不同固定方法对冰冻切片间接免疫荧光结果的影响

目的：寻找一种冰冻切片间接免疫荧光染色以及HE染色过程中最佳的组织固定方法。方法：取健康成年小鼠双侧睾丸冰冻切片,分别采用3种方法进行固定：①丙酮4℃固定15分钟,-20℃保存24h;②95％酒精4℃固定15分钟,-20℃保存24h;③切片-20℃保存24h后,再用4℃丙酮固定15分钟。然后做间接免疫荧光和HE染色,观察组织结构及染色情况。结果：4℃丙酮固定的组织切片HE染色以及间接免疫荧光效果良好。-20℃保存24h后,4℃丙酮固定15分钟的冰冻切片HE染色和间接免疫荧光结果最差。结论：酒精和丙酮都可以固定组织,但是4℃丙酮固定效果最好。     

神经生长因子在食管鳞癌细胞中的表达及分泌

目的 探讨神经生长因子（NGF)与食管鳞癌细胞分化的相关性。方法 采用有限稀释法分选出圆形和梭形单细胞克隆,采用无血清悬浮培养获得细胞球细胞, 贴壁的Eca109细胞分别在含血清和不含血清培养基中培养48h;分别采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR)技术和免疫印迹法,检测NGF在食管鳞癌细胞中mRNA水平和蛋白水平的表达;免疫荧光技术检测NGF在食管鳞癌细胞中的表达定位;免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中NGF的表达定位;用酶联免疫吸附法（ELISA）检测NGF在Eca109细胞培养基中的分泌情况。结果 在Eca109细胞中能检测到NGF的mRNA水平和蛋白水平的表达,其中NGF在细胞球细胞中的mRNA水平和蛋白水平的表达量最高。食管癌组织中检测到NGF表达于细胞质。Eca109细胞在无血清培养条件下能够分泌NGF,且明显高于含血清培养基中的含量。结论 食管癌细胞系Eca109表达并分泌NGF,并且食管癌组织中表达NGF,NGF可能在维持食管鳞状细胞癌的干细胞特性发挥了重要作用。     

转录因子Oct-4在宫颈癌中的研究进展

<正>宫颈癌(cevical cancer,CC)是全球妇女中仅次于乳腺癌的第二个最常见的恶性肿瘤,占据所有癌症的十分之一〔1〕。近年来宫颈癌发病人数在逐渐增多并呈现年轻化趋势,2005年世界范围内宫颈癌新发病例约50万,预计2050年宫颈癌新发病例将超过100万,发病率最高的地区是拉丁美洲、非洲撒哈拉     

二十二例森林脑炎的临床分析

森林脑炎(Russion springsummer encephalitis)是一种由蜱传播的自然疫源性疾病,属于中枢神經系统的急性传染病。1935年苏联病理学家在苏联东部首次报道。我国董祥家等人于1953年通过两年的流行病学和临床观察,证实了森林脑炎在我国东北部确实存在,并与苏联春夏季脑炎的病原体属于同一类型。新疆地区,自1957年首次发现3例森林脑炎后,不断出现散发病例。1972年,石河子地区沙湾,玛纳斯两县毗邻的天山林区,突然爆发了一次森林脑炎的流行。石河子地区卫生防疫站等有关部门曾对本病进行了大量细致的调查研究,并证实在乌鲁木齐、昌     

白血病干细胞和骨髓基质细胞共培养的方法学探讨

目的 探讨白血病干细胞和骨髓基质细胞共培养的可行方法及扩增白血病干细胞的特点.方法 体外用两种方法共培养急性髓系白血病（AML）患者的骨髓单个核细胞（MNCs）：一种方法是将MNCs中的贴壁基质细胞单独培养,第2代或第3代基质细胞用丝裂霉素处理后做饲养层,再同悬浮造血细胞共培养;另一种方法是将MNCs持续培养即原代共培养.观察MNCs形态学特征、长期存活情况及增殖特性,用流式细胞仪检测分析细胞表面标志.结果 两种方法共培养的细胞部分可以长期存活,在共培养中有卵石样区域细胞及悬浮细胞团的形成.原代共培养的细胞所形成的卵石样区域数目多,排列规律.结论 两种方法都可以起到扩增白血病干细胞的作用.同经过丝裂霉素处理之后的饲养层相比,没有经过处理的骨髓基质细胞在共培养时能够更有效地扩增白血病干细胞.     

