葡萄球菌蛋白A"ZZ"与EGFP的融合表达及活性测定

目的 将EGFP基因与葡萄球菌蛋白A（SPA）基因的龙结构域重组，尝试以融合标记的方式构建一种新型免疫亲和试剂。方法 利用基因工程技术将EGFP基因重组至pEZZ18质粒，构建原核分泌表达载体pEZZ-EGFP，通过竞争ELISA和荧光光谱测定其在大肠杆菌中表达产物ProZZEGFP的生物学活性。结果 pEZZ-EGFP在E．coli HB101中正确表达，所表达融合蛋白具有与哺乳动物IgG抗体结合的生物学活性和EGFP的荧光活性。结论 ProZZ—EGFP融合蛋白有忽结构域（SPA）和EGFP二者生物学特性，在免疫荧光测定中可作为一种通用亲和试剂。     

绞股蓝多糖的提取纯化和含量测定

通过正交设计实验,综合考虑提取效率和成本,优化了绞股蓝多糖的提取方法,并对绞股粗多糖进行了初步纯化,测定了提取物的糖含量,其含量水平较前有明显提高,这将为绞股蓝进一步开发生产奠定基础。     

生物技术制药课程教学改革的探索与实践

笔者在生物技术制药课程教学中突破教材内容限制,重建课堂教学模块;注重文献阅读,引入“以文献为导向的自我学习”教学模式,加强学生科研思维训练;改进传统实验教学模式,设置生物技术制药综合性实验,强化实验技能、综合技能训练;实践证明我们进行的教学改革与探索对提高生物技术制药课程的教学质量及培养学生的科研技能等方面起到了积极的推动作用.     

地高辛血药浓度测定方法的应用与分析

查阅近年来国内外地高辛血药浓度测定的相关文献，进行分类整理并总结地高辛血药浓度的检测分析方法，为满足不同临床检测需求选用合适的测定方法起一定参考作用。     

ProZZ-EGFP融合蛋白基因在大肠杆菌中分泌表达条件的优化

目的优化大肠杆菌分泌表达ProZZ-EGFP融合蛋白基因的培养条件。方法采用摇瓶培养,在液体培养基中加入终浓度不同的蔗糖、Triton X-100和甘氨酸,诱导大肠杆菌周质腔内蛋白质“泄漏”到液体培养基中,利用ProZZ-EGFP浓度-荧光强度标准曲线快速检测培养基中目的蛋白质浓度。结果利用大肠杆菌HB101表达ProZZ-EGFP融合蛋白,在培养基中含有终浓度1%Triton X-100及1%甘氨酸,可使ProZZ-EGFP在培养液的分泌表达量提高6倍。结论仅在培养基中加入几种物质即可提高ProZZ-EGFP融合蛋白的分泌表达量,简单易行。     

TBL教学模式在生物技术制药实验教学中的应用实践

TBL教学模式是以团队为基础、学生为主体的一种新型教学模式,在提高学生实验兴趣及培养学生创新思维等方面具有传统实验教学模式不可比拟的优点.将TBL教学方法引入生物技术制药实验教学,不仅有利于培养学生的创新科研思维和团队协作精神,也提高了学生的学习主动性和分析、解决问题能力.本文就TBL教学模式在生物技术制药课程实验教学中的应用及实施等方面做一简要介绍.     

大肠杆菌碱性磷酸酶在E.coli BL21(DE3)中的胞内可溶性表达

目的 构建原核表达载体pEAP,在E.coil BL21(DE3)中实现大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase,EAP)的胞内可溶性表达,为进一步研究工程菌的大体积培养条件、提高其表达量提供理论基础.方法 以质粒pDAP2为模板扩增不含信号肽的EAP基因,克隆至pGreen-S质粒构建表达载体pEAP,以E.coli BL21(ED3)菌株表达EAP,采用SDS-PAGE及EAP酶活性测定对表达产物的可溶性及胞内定位进行分析;Ni2+亲和层析方式纯化目的蛋白并测定其比活力.结果 经PCR、双酶切及测序分析证实载体构建正确,所表达目的蛋白主要以可溶性形式存在于BL21(ED3)菌体细胞质,其相对分子量与理论值相符(47kD)且具有EAP催化活性;目的蛋白经His Trap亲和层析纯化后,其电泳纯度在90％以上,酶比活力可达358.6 U/mg.结论 成功构建pEAP质粒表达载体,目的蛋白在BL21(ED3)菌株胞内主要以可溶性形式表达,为进一步更经济、高效制备EAP奠定了一定的实验基础.     

现代生物技术在中药鉴定中的应用

中药是一个巨大的宝库,在我国有几千年的应用历史.中药品种繁多,其疗效与药材品质密不可分;为保证用药的安全有效,需对药材的真伪、优劣作出准确的判断.中药鉴定的样品复杂,有完整的药材,有碎块、饮片和粉末等,中药鉴定的方法亦多种多样.常用的鉴定方法有来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定及理化鉴定等,这些方法在保证临床用药安全有效等方面有着不可代替的重要作用,对推动中药鉴定学的发展也有非常重要的影响.近年来,随着现代生物技术的发展,许多新学科理论和试验技术不断渗透到中药鉴定领域.     

医学院生物化学课实施双语教学的探讨

高等学校推行双语教学,是现代教育适应社会发展需要的必然趋势。本文结合我院双语教学的实践,提出了医学院生物化学课实施双语教学存在的问题,以及几点改进建议。     

ZZ亲和肽在大肠杆菌中的表达及IgG抗体亲和活性测定

目的:ZZ亲和肽是源于葡萄球菌蛋白A的人工合成序列,能结合IgG抗体Fc段,在免疫学领域具有广泛的应用价值。本研究利用大肠杆菌表达C端带有6×His标签的ZZ亲和肽,并测定其生物学活性。方法:以pEZZ18为模板PCR扩增ZZ亲和肽基因,克隆至pUC18载体的EcoRⅠ/HindⅢ位点构建pUC-ZZ表达载体。利用大肠杆菌表达C端带有6×His的ZZ亲和肽,表达产物经Ni亲和层析纯化,利用竞争ELISA测定其与IgG抗体的亲和活性。结果:成功构建pUC-ZZ表达载体,SDS-PAGE显示ZZ亲和肽的Mr为16×103,与兔IgG抗体相对亲和常数为Ka≌1.45×108L/mol。结论:ZZ亲和肽基因成功在大肠杆菌中表达,具有与IgG抗体结合活性,为ZZ亲和肽的进一步开发利用奠定了基础。