肝癌患者血清和腹水可溶性肿瘤坏死因子受体-p55的测定

目的 进一步了解肝癌患者的异常免疫状态,探讨血清、腹水中可溶性肿瘤坏死因子受体-p55（sTNFR-p55）检测的临床意义。方法　以双单抗夹心酶免疫吸附法检测了25例肝癌患者和25例肝硬化患者的血清、腹水中血清sTNFR-p55水平并以正常人为对照。结果肝癌病人血清sTNFR-p55浓度[（0.74±0.50）ng/ml]显著高于正常人[（0.37±0.03）ng/ml]和肝硬化患者和[（0.35±0.02）ng/ml],P<0.01。肝癌病人腹水sTNFR-p55浓度[（1.11±1.25）ng/ml]亦显著高于肝硬化患者[（0.33±0.03）ng/ml],P<0.01。肝癌、肝硬化患者血清与腹水的sTNFR-p55水平显著相关。肝癌患者血清sTNFR-p55水平与外周血TBil和AFP呈正相关（r=0.524,P=0.01和r=0.234,P=0.03）。结论　sTNFR-p55的检测对反映肝癌患者的异常免疫状态和肿瘤诊断具有实用价值。     

上皮型钙粘蛋白与大肠癌临床病理因素的关系

目的探讨上皮型钙粘蛋白（Ｅ一ｃａｄｈｅｒｉｎ,Ｅ－ＣＤ）在大肠癌中的表达与其临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学的方法研究大肠癌组织标本Ｅ－ＣＤ的表达情况。结果Ｅ－ＣＤ在正常大肠粘膜上皮组织均保留表达;而在大肠癌标本中的保留表达率为６６.７％ （７０／１０５）。结论与其它肿瘤相比较,Ｅ－ＣＤ在大肠癌中的减弱表达率较低,但是Ｅ－ＣＤ的减弱表达与大肠癌患者的年龄、病理组织学分化程度、临床Ｄｕｋｅｓ分期有显著的相关性,可以作为肿瘤预后的一个指标。     

肿瘤环死因子受体Ⅰ、Ⅱ在肝癌中的表达及临床意义

目的：探讨肿瘤坏死因子受体Ⅰ、Ⅱ（TNFRⅠ、Ⅱ）在肝癌组织中的表达。方法：用免疫组织化学SABC法检测30例肝癌组织、癌旁组织及14例正常肝组织中TNFRⅠ、Ⅱ的表达。结果：肝癌组织中TNFRⅠ、Ⅱ表达均比癌旁组织及正常组织显著高表达（P〈0．05），且癌旁组织TNFRⅠ、Ⅱ表达亦显著高于正常组织（P〈0．05）。结论：TNFRⅠ、Ⅱ检测对判断肝癌异常免疫状态有重要价值。     

生长激素对肝脏胰岛素信号的时间程序性效应

目的:生长激素和胰岛素间的相互作用关系有待于进一步的研究。本研究首次同时检查在个体(小鼠)和细胞培养水平上,生长激素作用对肝脏胰岛素信号的时间效应关系。方法:小鼠分别注射重组人生长激素(rh GH)30 min,4 h,3周,取肝组织,提取蛋白,western blot检测胰岛素信号变化。人肝癌细胞系Hep G2分别给予rh GH刺激30 min,4 h,裂解前10 min再分别予胰岛素刺激,裂解细胞提取蛋白,western blot检测胰岛素信号变化。结果:rh GH预刺激小鼠30 min后,肝组织的基础Akt磷酸化水平明显升高,处死前10 min胰岛素刺激产生的Akt磷酸化水平则没有变化;rh GH预刺激小鼠4 h后,无论是肝组织的基础Akt磷酸化水平还是处死前10 min胰岛素刺激产生的Akt磷酸化水平都没有变化;而rh GH预刺激小鼠3周时,无论是肝组织的基础Akt磷酸化水平还是处死前10 min胰岛素刺激产生的Akt磷酸化水平都降低。然而在Hep G2细胞培养试验中,4 h生长激素预刺激则足以导致Akt磷酸化的抑制。结论:生长激素对胰岛素信号的作用规律是,急性(短时)生长激素作用时可产生正向激活作用;随着生长激素作用时间的延长,其效应逐渐变为抑制作用,也即Akt的磷酸化水平从作用开始时(几十分钟时间内)升高,随着时间延长后逐渐降低。但这个变化过程在动物水平上的表现远比细胞水平的慢,这可能体现了生理情况下多信号通路间相互作用的复杂性。     