Oct-4在骨髓基质细胞定向诱导分化中表观遗传学研究

目的检测Oct-4基因在BMSCs定向诱导分化中表观遗传学变化(即甲基化变化)。方法体外分离培养小鼠BMSCs,用成骨诱导剂(地塞米松,维生素C和β-甘油磷酸钠)诱导其向成骨细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR,检测OCT-4在小鼠BMSCs诱导分化前后的表达;运用甲基化特异性PCR检测Oct-4在小鼠BMSCs诱导分化前和分化后10 d的甲基化变化。结果 Oct-4在小鼠BM-SCs诱导前有表达,诱导10 d后表达下降;Oct-4在小鼠BMSCs诱导前未发生甲基化改变,诱导10 d后检测到其甲基化状态。结论 Oct-4在小鼠BMSCs诱导分化前后有甲基化状态的改变,且甲基化水平与表达呈负相关,提示Oct-4基因在小鼠BMSCs定向诱导分化中的表达下调可能是由于其启动子区高度甲基化的缘故。     

44 大鼠肥大细胞发育分化的初步观察

<正>肥大细胞的来源尚无定论,我们拟进行探索.阴栓龄14、15天的Wistar胎鼠,横断其胸腹部,整块固定于4%多聚甲醛液内过夜.17～20天胎鼠及生后1天者,直接取其右侧睾丸和胸腺.生后5、10、20及40天幼鼠先经心脏灌流上述固定液半小时后,再取其睾丸和胸腺固定于同液内过夜.动物均购自中国医学科学院实验动物中心.按常规石蜡包埋,切片5μm厚,脱蜡至70%酒精,0.2%甲苯胺兰(60%酒精配制)染1分钟,蒸馏水速洗,滤纸吸去水份,甲醇脱水2次,各2分钟,透明、封固、观察.结果:14～15天胚胎胸腹部各器官内间充质繁殖旺盛,有些部位细胞排列紧密,没有看到肥大细胞.胚胎17天时,胸腺已发育良好,小叶结构明显.小叶间隔结缔组织内出现数个肥大细胞,体积小呈椭圆形,核圆而谈染,呈浅蓝色,细胞质中含有深紫红色的圆形异染性颗粒.胚胎19天时,胸腺附近的骨骼肌结缔组织内也出现几个肥大细胞,而软骨膜上则没有.生后1天时,胸腺实质内开始出现同个体积小的肥大细胞,小叶间隔内的肥大细胞体积增大,数量增多,扩展至被膜下.其后至40天数量渐多.但同时期的睾丸内却没有肥大细胞的出现.本结果提示,肥大细胞先在中枢免疫器官——胸腺内出现,表示其与免疫作用关系密切,以后才在其他器官内陆续出现.在胸腺内先于小叶间隔,后于实质内出现.而与免疫无     

RT-PCR技术检测石蜡包埋恶性生殖细胞肿瘤．组织中Oct4的表达

目的：用逆转录PCR技术（RT-PCR）技术从石蜡包埋的恶性生殖细胞肿瘤组织中检测Oct-4基因（目的片段）的表达。方法：用Trizol法从上述3种肿瘤组织抽提总RNA,取出1μl作为模板进行反转录合成cDNA第一链,然后进行PCR反应。PCR产物用1．2％的琼脂糖凝胶电泳检测。结论：RT—PCR技术可以检测石蜡包埋肿瘤组织Oct．4基因。     

留学生组织学教学体会

组织学是医学生必修的基础课程之一,是研究人体细微结构、超微结构及其相关功能的学科,其作为连接解剖学与生理学、病理学等的桥梁,起着举足轻重的作用,因此,如何结合留学生的特点做好组织学的教学工作,是摆在我们面前的一个新课题。我院自2002年起开始招收临床医学专业巴基斯坦留学生,组胚教研室从第一批留学生入校,     

42 大鼠出生前后睾丸中两种中间丝蛋白的免疫组化观察

<正>本文旨在探讨细胞角蛋白和波蛋白在大鼠发育中睾丸内的表达,特别是在支持细胞内的表达.阴栓龄17～20天的Wistar胎鼠和生后1、5、10、15、20和40天的幼鼠购自中国医学科学院实验动物中心,生后1天的仔鼠及胎鼠取右侧睾丸于4%多聚甲醛中浸泡固定.生后5天以上的幼鼠先经心脏灌流固定,再取睾丸浸泡固定.石蜡包埋后组织块作5μm厚切片.PAP法或ABC法显示细胞角蛋白,Biotin-Streptoavidin法显示波蛋白.兔抗牛角蛋白多克隆抗体和小鼠抗猪波蛋白单克隆抗体均为DAKO公司产品.结果如下:(1)17天龄胎鼠睾丸可见两种中间纵蛋白的表达.角蛋白主要见于表面上皮,纵隔及其附近的睾丸索(testicular cords)内的上皮细胞以及其它睾丸索的支持细胞.在纵隔以外的睾丸索,角蛋白的反应弱,只见于支持细胞的核下区.波蛋白分布于白膜、问质及血管内皮.在睾丸索内则分布在支持细胞的核下区.(2)随年龄增长,睾丸索内支持细胞的角蛋白表达减弱.纵隔及其附近的睾丸索除外,它们发展成为直细精管和睾丸网.生后15天以后,睾丸索(曲细精管)支持细胞的角蛋白用PAP法已不能显示.(3)用ABC法,在出生后15天以上的曲细精管内确可见到少数角蛋白阳性细胞,大多数支持细胞的波蛋白表达增强.本结果提示,支持细胞可能有两种类型.随着发育,大多数支持细?