmA含量明显高于轻度CP标本(P<0.05),但轻度和中度、中度和重度CP标本之间PgmA含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢性牙周炎病变程度与龈下PgmA水平有关,PgmA可能是Pg毒力因子之一。     

应用PCR检测慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌及感染菌株基因型的分析

目的建立慢性牙周炎(CP)龈下标本中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, Pg)的PCR检测方法,了解不同患牙龈下菌斑中Pg基因型的差异. 方法采用培养法分离不同患牙龈下菌斑中Pg,同时采用 PCR进行Pg 16S rDNA基因、prtC基因和fimA基因的检测.部分扩增产物T-A克隆后测定核苷酸序列. 结果 61例患者122个龈下菌斑标本中,Pg 16S rDNA、prtC和fimA分别扩增的阳性率依次为 90.6%、81.9%和78.0%,联合扩增的阳性率高达98.4%,培养法阳性率仅为 31.1%.30.0%(18/60)患者不同牙位龈下菌斑中的Pg基因型不一致.Pg 16S rDNA、prtC和fimA扩增片段与文献报道的核苷酸序列比较,同源性为98.62%～100%. 结论所建Pg PCR检测方法具有较高的敏感性和特异性,可用于慢性牙周炎龈下标本中Pg的快速临床诊断.部分CP患者可被不同基因型的Pg菌株同时感染.     

胰岛素样生长因子2对小鼠成骨样细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子2(IGF-Ⅱ)对成骨细胞一氧化氮(NO)水平和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA转录水平的影响。方法 采用小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1作为IGF-Ⅱ效应的细胞模型。不同浓度IGF-Ⅱ作用于MC3T3-E1细胞72 h后,采用硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO浓度,半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞iNOSmRNA水平。结果 100 ng/mL IGF-Ⅱ作用72 h的细胞,其上清液中NO水平下降(P<0.01),iNOS mRNA水平也降低(P<0.01)。结论 100 ng/mL IGF-Ⅱ能降低MC3T3-E1细胞NO水平,下调其iNOS mRNA转录水平。100 ng/mL IGF-Ⅱ在转录水平下调MC3T3-E1细胞iNOS基因的表达,可能是IGF-Ⅱ维持MC3T3-E1细胞低水平NO的机制之一。     

人巨细胞病毒糖蛋白B基因的分型

目的建立人巨细胞病毒(HCMV)糖蛋白B(gB)基因的套式聚合酶链反应(nPCR)加限制性长度多态性分析(RFLP)的分型方法。方法34例HCMV感染患儿的11份全血标本和23份尿标本，用nPCR扩增gB基因片段，RFLP对gB基因进行分型，并通过测序进行验证。结果34例HCMV感染患儿中，检出gBⅠ型13例，gBⅡ型12例，gBⅢ型9例，未发现gBⅣ型。测序结果与基因库中相应的标准株序列进行比较，Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型的同源性分别为98．1％～99．6％、98．9％～100％、97．3％～98．9％。结论nPCR检测HCMV感染敏感特异，RFLP对HCMV的gB基因分型明确可靠。     

牙周炎患者唾液一氧化氮的含量及其与牙周病指标相关性的研究

目的：研究牙周炎患者唾液一氧化氮（ＮＯ）的含量,及其与牙周病各临床指标的相关性。方法：选择成人牙周炎患者２３例为实验组,健康人２７例为对照组。记录牙周炎患者的牙龈出血指数（ＧＢＩ）、牙周袋深度（ＰＤ）和附着丧失量（ＡＬ）。ＮＯ的含量由检测唾液亚硝酸盐的含量来代表。测定实验组和对照组所有病例的唾液ＮＯ的含量。结果：对照组唾液ＮＯ的含量为２８．８０６±６．６０４μｍ／Ｌ,男女间无显著性差异。实验组唾液ＮＯ的含量为５５．３６１±１３．３１９μｍｏｌ／Ｌ,明显高于对照组。牙周炎患者唾液ＮＯ的含量与ＰＤ、ＡＬ间存在明显的正相关。结论：牙周炎患者唾液ＮＯ的含量显著高于健康人,并与牙周炎的严重程度有关。     

冷光美白结合微磨损技术治疗氟斑牙疗效初探

目的：观察并评估冷光美白结合微磨损技术治疗氟斑牙的临床效果。方法：28例中度氟斑牙分别采用：A组单纯Beyond冷光美白治疗（5例）;B组Beyond祛氟剂处理结合冷光美白（10例）;c组酸蚀、微量打磨着色部位后冷光美白（13例）。观察美自效果与牙敏感情况。结果：临床美白效果c组〉B组〉A组（P〈0．05）,总有效率96-4％。牙敏感发生率C组〉Bgt〉A组（P〉0．05）。结论：Beyond冷光美白技术联合应用微磨损技术,在中度氟斑牙的美自治疗中有很好的应用前景。     

慢性牙周炎患者龈下菌斑中伴放线放线杆菌基因型的分析

目的：建立龈下菌斑标本中伴放线放线杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans，Aa）PCR检测方法，了解慢性牙周炎患者不同牙位的龈下菌斑中Aα 的感染率及其优势基因型。方法：61例慢性牙周炎患者每例采取2个不同牙位共122份龈下菌斑标本，采用培养法分离Aα菌株，以PCR或多重PCR检测16SrDNA基因、lktA基因和fap基因，部分扩增产物克隆后测序。结果：在11例患者的11份龈下菌斑标本中分离到Aα菌株。122份龈下菌斑中Aα16SrDNA、lktA、和fap检测阳性率分别为84.4%、75.4%、和50.0%。38.8%的患者（19/49）不同牙位龈下菌斑中检出的Aα基因型不一致。Aα有4种基因型，其优势基因型是16SrDNA^ /lktA^ /fap^ ，其次为16SrDNA^ /lktA^ /fap^-。部分标本上述3种基因的扩增片段与文献报道核苷酸序列的同源性为93.75%-100%。结论：建立的PCR或多重PCR有较高的敏感性和特异性，适用于龈下菌斑标本中Aα的快速检测。慢性牙周炎患者Aα感染率较高，并存在优势基因型，部分患者可被不同基因型的菌株同时感染。     

重度慢性牙周炎牙周综合治疗四年一例

慢性牙周炎在我国有较高的发病率,因早期症状不明显往往被患者忽视,很多患者就诊时牙齿已松动、移位或脱落,错过了最佳治疗时机.菌斑、牙石是慢性牙周炎的主要致病因素,经过系统的牙周综合治疗,有效控制牙菌斑形成,许多患牙可以保存.浙江大学医学院附属第二医院口腔内科对一例重度慢性牙周炎伴药物性牙龈增生并有前牙移位的患者进行了牙周综合治疗,经4年纵向观察疗效满意,报告如下.