Rac1-siRNA表达质粒的构建及Rac1对SW480细胞单克隆形成的影响

目的 构建针对Rac1的siRNA表达载体,并观察其对大肠癌SW480细胞中Rac1蛋白表达的抑制作用,同时研究Rac1蛋白表达抑制后细胞在体外软琼脂糖中单克隆形成情况.方法 化学合成用于产生针对Rac1的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入线性化的pSUPER载体的H1启动子下游.重组载体经限制性酶切和测序.把构建的载体转染大肠癌细胞系SW480,观察其对Rac1蛋白表达的干扰作用,软琼脂糖体外克隆形成实验研究SW480抑制Rac1蛋白表达后的效果.结果 限制性酶切和序列测定表明成功构建了可以表达针对Rac1的发卡状RNA表达载体,该载体表达的发卡状RNA在SW480细胞中能够有效的下调Racl蛋白的表达.体外软琼脂单克隆形成实验显示,抑制Rac1蛋白表达后,形成的单克隆数目明显减少,直径也明显缩小.结论 成功构建了针对Rac1的发卡状RNA表达载体;体外软琼脂单克隆实验表明Rac1蛋白对SW480细胞克隆形成数目及大小有明显影响,说明Rael蛋白在大肠癌的体外生长过程中具有重要作用.     

p21活化激酶1基因在大肠癌细胞中的表达及意义

目的 探讨p21活化激酶l（PAK1）基因在大肠癌细胞中的表达及意义。方法 运用免疫印迹技术检测PAK1基因在8株不同转移和恶性潜能大肠癌细胞（LoVo、SW480、SW620、SW1116、HT29 HCT116和CO-LO320细胞）中的表达。结果 与HCT116、HT29、SW480、SW1116和LST细胞相比,PAK1在LoVo、COLO320和SW620大肠癌细胞中蛋白表达明显增加,而HT29和SW480细胞中的PAK1蛋白表达亦强于SW1116和LST细胞,但PAK1在SW1116和LST细胞几乎无表达。结论 PAK1蛋白过度表达可促进大肠癌的发生、发展,且可能与大肠癌的恶性生物学表型密切相关。     

靶向抑制存活素基因对大肠癌细胞SW80侵袭和转移的实验研究

目的 构建靶向存活素(survivin)基因的短发夹干扰RNA(shRNA)表达载体,导入人大肠癌细胞SW480中,研究靶向抑制survivin基因对SW480细胞侵袭和转移的影响.方法 根据siRNA设计原则,在survivin序列中选取设计含19个核苷酸(19 nt)的靶序列,间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,形成shRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo中,获得靶向抑制survivin基因的sihNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin;采用Lipofectamine 2000TM转染试剂将干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入到大肠癌细胞SW480中;用Western blotting从蛋白水平检测干扰效果;分别采用肿瘤侵袭粘附实验和明胶酶谱分析法检测pRNAT-U6.1/Neo-survivin对SW480细胞的侵袭和转移潜能的影响.结果 Survivin基因的蛋白表达均得到显著抑制;沉默SW480的survivin基因可以显著抑制SW480细胞的侵袭和转移潜能,而且survivin基因表达被抑制后,SW480细胞分泌基质金属蛋白酶明显减少.结论 Survivin基因可能在SW480的侵袭和转移潜能中起重要作用,沉默SW480的survivin基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶分泌,因而survivin影响SW480的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关.     

X线照射对大肠癌细胞株Lovo细胞TNFR-p55表达及释放的影响

目的 研究X线照射在体外培养人大肠癌细胞株LoVo后．其膜TNFR-p55表达及释放sTNFR-p55情况。方法免疫细胞化学检测细胞膜TNFR-p55蛋白的表达．EUSA法检测培养上清中sTNFR-p55水平,流式细胞仪分析细胞凋亡率,光镜观察细胞形态变化。结果x线照射后的细胞膜TNFR-p55蛋白表达显著增强（P〈0．01）;照射后大肠癌Lovo细胞上清sTNFRR-p55水平显著低于照射前sTNFRR-p55水平（P〈0．01）;光镜发现细胞体积缩小、变圆、胞浆浓缩、核固缩深染;流式细胞仪分析细胞凋亡率显著增高（P〈0．05）。结论x线可通过上调细胞膜TNFR-p55蛋白的表达,抑制其脱落释放sTNFRR-p55到上清中,诱导细胞凋亡增强照射肿瘤的杀伤作用。     

原发性骨淋巴瘤1例报道

患者女，54岁，因“腰背部疼痛1年，伴发热盗汗8月”于2003—03—24入院。1年前因劳累后腰背部疼痛于外院行MRI检查，结果示第5胸椎椎体压缩性骨折。2002年7月始自觉疼痛加重，出现畏寒、发热，体温最高达40℃，伴夜间盗汗，每次疼痛与发热平行。2002—08—10始在其他医院住院治疗，经腹腔及盆腔CT、胃钡餐、肠镜、骨穿及结核菌素试验检查均未见异